六味地黄汤活性部位3A的免疫调节作用机理研究

目的 :对六味地黄汤活性部位 3A的免疫调节作用机理进行初步研究。方法 :观察 3A对环磷酰胺 (Cy)处理小鼠 ,荷瘤小鼠和快速老化小鼠的T细胞亚群 ,B细胞产生IgG水平 ,γ干扰素 (IFN γ)mR NA的表达水平的影响及体外活性研究。结果 :口服给予 3A对 3种模型小鼠脾脏T细胞亚群的变化均具有不同程度的恢复作用 ,并促进快速老化小鼠脾细胞分泌IgG ,提高Cy处理小鼠脾细胞IFN γmRNA的表达水平。结论 :3A对免疫功能的改善作用与调节T。

激活淋巴细胞cDNA单链库的构建

介绍一种激活淋巴细胞cDNA单链库构建方法 ,此库具有良好的模板活性 .

胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3表达水平及其与临床病理特征的相关性研究

目的分析胃癌患者血清DKK-1、人附睾蛋白(HE)4、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)-1和淋巴细胞活化基因(LAG)-3水平及其与临床病理特征的关系。方法选取60例胃癌患者作为研究组,另选60例同期进行健康体检的体检者作为对照组。比较两组研究对象、不同临床病理特征胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1和LAG-3的表达水平,并分析胃癌患者预后的影响因素。结果研究组血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于对照组(均P<0.05)。不同TNM分期、胃癌细胞分化程度、淋巴结转移情况胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平差异均有统计学意义(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1水平均高于Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者,血清LAG-3水平低于Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者;胃癌细胞分化程度越高,患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1表达水平越高,血清LAG-3表达水平越低;伴有淋巴结转移胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于无淋巴结转移患者(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,TNM分期和血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平是胃癌患者死亡的独立危险因素(均P<0.05)。结论胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3呈高表达水平,其与胃癌的临床分期、淋巴结转移、胃癌细胞分化程度密切相关,均为胃癌患者死亡的独立危险因素。

Foxp3在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中的表达及作用机制

目的 观察慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tregs）特异性标志物Foxp3mRNA的表达水平，以及Foxp3蛋白在活检肝组织中的表达及定位情况，并分析其与病理炎症活动度的相关性，以探讨Tregs在CHB发病中的特性及作用机制。方法选取进行肝组织活检的CHB组103例，并设对照组（G0）16例。应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA水平，并对肝组织进行苏木素-伊红（HE）染色，进行病理炎症活动度分级（G0～G1）。免疫组织化学法测定肝组织中Foxp3表达，并进行半定量分析。结果CHB组（G1～G4）外周血单个核细胞Foxp3mRNA均高于对照组（G0），3．57±0．59、3．71±0．32、3．74±0．77、4．45±0．39VS3．32±0．87（P〈0．05），且G4组Foxp3mRNA水平明显高于其他各组（P〈0．05）；肝组织汇管区及小叶内Foxp3分值均高于对照组（P〈0．01或〈0．05），且随着炎症活动度的逐渐增加，各组汇管区阳性表达量逐渐增强，与炎症活动度呈正相关（rs=0．996，P〈0．05），但小叶内的阳性表达并无明显增强（rs=0．316，P〉0．05）。结论CHB患者外周血单个核细胞及肝组织中FoxP3的表达水平与病理炎症活动度具有显著相关性。Tregs具有主动调节抑制作用，迁延不愈的免疫损伤可能与机体缺少足够的Tregs抑制有关。

DNA聚合酶β活力测定在肺癌诊疗中的意义

DNA聚合酶β是一种重要的DNA修复酶,它在肿瘤诊断和治疗中的意义近年来才被人们关注。本文通过选用DNA聚合酶专一性抑制剂和~3H—TTP掺入法,测定了25例肺癌患者外周血淋巴细胞中DNA聚合酶β的活力,并与同期收治的14例肺结核病人相对照,旨在探讨测定该酶活力在肺癌诊断、鉴别诊断和治疗中的意义。结果显示,肺癌病人外周血淋巴细胞中DNA聚合酶β活力明显高于肺结核病人(P【0.05),这种现象在不同年龄肺癌病人(33～81岁)中均存在;化疗1至2周内,该酶活力出现下降(P【0.05),化疗后3周时仍有下降趋势,并且下降越明显,疗效越好。上述结果表明,肺癌病人外周血淋巴结胞DNA聚合酶β活力有异常升高,这对肺癌的诊断或鉴别诊断有一定辅助意义。同时也提示,通过分析肺癌病人化疗前后DNA聚合酶β活力,可能有助于对病人的疗效分析。化疗以后,该酶活力下降越多,肺癌的DNA修复能力削弱就越重,疗效相对较好。

支气管哮喘患者记忆CD_4^+T淋巴细胞活化相关基因的研究

目的筛选及鉴定支气管哮喘(简称哮喘)患者记忆 CD_4^+T 淋巴细胞活化相关基因。方法使用差异显示聚合酶链反应(DDPCR)方法筛选哮喘患者和健康人记忆 CD_4^+T 淋巴细胞差异表达基因,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测差异表达基因的 mRNA 表达水平。统计学处理采用 SPSS 10.0软件。计量资料采用±s表示,组间比较采用双因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果经 DDPCR 克隆获得了19条差异片段,经同源性分析显示其中2条片段分别与白细胞介素-7(IL-7)和 MM-1基因高度同源,采用 RT-PCR 检测进一步证实了这2个基因在哮喘患者激活的记忆 CD_4^+T 淋巴细胞中表达白细胞介素-7和 MMI 基因激活后分别为0.390±0.029、0.629±0.047(F 值分别为983、1264,P 均<0.05)。结论哮喘患者激活的记忆 CD_4^+T 淋巴细胞中 IL-7和MM-1基因的上调表达可能是哮喘患者与健康人对于变应原出现不同反应的分子机制之一。

人B细胞激活因子基因表达水平的荧光定量测定

目的 研究建立人B细胞激活因子(BlyS)mRNA荧光定量检测方法,探讨正常人外周血单个核细胞(PBMC)中BlyS基因表达水平。方法 基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-BlyS作为定量模板,在GeneAmp 5700型检测仪上,通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,以建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法;并对20名健康献血者外周血中BlyS表达进行检测。结果 FQ-RT-PCR的动态检测范围为104-109拷贝/μg RNA(r≥0.996),内参三磷酸甘油醛脱氢酶的动态检测范围为103-108拷贝/μg RNA(r≥0.998);低值的批内、批间的重复性分别为17.7％和24.3％,高值的批内、批间的重复性分别为5.3％和8.1％;20名献血员健康外周血的PBMC中均有BlyS mRNA的表达,范围为5.5×104-4.9×105拷贝/μg,均值为(1.7±1.4)×103拷贝/μg。 结论 成功建立人BlyS基因表达FQ-PCR检测方法,检测结果定量准确可靠,可用于BlyS基因表达与自身免疫性疾病发病机制的关系研究。

自身免疫病患者外周血中B细胞激活因子基因表达水平的测定

目的 建立测定B细胞激活因子 (B lymphocytestimulator ,BlyS)mRNA含量的荧光定量反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,并用来检测自身免疫病 [系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA) ]患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中BlyS的基因表达水平 ,探讨BlyS基因表达水平与自身免疫性疾病发病机制的关系。方法 构建克隆载体 pMD18 T BlyS作为定量模板 ,基于TaqMan荧光探针技术 ,建立实时荧光RT PCR方法在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 19例自身免疫病(SLE、RA)确诊病人、2 0例亚临床病人 (主要是抗核抗体阳性 )、8例其他对照性疾病患者 (自身抗体阴性 ,免疫球蛋白升高 )、2 0名正常健康献血者的外周血BlySmRNA表达含量。结果 19例自身免疫病确诊病人的PBMCs中均有BlySmRNA的表达 ,范围从 9 7× 10 5～ 3 2× 10 8拷贝 /μgRNA ,均值为 (8 4± 7 9)× 10 7拷贝 /μgRNA ;2 0例亚临床病人的强度为 8 6× 10 4～ 3 8× 10 6拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 3± 1 2 )× 10 6拷贝 /μgRNA ;2 0名正常健康人的强度为 5 5× 10 4～ 4 9× 10 5拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 7± 1 4 )× 10 5拷贝 /μgRNA ;8例自身抗体阴性而免疫球蛋白升高的其他疾病患者的强度为 5 8× 10 5～ 3 5× 10 7拷贝 /μgRNA ,均值为 (1

B细胞激活因子与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的从核酸(mRNA)和血清蛋白水平初步探讨B细胞激活因子(BlyS)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用机制。方法用自行建立的酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQRTPCR),对59例相对稳定期SLE患者和40名健康人血清BlyS含量、外周血单个核细胞(PBMC)中BlySmRNA含量进行检测;并比较SLE患者血清BlyS含量与外周血BlyS基因表达水平、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度和抗双链DNA(dsDNA)抗体滴度的相关性。结果59例相对稳定期SLE患者血清BlyS含量[(8.42±1.55)μg/L]明显高于健康对照组[(3.19±0.88)μg/L,P<0.001],并与IgG浓度、抗dsDNA抗体的滴度呈正相关性(分别r=0.442,r=0.850,均P<0.001)。与健康对照组相比,59例SLE患者中39例(66%)外周血BlyS基因水平明显升高(P<0.001),与血清BlyS含量呈明显正相关(r=0.652,P<0.001)。结论主要由BlyS基因异常表达所引发的高浓度BlyS血清蛋白是一明显的SLE免疫病理特征;BlyS作为SLE发病的重要调控因子,可能在自身反应性B细胞的活化和促进特异性自身抗体的产生中均发挥着重要作用。

异位性皮炎患者皮损信号转导子和转录激活子6mRNA的表达

目的探讨异位性皮炎患者皮损内信号转导子和转录激活子6(Signaltransducer and activator of transcription-6,STAT6)的表达及其临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应法测定15例异位性皮炎患者皮损内及15例正常对照者皮肤内STAT6mRNA的定量表达,采用湿疹面积及严重度指数(Eczema area and severity index,EASI)评分评估患者病情,分析异位性皮炎患者皮损内STAT6 mRNA的定量表达与EASI评分相关性。结果异位性皮炎患者皮损内STAT6 mRNA的表达明显高于对照组皮肤内的表达(t=4.94,P=0.0002);异位性皮炎患者皮损内STAT6 mRNA的定量表达与EASI评分呈显著的正相关(r=0.77010,P=0.0008)。结论 STAT6 mRNA的过度表达可能参与异位性皮炎的发病,可以作为判断病情严重程度指标之一。