pRetro-On/LTβR在Jurkat细胞中表达和诱导细胞凋亡的研究

目的:构建pRetro-On/LTβR载体,获得可表达淋巴毒素β受体((lymphotoxin beta receptor,LTβR)的Jurkat细胞,探讨LTβR在T细胞凋亡中的作用。方法:应用PCR技术扩增LTβR cDNA片段,将PCR产物纯化后定向连接入pRetro-On载体;重组质粒转入大肠杆菌,LB-Amp培养基筛选阳性克隆,经质粒抽提、纯化、NotⅠ和BamHⅠ双酶切、测序,验证pRetro-On/LTβR载体的正确构建;通过脂质体转染T细胞传代系Jurkat细胞;强力霉素(doxycycline,DOX)诱导后,Western blot鉴定转染细胞中LTβR蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面LTβR表达;以配体LIGHT刺激表达LTβR的Jurkat细胞后以annexin-V-PI双染色流式细胞法检测细胞的凋亡。结果:双酶切及测序结果证实LTβR cDNA正确插入pRetro-On质粒;Western blot和流式细胞术结果证实了LTβR在Jurkat细胞内经DOX诱导得到了表达;表达LTβR的Jurkat细胞经LIGHT刺激后凋亡增加。结论:成功构建pRetro-On/LTβR质粒,pRetro-On/LTβR在Jurkat细胞中可以表达;表达LTβR的Jurkat细胞可以通过LIGHT-LTβR途径导致细胞凋亡。

淋巴毒素受体信号介导组织再生的研究进展

淋巴毒素α、β及其受体(lymphotoxin alpha receptor、lymphotoxin beta receptor,LTAR、LTBR)属于肿瘤坏死因子超家族,LTBR信号在淋巴器官发育、维持完整的淋巴结构、诱导抗病原体的免疫反应、介导器官组织的再生和肿瘤发生发展的过程中发挥了重要作用。LTBR信号主要通过非经典/经典核转录因子-κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)通路的信号转导来诱导趋化因子和黏附分子的分泌,从而促进细胞增殖与分化。LTBR信号不仅在自身免疫系统疾病中发挥作用,而且通过不同模型展现了其抗癌与促癌的双重功效。本文将重点围绕LTBR信号在多种器官生长发育和组织受损后的再生中所发挥的作用进行综述,以期为再生医学研究提供新的视角。

淋巴毒素β受体和核转录因子-κB经典通路P65在膀胱组织中表达的实验研究

目的探讨淋巴毒素β受体（LTβR）和核转录因子（NF）-κB经典通路因子P65在膀胱癌（BCa）和膀胱炎组织中的表达情况及与BCa临床病理指征的关系。方法采用实时荧光定量PcR检测108份新鲜膀胱组织标本（按照病理检查结果分为BCa组75份、膀胱炎组10份和正常膀胱黏膜组23份）中的LT[3R和P65的mRNA相对含量；采用免疫组织化学方法检测118份病理石蜡切片（BCa切片组73份、膀胱炎切片组30份和正常膀胱黏膜切片组15份）中的LTβR与磷酸化蛋白P65（p-P65）表达水平，并分析其表达与BCa分级分期和淋巴结转移等因素的关系。采用Kruskal-Wallis H验和χ2检验等比较不同膀胱组织间的LTBR与P65的mRNA和蛋白表达水平。结果（1）LTβR和P65mRNA相对含量在膀胱癌组中高于正常组[LTβR：29．4（14．2～46．7）×10-3、1．2（0．3～7．0）×10-3，Z=-5．508；P65：9．7（2．7～21．1）×10-3、1．0（0．8～1．8）×10-3，Z=-5．030，P均〈0．05]，两者在BCa进展[病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：18．2（2．1～31．3）×10-3、28．4（16．6—36．2）×10-3、47．9（34．3～70．5）×10-3，χ2K-W=20．378；P65：4．9（1．3—12．0）×10-3、7．4（3．0～21．9）×10-3、17．0（10．0～28．3）×10-3，χ2K-W=15．219，P均〈0．05]和淋巴结转移各组（阴性、阳性）[LTβR：27．2（9．7～40．1）×10-3、39．4（26．7—52．6）×10-3，Z=-2．552；P65：7．4（2．3～15．6）×10-3、13．4（6．7～23．3）×10-3，Z=-2．026，P均〈0．05]比较差异均有统计学意义。（2）IJTpR和p-P65蛋白阳性率在膀胱癌组中高于正常组（LTpR：69．8％、13．3％，χ2=16．600；P65：56．2％、6．7％，χ2=12．220，P均〈0．05）。LTBR和p-P65蛋白阳性率也在BCa进展（病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：56．3％、70．0％、90．4％，χ2=7．055；p-P65：40．6％、60．0％、76．2％，χ2=6．679，P均〈0．05）和淋巴结转移各组（阴性、阳性）（L113R：58．3％、92．0％，χ2=8．849；p-P65：52．1％、64．0％，χ2=5．088，P均〈0．05）比较差异均有统计学意义。（3）相关性分析显示，LTBR与P65的表达在膀胱癌组中呈正相关（mRNA：r=0．654，P〈0．05；蛋白：r=0．399，P〈0．05），LTpR与P65蛋白表达在膀胱炎组中呈正相关（r=0．521，P〈0．05）。结论LTpR和P65在膀胱癌组织中高表达，LTBR的表达可能与膀胱癌的发生发展和转移有关，且LTβR可能通过P65的激活参与经典的NF—κB通路。