CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响

目的:观察CD99基因转染对霍奇金淋巴瘤L428细胞株表型、细胞周期与凋亡的影响。方法:L428细胞分为3组:转染CD99基因组、转染空质粒组及空白对照组。采用免疫细胞化学方法检测3组细胞CD15、CD30与CD99的表达,并用流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡。结果:与其他2组相比,转染CD99基因组L428细胞CD15、CD30表达消失,但可检测到CD99的表达。3组细胞周期分布存在差异,转染CD99基因组细胞阻滞于G2/M期(F=24.85,P<0.001)。3组细胞凋亡率相比,差异有统计学意义(F=45.30,P<0.001),其中转染CD99基因组细胞凋亡率为(12.7±4.6)%,高于转染空质粒组的(4.0±0.9)%和空白对照组的(3.6±1.6)%(P<0.05)。结论:CD99基因可能在霍奇金淋巴瘤的发生中起重要作用。

TNFR2通过Akt和Wnt/β-4-4atenin信号途径对L428淋巴瘤细胞增殖和耐药的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)通过蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)和Wnt/β-4-4atenin信号途径对L428淋巴瘤细胞增殖和耐药的影响。方法 L428细胞分为对照组、转染PcDNA3.1/TNFR2的上调组(UR组)、上调TNFR2并抑制Akt组(LY组)和上调TNFR2并抑制WNT通路组(DK组)。qRT-PCR检测各组TNFR2 mRNA表达,Western blot法检测TNFR2、磷酸化Akt(p-Akt)、Akt、β-4-4catenin蛋白表达,CCK-8法检测各组L428细胞增殖活性,分析阿霉素处理后IC50。过表达TNFR2后,采用TNFR2靶向拮抗剂处理,分别检测p-Akt、Akt、β-4-4catenin蛋白表达和细胞增殖率。结果 UR组、LY组和DK组TNFR2 mRNA和蛋白表达、p-Akt/Akt、β-4-4catenin均高于对照组,LY组p-Akt/Akt低于UR组,DK组β-4-4catenin低于UR组(P<0.05)。UR组、LY组、DK组细胞活力OD值均高于对照组,UR组高于LY组和DK组(P<0.05)。UR、LY和DK组IC50高于对照组,LY和DK组IC50低于UR组(P<0.05)。TNFR2拮抗剂处理后p-Akt/Akt和β-4-4catenin表达均降低,且L428增殖率明显下降(P<0.05)。结论 TNFR2通过Akt和WNT/β-4-4catenin途径促进淋巴瘤细胞L428增殖和ADM耐药,TNFR2可能是淋巴瘤治疗的新靶点。

硼替佐米促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428的凋亡

目的探究硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度的硼替佐米(0、10、30与50 nmol/L)培养L428细胞后,用倒置显微镜观察L428细胞形态;Hoechst33258染核观察细胞核;MTT法检测细胞活力;TUNEL染色试剂盒和Annexin V-FITC双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果与对照组相比,硼替佐米促使L428细胞出现拉丝、稀疏现象;细胞核出现核固缩和凋亡小体;硼替佐米浓度依赖性抑制L428细胞活力(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05);浓度依赖性下调Bcl-2蛋白水平(P<0.05);浓度依赖性上调cleaved caspase-3和Bax蛋白水平(P<0.05)。结论硼替佐米可能通过影响凋亡蛋白的表达促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡。

过表达CD99后霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞蛋白表达变化的蛋白质组学分析及验证

目的探索稳定过表达CD99前后霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞中差异表达的蛋白,并分析验证差异蛋白的功能。方法采用荧光差异凝胶双向电泳和质谱分析技术检测L428细胞稳定过表达CD99前后蛋白表达的差异,采用GOfact开放软件对差异蛋白进行聚类分析,筛选在细胞转化过程中起重要作用的蛋白,并分析验证其功能。结果筛选鉴定得到38个差异蛋白,其中在稳定过表达CD99的霍奇金淋巴瘤细胞株L428(L428-CD99细胞)中与CD99表达呈正相关的蛋白21个,呈负相关的蛋白17个,所得的38个差异蛋白中有32个蛋白参与了细胞的生物过程,35个蛋白参与了细胞的组成和构建,28个参与了抗氧化、蛋白结合、催化活性、酶调节、信号转导、结构分子、翻译调节和离子转运等多个方面,结论筛选得到38个差异蛋白,其中关于细胞骨架、细胞分化、信号通路、调节基因表达等蛋白的改变与H/RS细胞和B淋巴瘤细胞转化相关。