The Inhibitory Effects of Rh-endostatin(YH-16) in Combination with Radiotherapy on Lung Adenocarcinoma A549 in Mice and the Underlying Mechanisms

In order to investigate the inhibitory effects of Endostar(rh-endostatin,YH-16)in combination with radiotherapy on lung adenocarcinoma A549 in mice and the interaction mechanisms of combined therapy,the transplantation tumor models of A549 lung adenocarcinoma were established.When the largest diameter of tumor reached 1.0cm,all nude mice were randomly divided into 4 groups:Endostar group,radiotherapy group,radiotherapy plus Endostar(combined treatment)group,and control group(n=6 in each group).The largest d...

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。

不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义

目的 初步探讨E 钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌细胞A5 49体外立体培养 ,同时进行普通平面培养 ,通过流式细胞技术、Westernblot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期 ,E 钙粘素的表达 ,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性。结果 ①立体培养细胞存在E 钙粘素的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞出现细胞周期G1 期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现 ,给予E 钙粘素阻滞剂SHE78 7后 ,两者差异明显缩小。结论 E 钙粘素介导的细胞 细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡 ,影响肺腺癌A5 49细胞对ADM的敏感性 ,在肿瘤群集耐药中发挥作用。

Mir-16对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

【目的】探讨基因Mir-16在肺腺癌细胞株A549中的表达状况以及Mir-16对A549细胞生物学行为的影响。【方法】Mir-16在肺腺癌细胞中的含量采用实时荧光定量PCR的检测,后将Mir-16转染至A549细胞,用MTS、流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡及细胞周期。构建野生型及突变型WIP1 3’-UTR的荧光素酶报告载体,检测荧光素酶的相对活性,验证在肺腺癌中WIP1是Mir-16的作用靶点。【结果】在人肺腺癌A549细胞中Mir-16呈低表达;将Mir-16转染至A549细胞后表达上升,并可促进A549细胞的增值率明显降低;早期凋亡的细胞比例增加;处于G1期的细胞比例明显增加,处于S期的细胞比例明显减少。与各对照组相比,Mir-16显著抑制野生型WIP1-3’UTR表达载体的荧光素酶活性。【结论】Mir-16在肺腺癌细胞中低表达,并抑制肺腺癌细胞的增殖及促进细胞的早期凋亡,有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点。

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloids from Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系。方法应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变。结果THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多)。结论THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:不同浓度的人参皂苷CK作用于人肺腺癌A549细胞株,MTT比色法测定细胞增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;ELISA法检测细胞内源性VEGF含量的变化。结果:人参皂苷CK对A549细胞增殖有抑制作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖关系;倒置显微镜下可观察到细胞明显的形态学改变;流式细胞仪可检测到实验组细胞出现明显的凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;实验组细胞培养液中的VEGF低于对照组(P<0.05),且随着人参皂苷CK浓度增加和作用时间的延长,VEGF的含量降低(P<0.05)。结论:人参皂苷CK可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并能抑制其内源性分泌VEGF。

肺癌A549细胞COX-2与MMP-2表达的关系

目的:探讨肺癌A549细胞环氧化酶-2(COX-2)表达和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达之间可能潜在的关系。方法:①用Western blot法检测对照组和干预组(5、10、15μg/mL脂多糖(LPS)干预12 h,10μg/mL的LPS干预6、12、24 h)A549细胞MMP-2蛋白质表达;②用ELISA法检测对照组和干预组A549细胞培养上清液COX-2活性产物前列腺素E2(PGE2)及MMP-2的变化。结果:①在5、10、15μg/mL的LPS 12 h诱导下,肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;②10μg/mL的LPS干预肺癌A549细胞6、12、24 h后MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;③肺癌A549细胞PGE2与MMP-2正相关(r1=0.980,r2=0.975)。结论:①肺癌A549细胞PGE2与MMP-2密切相关;②肺癌A549细胞可能通过激活肺癌A549细胞MMP-2,参与肺癌的侵袭与转移。

丁酸、全反式维甲酸对肺腺癌细胞株A549β-连环素、c-myc表达的影响

目的:观察多种浓度丁酸、全反式维甲酸以及联合应用对肺腺癌细胞株A549β-连环素(β-catenin)及c-myc基因表达的影响。方法:用免疫组化法检测β-连环素(β-catenin)及c-myc基因表达情况。结果:经BA、ATRA处理72h后A549细胞β-cat、c-myc的AOD值降低,β-cat、c-myc蛋白阳性细胞比例减小,并呈剂量依赖性,其中BA和ATRA联合处理后较等浓度单药BA、ATRA作用更为显著。β-cat与c-myc的AOD值之间、β-cat与c-myc阳性细胞比例之间均分别呈正相关。结论:BA对肺腺癌A549细胞具有与ATRA相近的降低肺腺癌A549细胞β-cat、c-myc蛋白表达水平作用,并呈浓度依赖性,BA和ATRA联合应用具有良好的协同增效作用;BA、ATRA可能通过作用肺腺癌A549细胞Wnt信号通路影响细胞增殖。

重组人血管内皮抑制素注射液联合冷冻消融治疗肺腺癌A549移植瘤的实验研究

目的探讨重组人血管内皮抑素注射液(商品名:恩度)联合冷冻消融对肺腺癌A549移植瘤的抑制作用及机制。方法建立肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型24只,待肿瘤最大直径达1 cm时,随机分为对照组、血管内皮抑素组、冷冻消融组和血管内皮抑素联合冷冻消融组(联合治疗组)。治疗后第21天处死裸鼠,取肿瘤组织,测量肿瘤体积,采用末端标记法(TUNEL)原位检测周边冷冻损伤区带细胞凋亡,免疫组化SP法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果治疗后第21天,对照组、血管内皮抑素组、冷冻消融组和联合治疗组的肿瘤生长速率分别为236.68%±51.23%、220.02%±30.61%、159.46%±29.33%和103.34%±25.50%,组间差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率分别为21.67%±2.34%、22.17%±1.47%、38.33%±1.37%和49.17%±1.72%,组间差异有统计学意义(P<0.01)。联合治疗组的MVD、VEGF表达水平均明显低于其他各组(P<0.01)。MVD与VEGF之间呈正相关关系(r=0.925,P<0.01)。结论血管内皮抑素可明显提高冷冻消融对肺腺癌A549移植瘤的抑制效果,其机制可能与血管内皮抑素通过下调VEGF表达水平,从而抑制肿瘤新生血管形成,协同冷冻消融促进肿瘤细胞凋亡有关。

重组人p53腺病毒联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响

目的研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响,探讨rAd-p53增强顺铂对A549细胞抑制作用的机制。方法通过基因芯片检测技术,比较rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理后的肺腺癌A549细胞肿瘤相关基因表达的差异,采用SAM软件对结果进行分析。结果 rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理的A549细胞比较,15个基因表达显著上调,28个基因表达显著下调。结论 rAd-p53增强顺铂对A549细胞的抑制作用与导入外源性p53基因后,p53基因表达上调并引起调控细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的一系列基因的表达变化。

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。IC软件计算10%的细胞抑制浓度(IC10)。免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化。结果:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性。榄香烯乳作用24h后IC10为43.49μg/ml,Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有药物浓度相关性。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,榄香烯乳可上调凋亡相关蛋白表达、诱导凋亡。

丁酸、全反式维甲酸对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的 观察丁酸 (BA)、全反式维甲酸 (ATRA)单用及联合应用对肺腺癌细胞株A5 4 9体外增殖的影响。方法 采用绘制细胞生长曲线法、MTT比色法。结果 经BA、ATRA处理后A5 4 9细胞生长曲线趋于平坦 ,细胞增殖速度、倍增时间降低 ,72h、1 2 0h生长抑制率显著增高 ,并呈剂量依赖性 ,其中BA和ATRA联合处理作用后 72h、1 2 0h生长抑制率分别为 (72 .77±2 .5 4 ) %、(84 .0 3± 1 .5 8) % ,较等浓度单药BA、ATRA显著增强。结论 BA对肺腺癌A5 4 9细胞具有与ATRA相近的增殖抑制作用 。

MMP-7反义寡核苷酸抑制肺腺癌A549细胞体外增殖活性的实验研究

目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-7表达,MTT法检测A549细胞增殖,FCM检测A549细胞周期。结果相差显微镜下观察A549细胞转染ASODN后细胞体积变小,数目减少。MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制A549细胞的增殖,抑制作用在48h最强。免疫组化SABC法检测提示转染ASODN后A549细胞MMP-7蛋白表达水平明显降低。FCM检测显示MMP-7ASODN可以抑制A549由G0/G1期进入S期。结论MMP-7ASODN可以特异性地抑制肺腺癌A549细胞株MMP-7蛋白的表达,调控细胞周期,抑制细胞增殖。

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfromtripterygiumhypoglaucumhutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响。方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高。结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡。

双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响研究

目的:考察双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响。方法:将双脱甲氧基姜黄素脂质体作用于体外培养人肺腺癌A549细胞,分别应用形态学观察、MTT检测、流式细胞仪检测观察其生长形态、细胞周期等生物学特性变化。结果:显微镜下可见A549细胞形态明显改变;双脱甲氧基姜黄素脂质体对A549细胞增殖有抑制作用,其IC50为12.108μg/ml;流式细胞仪显示细胞周期阻滞在S期。结论:双脱甲氧基姜黄素脂质体可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,在肺腺癌治疗中有一定应用前景。

低氧条件下三氧化二砷对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:对比研究常氧和低氧条件下三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。方法:分别在常氧(21%O_2)和低氧(5%O_2)条件下以1、2、4μmol/L As_2O_3处理人肺腺癌A549细胞,12、24、48 h后收集细胞,以MTT法检测细胞增殖抑制率,以Annexin V-PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,分析两种条件下As_2O_3对细胞增殖抑制率及凋亡率的影响。结果:常氧及低氧条件下,细胞增殖抑制率、细胞早期凋亡率及总凋亡率均随As_2O_3浓度的增加及作用时间的延长而增加(均P<0.05),晚期凋亡率变化不显著。在As_2O_3相同浓度、相同处理时间,低氧条件下细胞增殖抑制率及凋亡率较常氧条件下无明显降低。结论:As_2O_3可促进细胞凋亡,显著抑制A549细胞增殖,且在低氧条件下的上述作用未见减弱。

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。

吗啡对人肺腺癌细胞A549侵袭与迁移的影响及机制研究

目的探讨吗啡对人肺腺癌细胞A549侵袭和迁移能力的影响。方法人肺腺癌细胞A549培养板接种培养24 h后,分别加入生理盐水(对照组)、0.3μg/ml吗啡、3μg/ml吗啡和30μg/ml吗啡孵育48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、Ezrin和Fascin蛋白的表达。结果与对照组比较,3μg/ml和30μg/ml吗啡组处理A549细胞48 h后细胞侵袭数增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,3μg/ml和30μg/ml吗啡组处理A549细胞48 h后细胞迁移率增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,30μg/ml吗啡作用A549细胞48 h后,MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吗啡可增强人肺腺癌细胞A549的侵袭和迁移能力,且呈剂量依赖性;其机制可能与MMP-2、MMP-9、Ezrin和Fascin表达上调有关。

端粒双靶点抑制对肺癌细胞A549衰老的影响

目的观察两种端粒相关的反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞A549形态、功能、凋亡及细胞传代的影响。方法将培养的A549细胞随机分为空白对照组、端锚酶正义寡核苷酸对照组(sTANKS)、端粒酶催化亚单位正义寡核苷酸对照组(shTERT)、端锚酶反义寡核苷酸实验组(asTANKS)、端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸实验组(ashTERT)、端锚酶及端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸联合实验组(asTANKS+ashTERT),分别与不同的正、反义寡核苷酸作用,光学显微镜下观察细胞形态,细胞氚摄取率([3H]-TdR)监测细胞利用合成DNA的胸腺嘧啶的能力,β-半乳糖苷酶(X-Gal)转染效率评估细胞衰老状态下的应激能量代谢,hoechst33342荧光染色检测A549细胞凋亡,通过传代实验分析细胞寿命。结果联合作用的两种反义寡核苷酸(ashTERT+asTANKS)能明显诱导A549细胞的衰老及凋亡,抑制DNA合成的含氚的胸腺嘧啶的摄取,增加细胞衰老状态的β-半乳糖苷酶(X-Gal)转染效率;并使A549细胞平均寿命明显缩短,在经过(24.53±0.40)次倍增后发生传代终止,与单独作用的asTANKS或ashTERT相比均有明显的差异。结论两种针对端粒的反义寡核苷酸的联合作用,使A549细胞从形态及功能上倾向于衰老、"去永生化",有可能成为新的抗肿瘤药物靶点。