Warm HTK donor pretreatment reduces liver injury during static cold storage in experimental rat liver transplantation

BACKGROUND： Organ shortage has led to an increased number of transplantations from extended criteria donors. These organs are more vulnerable to ischemia-reperfusion injury. Thus, improvement of organ preservation is needed. HTK is a widely used preservation solution for static cold storage in liver transplantation. The present study was to investigate the beneficial effect of warm HTK donor pretreatment on liver preservation.

基于限制性立方样条模型分析肺移植受者多重耐药菌感染的危险因素

目的总结肺移植受者术后多重耐药菌(MDRO)的感染现状,分析感染相关危险因素。方法回顾性分析321例肺移植受者的临床资料,根据术后是否感染MDRO分为MDRO感染组(122例)和非MDRO感染组(199例)。总结肺移植受者感染MDRO情况,应用logistic回归模型分析肺移植受者感染MDRO的危险因素,结合限制性立方样条模型分析MDRO感染与呼吸机使用时间的剂量-反应关系。结果321例肺移植受者中,122例发生MDRO感染,感染率为38.0%。MDRO感染组检出229株病原菌,主要为革兰阴性菌(92.6%),排名前3的分别为耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(46.3%)、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(22.3%)和耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(14.8%)。MDRO感染以下呼吸道感染为主(61.5%),其次为呼吸机相关性肺炎(26.2%)。单因素分析结果显示,采用单肺移植手术方式、术后使用体外膜肺氧合(ECMO)时间长、手术时间长、尿管插管时间长、中心静脉置管时间长、呼吸机使用时间长是肺移植受者MDRO感染的危险因素(均为P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,采用单肺移植手术方式、呼吸机使用时间长是肺移植受者MDRO感染的独立危险因素(均为P<0.05)。限制性立方样条模型分析结果显示,使用呼吸机20 d内,随着呼吸机使用时间的增加,感染风险持续增加;20 d后,延长呼吸机使用时间不增加感染发生的风险,呈现平台效应。结论肺移植受者MDRO感染率呈逐年下降趋势,采用单肺移植方式、呼吸机使用时间长是肺移植受者MDRO感染的独立危险因素。

大鼠在体肺低温缺血再灌注损伤模型的建立(英文)

目的:为探讨缺血-再灌注(IR)对移植肺损伤的可能机制,建立大鼠在体肺低温IR损伤模型。方法:模拟临床肺移植建立大鼠在体肺低温IR损伤模型。分别于游离左肺门(对照组,A组)、缺血4h(缺血组,B组)和缺血4h再灌注4h(IR组,C组)后测定动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、气道峰压(Paw)以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和左肺含水量,并取左肺组织作病理学观察。结果:所有动物术后全部存活。PaO2、Paw、BALF蛋白含量及左肺含水量,C组与A组及B组之间的差异显著(P<0.01);三组间PaCO2无明显差异(P>0.05);肺病理改变以C组最严重。结论:该方法的建立为研究IR对移植肺的损害机制提供了较为理想的动物模型。

非套管法大鼠异体原位单肺移植动物模型的建立

目的建立稳定的大鼠非套管法异体原位左肺移植模型。方法使用250～350 g Sprague Dawley（SD）大鼠进行实验,采用显微外科技术,分别连续缝合支气管和肺动、静脉,建立大鼠异体原位左肺移植模型。观察大鼠存活时间,移植肺脏血管、支气管吻合口通畅性。结果10只接受左肺移植的受体大鼠均成功脱离呼吸机,供肺冷缺血时间约40 min,热缺血时间约40 min,总手术时间约130 min。解剖后检查示各吻合口均通畅。结论非套管法大鼠原位左肺移植模型具有稳定、可靠、接近临床肺移植的优点。

广西巴马小型猪用于心脏移植的研究

目的：探讨广西巴马小型猪游离心脏保存与心脏移植的意义和价值。方法：广西巴马小型猪24头（25~30 kg）,按随机方法分为供体组（n=12）和受体组（n=12）。两组麻醉后行胸部前正中切口。供体组先行前腔静脉放血,阻断升主动脉灌注心脏停跳液（4℃改良Thomas液）,切取的心脏置入4℃生理盐水,用UW液冲洗至清亮,低温保存8 h。受体组常规建立体外循环,全身降温至30℃。心肺机的灌注量为70 mL/kg。阻断升主动脉。切除受体组的心脏,保留左心房后部。供体心脏按原位放入受体心包内,连续外翻缝合左心房全部—右心房大部分,肺动脉半周和主动脉的全部;开放主动脉阻断钳、心脏复跳后继续完成肺动脉、右心房其余部分的吻合。心肺复苏,并行循环2 h。进行血流动力学测定。结果：实验中未见呼吸抑制而死亡。12头巴马小型猪供体心脏植入受体后,心脏均可复跳,未发生漏血现象并可以脱离体外循环。结论：广西巴马小型猪用于心脏移植的研究是较理想的动物之一。

药物预处理在兔心肺保存中的作用

目的 应用 Kaneko兔异位心肺移植模型研究苯肾上腺素预处理在兔心肺保存中的作用。方法 32只健康雄性青紫蓝兔随机分为两组 ,各 16只。实验组心肺获取前给予苯肾上腺素 5 0μg· kg- 1 预处理 ,对照组给予等量生理盐水 ,两组心肺均保存 4h后移植。心肺移植体转为自主功能状态后 ,连续观察 2 h,每 30 min测定左室收缩压、左室舒张末压、右房压、动脉血氧分压 ,以评定移植体功能。实验结束时取心肺组织测定丙二醛 ( MDA)和超氧化物歧化酶 ( SOD)的含量。结果 实验组心肺功能优于对照组 ,心肺组织 MDA含量低于对照组 ,SOD含量高于对照组。结论 苯肾上腺素预处理可加强低温保存时兔心肺保护作用 。

改良EC液低温灌注犬肺离体肺组织形态学变化的研究

目的观察犬肺移植中供体离体保存后肺组织随时间延长而产生的结构变化。方法4℃改进型EC液灌注6只健康成年杂种犬肺,灌注结束后离体保存30、60、120、180、240 min。取材制作组织标本,观察不同时间点肺组织结构变化,以灌注前作为对照组。结果0 min时肺组织结构清晰完整,肺泡上皮细胞线粒体轻微肿胀;30 min时肺泡壁、血管周围组织轻微水肿;60 min时肺泡壁结构轻度破损,肺泡上皮细胞肿胀,线粒体肿胀较明显;120 min时部分肺泡壁断裂,肺泡腔融合;180 min时肺泡壁断裂,肺泡腔融合形成少量肺大泡;240 min时肺泡壁断裂,肺泡腔融合形成多个肺大泡,肺泡上皮细胞泡浆空泡变,Ⅱ型肺泡细胞板层小体模糊不清, 空泡变明显,微绒毛已消失。结论改进型EC液离体保存4 h内对离体保存肺组织细胞无明显损伤,4 h后肺损伤较为严重。

颈部袖套法建立小鼠-大鼠异种心脏移植模型

背景:小动物心脏移植模型是器官移植基础与临床研究的常用模型和重要手段,移植部位多为颈部和腹部。其中颈部异位移植最大的优点在于移植心位于颈部皮下,有利于对供心搏动情况进行直接观察,进而早期预判排斥反应的发生。目的:对小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型的麻醉方式、手术操作、围手术期处理等方面进行改进,以期建立更加稳定的动物模型。方法:采用改良袖套法建立异位异种心脏移植模型,将小鼠供心移植到受体大鼠的右侧颈部,主要改进了摘取供心的方法,并使用小动物麻醉机进行异氟烷吸入性麻醉。模型建立分为练习、稳定和定型3个阶段。取部分实验标本做组织病理学检查。结果与结论:模型建立练习阶段、稳定阶段和定型阶段手术成功率分别为53.33%,85.71%和96.15%,稳定及定型阶段手术成功率明显高于练习阶段(P<0.05);稳定和定型阶段手术总操作时间明显短于练习阶段(P<0.05)。组织病理学结果显示,异种心脏移植后出现供心血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血和炎症细胞浸润等现象,较正常心脏和同系移植均有明显改变,并且有随移植术后时间延长而逐渐加重的趋势,证实了模型的可靠性。提示小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型操作简便、稳定可靠,短时间内即可熟练掌握,成功率高,是研究异种移植排斥反应的理想动物模型。

温度对犬肺灌注保存效果的影响

目的评价不同温度灌注和保存犬肺对肺保存效果的影响。方法将24只犬随机分为实验组和对照组两组,每组供、受体各6只。实验组以23℃低钾右旋糖酐(LPD)液灌注后切取右肺保存于10℃LPD液,对照组以4℃LPD液灌注后切取右肺保存于4℃LPD液,其后两组均行左肺移植术。比较两组供体肺组织不同时间段的髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量及湿/干重量比(W/D),比较两组受体犬移植前后不同时间肺血流动力学参数以及血气分析指标,并比较病理结果。结果与对照组相比,实验组肺组织灌注后各时间段的MPO活性、丙二醛含量及W/D较低(P<0.05)。实验组受体犬移植后的肺毛细血管楔压(PCWP)、平均肺动脉压(MPAP)较低,动脉血氧分压(PaO2)较高,差异均有统计学意义(均为P(0.05)。病理学结果显示,实验组肺组织中性粒细胞浸润、肺泡水肿及损伤等病理变化较对照组减轻。结论在本实验条件下,与4℃灌注+4℃保存相比,23℃灌注+10℃保存的温度对犬肺具有较好的保存效果,更适用于实验肺移植。

大鼠自体左肺原位移植模型的建立

目的 建立大鼠自体左肺模拟原位移植模型 ,探讨缺血 -再灌注 (IR)对移植肺功能损伤的可能影响。方法 模拟临床肺移植建立大鼠自体左肺原位移植模型。分别于游离左肺门 (对照组 )、缺血 4小时 (缺血组 )和缺血 4小时再灌注 4小时 (IR组 )后测定动脉血氧分压 (Pa O2 )、动脉血二氧化碳分压 (Pa CO2 )、气道峰压 (Paw)及支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中蛋白含量和左肺含水量 ,并取左肺组织作病理学观察。 结果 所有动物术后均存活。 Pa O2 、Paw、BAL F蛋白含量及左肺含水量 ,IR组与对照组和缺血组之间比较差别均有显著性意义 (P<0 .0 1) ;3组间 Pa CO2 无明显差别 (P>0 .0 5 ) ;IR组病理改变最严重。 结论 该方法的建立为研究 IR对移植肺损伤机制提供了较为理想的动物模型。

常温不停跳保存供心的超微结构和动力学变化

背景:心脏移植供心保护方法有向心脏正常生理状态改进的趋势,以期延长供心保存时间,改善供心的保存质量。理论上供心常温不停跳灌注保存是一种最接近生理状态的保存方法,有良好的发展潜力。目的:观察连续灌注不停跳供心常温长时间保存心肌超微结构和左室血流动力学的变化。方法:广西巴马小型猪24只,按随机数字表法分为不停跳连续灌注组和冷保存组,每组各6对。不停跳连续灌注组供心在顺行连续灌注跳动状态下切取,应用氧合血37℃、保存8h后移植。冷保存组供心应用UW停搏液灌停后,0-4℃UW液保存8h后移植。移植主动脉开放3h观察供心左心室收缩压、左心室舒张压、左室平均压、左室舒张末压、左室内压最大上升和下降速率。记录移植后心律变化,需要除颤例数,以及主动脉开放3h后能否脱离体外循环。主动脉开放3h后取供心左心室前外侧壁心肌组织,观察线粒体及肌膜改变。结果与结论:不停跳连续灌注组供心移植后左心室收缩压、左室平均压、左室舒张末压、左室内压最大上升和下降速率均优于冷保存组(P<0.05);主动脉开放后不停跳连续灌注组均可保持窦性心律,冷保存组仅1例自主恢复窦性心律;主动脉开放后3h不停跳连续灌注组5例可顺利脱机,冷保存组1例可以脱机;不停跳连续灌注组心肌超微结构保存良好。提示供心常温灌注不停跳方法有良好的心肌保护效果,适于供心的长期保存。

大鼠同种异体左肺原位移植模型的方法改进

目的建立一种更简单有效的大鼠左肺原位异体移植模型。方法持续供肺肺动脉低压灌注4℃的低钾右旋糖苷(LPD)液,采用连续外翻法褥式缝合吻合支气管膜部、肺静脉、肺动脉,快速建立大鼠左肺原位移植模型。结果60只SD大鼠接受左肺移植,平均吻合时间(36.2±9.6)min,手术成功率91.7%。术后抗免疫治疗,1周存活率为70.9%;2周存活率为50.9%;4周存活率为21.8%。术后肺动脉栓塞1例,死于术后第3天,余所有受体大鼠没有发现吻合口狭窄及栓塞。结论该新的模型对于研究肺移植供肺保护、缺血再灌注损伤以及急、慢性排斥反应等近远期的相关问题,具有简单可靠、存活时间长的优点。

大鼠供肺冷保存离体灌注模型的建立

目的建立以充氮膜肺、体外循环机为基础的离体肺灌注平台,用以研究移植供肺保存的效果。方法选取36只SD大鼠,用4℃LPD液经左心房逆行灌注,低温保存6 h后经离体灌注装置进行试验,经热交换器后血液温度维持在37℃,氮气与血流量比为2:1,可造成静脉血,以此灌注肺动脉,同时给予呼吸机辅助呼吸,采取经肺静脉流出道的血液行血气分析,评估供肺功能。结果整个灌注过程中各个时段流入供肺的静脉血血气分析显示PO2、PCO2无显著差异(P>0.05),可提供满意的静脉血,流出道PO2升高、PCO2降低,可反应供肺氧合能力。结论采用此灌注模型可将动脉血转化为静脉血,并持续灌注供肺,并能较好的反应供肺的功能。

尼可地尔减轻大鼠供体肺缺血/再灌注损伤的实验研究

目的研究钾离子通道开放剂尼可地尔对低温保存后大鼠供体肺缺血/再灌注损伤的作用。方法24只健康雄性SD大鼠随机分为3组,A组为常规保存组,B组为尼可地尔(NCR)组,C组为尼可地尔+格列本脲(NCR+GLY)组。再灌注过程中每15 min测定动脉血氧分压,以评定移植体功能。实验结束时取肺组织测定丙二醛(MDA)的含量,测湿干比(W/D值)及观察超微结构改变。结果B组肺PvO2,W/D及超微结构改变显著优于A组和C组(P<0.05),同时,B组再灌注前、后肺组织MDA含量较A组和C组显著降低(P<0.05)。A组和C组各项指标无显著性差异,GLY阻断了NCR的有益作用。结论钾离子通道开放剂可减轻低温保存后的大鼠肺缺血/再灌注损伤。

心脏不停跳法猪供心保存模型的建立

目的研究心脏不停跳法猪供心保存模型的建立,评述其意义及价值。方法选用25～30 kg的广西巴马猪12头,6头只用于采血,6头取心脏作为供心模型。全麻下,胸部正中切口,全身肝素化(4 mg/kg),从上腔静脉放血500 ml;阻断并切断头臂干插灌注管,切断上腔静脉和右上肺静脉回收血液,灌注心脏停跳液使心脏停跳。切断降主动脉起始部和两大分支,取下的心脏经肺静脉和二尖瓣口置入左心室引流管。用自行组装的灌注装置连续灌注氧合温血液,维持心脏空跳8h。结果 6只供心都完好地保存了8h,保存期间除了1例出现短暂的心房传导阻滞(2:1)外,其余无发生心律失常。红细胞压积从灌注1h(T_1)到5h(T_5)逐渐升高,从T_7到T_8逐渐降低;游离钙离子和钾离子有逐渐升高的趋势;pH和BE有逐渐降低的趋势。心脏不停跳保存灌注压变化从T_1到T_4灌注压力呈逐渐下降,以后就处于一个相对稳定的数值。冠状静脉血氧分压(56.62±6.93)mmHg。心脏表面无干燥或水肿现象。结论 "广西巴马小型猪"是进行心血管系统疾病研究理想的实验动物,离体猪心不停跳模型的建立对移植供心保存的研究有更重要的意义和价值。

同种异体单肺移植7例报告(英文)

总结7例同种异体单肺移植资料的移植方案、肺保存及移植后管理监测情况。7例同种异体单肺移植患者中特发性肺纤维化3例,慢性阻塞性肺病2例,双侧矽肺、肺气肿1例,双肺结核右毁损肺1例。7例供体均为脑死亡者,供肺均采用Euro-Colins液或低钾右旋糖酐液灌注并良好保存。受体与供体血型匹配,5例患者行右侧单肺移植,2例行左侧单肺移植。肺支气管、肺动脉为端端吻合,肺静脉为心房-心房吻合。移植前后均常规应用抗生素和免疫抑制剂。肺移植后进行全面指标监测,包括心肺功能、抗生素使用及免疫抑制药物的调整。7例患者均未出现支气管、肺动静脉吻合口并发症。5例移植后2个月内死亡,1例存活近1年,另1例存活近2年。死亡者中4例死于肺感染导致多脏器功能衰竭,1例死于多曲霉菌感染致严重肺出血。6例移植后出现排斥反应,其中1例出现3次。肺移植手术适应证的选择、供肺的选择和保存、肺移植操作以及移植前后的管理已逐渐成熟,移植前心肺功能差者、移植后使用免疫抑制药物同时合并严重感染者病死率仍很高。

微型体外循环机充氮建立离体肺灌注工作模型

采用自制微型体外循环机充氮气建立离体肺灌注工作模型，用以研究供体移植肺保存的效果。对３２只新西荫兰白兔离体肺保存６小时后进行实验研究，微型体外循外机的氮气流量与血流量之比为２：１时，可造成ＰＯ２＜５ＫＰａ的模拟静脉血，用这样的血灌注肺动脉并分别采取肺动、静脉血做血气分析，可了解肺保存后的换气功能。此外还可测定肺动脉灌注压和气道压的变化。

大鼠肺移植模型的改良

背景:建立大鼠原位肺移植模型是研究肺移植后慢性排异反应的关键,但因其需要精细外科技术,难度较大,限制了这一模型的应用。目的:改良麻醉和肺移植过程,建立快速、安全、具有可重复性的大鼠肺移植模型。方法:共完成42只大鼠动物实验,供体受体各21只。采用胸骨正中切口解剖供体左肺并置入套管(用静脉留置针套管剪取1.5mm长制成)获取大鼠供肺。大鼠受体经左侧开胸,利用套管技术吻合完成供肺植入。记录并计算手术时间及移植成功率。结果与结论:移植后大鼠均存活,大鼠供肺获取时间平均为(35.3±5.1)min;供肺套管时间平均为(12.5±4.6)min;大鼠受体肺移植时间平均为(50.2±3.3)min;吻合时间平均为(27.7±6.2)min。开放肺动、静脉血流后,全肺迅速变红,血流灌注充分,静脉回流通畅;恢复机械通气后,所有移植肺膨胀良好。结果证实,改良后的麻醉和肺移植技术可为大鼠肺移植的免疫与排异研究提供稳定、可靠、可重复的动物模型。

棉子糖低钾右旋糖酐液供体肺灌注保存的临床病理学研究

目的 探讨棉子糖低钾右旋糖酐液（raffinose-low-potassium dextran solution,R-LPD液）供肺灌注低温保存后的组织形态学变化。方法 应用光镜、电镜和免疫组化技术对R-LPD液灌注的18例肺移植供肺标本按不同的时间段进行观察。结果 R-LPD供肺灌注低温保存的最佳时间是6-8h,随着保存时间延长,供体肺的形态结构改变也逐渐明显,保存30h时,可见肺泡壁及血管周围间质组织水肿,肺泡间隔断裂,部分肺泡上皮细胞变性、坏死、脱落。结论 R-LPD液在肺移植冷缺血保存期中起较好的肺泡上皮细胞保护作用,比低钾右旋糖酐液（low-potassium dextran solution,LPD液）具有明显的优越性。

抑肽酶对离体模拟肺移植兔供体肺功能及细胞凋亡的影响

目的探讨低钾右旋糖酐液(LPD)中加入抑肽酶对供体肺功能的保护作用及供体肺细胞凋亡的影响。方法24只健康纯种新西兰大白兔随机分为两组,A组用LPD液(70ml/kg)经肺动脉灌注供体肺,B组用含150kU/ml抑肽酶的LPD液(70ml/kg)灌注供体肺,4℃保存16h,应用肺移植动物模型模拟肺移植过程1h。循环灌注期间每隔10min记录肺动脉压(PaP)、气道峰压(PawP),并检测供体肺血气标本(PaO2、PaCO2),计算肺泡-动脉血氧差(A-aDO2)、肺顺应性(CL)。光镜、电镜观察各组供体肺移植前后的组织变化;TUNEL-Fluorescein及PI双染色法定量观察各组供体肺移植前后细胞凋亡变化,分析细胞凋亡与供体肺功能的关系。结果再灌注早期(前20min)两组供体肺氧合能力无差异,再灌注30min后各时段,A组PaO2低于B组(54.42～118.87mmHgvs112.33～183.73mmHg,P<0.01);B组供体肺在整个灌注过程中能保持良好的氧合能力(PaO2≥112.33mmHg)。再灌注末期,A组PaCO2及含水量均明显高于B组(50.96mmHgvs41.42mmHg,P<0.01;88.90%vs82.48%,P<0.001),B组供体肺的PaP、PawP、CL则明显优于A组。光镜及电镜观察见A组供体肺细胞结构破坏,间质水肿,而B组则基本保持正常结构。两组供体肺移植后均出现明显的细胞凋亡,且A组凋亡指数明显高于B组(24.67%vs15.50%,P<0.01)。供体肺凋亡指数与PaO2、CL呈负相关(r=-0.895,r=-0.683,P<0.001)。结论LPD液中加入抑肽酶可提高移植术后供体肺功能,抑制移植后早期供体肺细胞的凋亡;细胞凋亡可能是供体肺移植术后早期肺功能减低的原因之一。