Safety and immunogenicity of lyophilized, live attenuated hepatitis A vaccine in non-human primate model

Objective To evaluate the safety and immunogenicity of lyophilized, live attenuated hepatitis A vaccine (H2 strain) in rhesus monkeys Methods Nine adult rhesus monkeys were used as experimental animals The rhesus monkeys without anti HAV were divided randomly into the aqueous vaccination group (4 rhesus monkeys), the lyophilized vaccination group (3 rhesus monkeys), and the control group (2 rhesus monkeys) Monkeys were inoculated by intramuscular injection, with control monkeys being inoculated with Minimum Essential Medium Eagle (MEM) Following vaccination, the monkeys were observed for the development of diarrhoea and other adverse side effects, such as changes in appetite, frequency of defaecation and stool consistency for seven days At the weeks 2, 3, 4, 6, 8, 10 and 12 positnoculation, the peripheral blood was collected from all animals and assayed for anti HAV and alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), at weeks 0, 4 and 8 postinocuation, needle biopsy specimens were taken at weeks 0, 4, 8 and 12, all monkeys were sacrificed and tissue samples were taken from liver, lung, heart, kidney and brain for pathological examination at week 12 Results Animals were immunized with a dose of 7 0 logTCID 50 /ml which is stable after freeze drying During the 12 week observation, no animals showed abnormal elevations of liver enzymes (ALT and AST) and no change in appetite or activity Two monkeys (one in the aqueous group and the other in lyophilized group) showed possible lesions at week 8 The lyophilized vaccine, in addition to eliciting an anti HAV IgG response similar to aqueous vaccine ( P >0 05), also showed IgM anti HAV response at week 2 which was not observed with aqueous vaccine Conclusions These results demonstrate that lyophilized, live hepatitis A vaccine is safe and highly immunogenic in primates, supporting its further evaluation in human clinical studies

国产甲肝减毒活疫苗(IA-1株)与进口甲肝灭活疫苗的2年免疫效果比较

目的 比较国产甲肝减毒活疫苗和进口甲肝灭活疫苗免疫效果。方法 在广西柳城县筛选出 6～ 1 2岁甲肝易感儿童 2 1 7人 ,以个体随机分为 4个组。B、C组接种国产甲肝减毒活疫苗 (LA - 1株 ,滴度 1 0 6 75 TCID5 0 ) ,接种程序分别为 0 - 6和 0 - 1 2 ;D组接种低滴度国产甲肝减毒活疫苗 (LA - 1株 ,滴度 1 0 6 0 TCID5 0 ) ,E组接种史克公司市售甲肝灭活疫苗 (贺福立适 ,72 0E1 .U) ,接种程序均为 0 - 6。各组于第 1针免后 1 ,6 ,1 2 ,2 4个月 ,第 2针免后 1个月采血 ,用美国ABBOTT公司的ImxmEIA试剂 ,检测甲肝抗体IgG。 结果 滴度 1 0 6 75 TCID5 0 的国产减毒活疫苗两种程序 ,除 0 - 6程序组在第 2针免后 1个月的抗体水平峰值较低外 ,其余各次随访的抗体反应结果均与进口甲肝灭活疫苗相似。低滴度减毒活疫苗 ( 1 0 6 0 TCID5 0 )的抗体阳性率和抗体水平均低于其他各组。结论 滴度 1 0 6 75 TCID5 0 国产甲肝减毒疫苗与进口甲肝灭活疫苗免疫效果相近 ,具有良好的免疫原性和很好的回忆反应 ,加强免疫可以提高疫苗的保护效果和延长保护年限。

甲型肝炎减毒活疫苗(L-A-1株)口服免疫小白鼠抗体反应

为研究甲型肝炎减毒活疫苗（L－A－1株）口服免疫的免疫原性，114只小白鼠1次口服免疫后1～8周内，每周收集肠洗液和血清样品，用ELISA方法检测特异抗体反应。111只小白鼠检测到阳性抗体反应，阳转率为93．37％。肠洗液S－IgA阳转率高峰在第1和第6周（65％和64％）。血清IgA于第一周未测到，其高峰在第6周（100％）。IgM于第1周即达高峰（88％），IgG于第3周达高峰（88％）。至第8周末，S－IgA维持在40％，IgA、IgM和IgG分别维持在90％，80％和80％。实验结果表明，该疫苗口服免疫后具有良好的免疫原性，可激活小白鼠的局部与全身免疫反应。

甲肝减毒活疫苗(H2株)接种后HAV的毒力和基因型

用普通狨猴对甲肝减毒活疫苗（H2株）接种者的粪便中排出的甲肝病毒（HAV）进行毒力／减毒水平检测，并对疫苗病毒及分离出毒株的P1和P2连接区的核苷酸片段进行序列分析。结果表明，4份疫苗病毒经人体增殖后均无毒力回升迹象，分离毒株Ⅱ、Ⅴ与K7疫苗病毒的同源性为99．7％～100％，所编码的114个氨基酸其序列完全相同，属同一亚基因型IB。提示我国至少有2个亚基因型的HAV，值得进一步展开甲肝分子流行病学研究。

HBsAg阳性者接种甲型肝炎减毒活疫苗的反应及免疫效果

通过对HBsAg阳性志愿者接种甲型肝炎减毒活疫苗的抗体应答及其它有关临床反应观察，表明HBsAg阳性者接种甲肝减毒活疫苗后，其局部及全身临床反应与对照组差异无显著意义，肝酶检测2、4、8周（SGPT）与免疫前相对照，未见有意义的改变，但却能同样地产生良好的抗体反应，两组抗体水平相似。证实甲肝减毒活疫苗不仅可对此类易感人群接种，还可提供同样的保护。

应用不同生产工艺制备甲肝(L-A-1)减毒活疫苗的质量比较

采用细胞消化传代同时加疫苗病毒感染细胞的方法 (简称同时感染法 )与细胞长成单层后再加病毒感染细胞的方法 (简称单层感染法 )所制备的疫苗进行质量比较 ,结果同时感染法的生产周期明显缩短 ,病毒达增殖高峰期的细胞仍能保持良好的形态 ,疫苗病毒滴度明显提高。表明该工艺更适合于规模化。

国产HAVAB-E在甲肝疫苗抗体检测中的应用效果

目的 评估国产HAVAB -E诊断试剂盒在甲肝减毒活疫苗抗体检测中的应用效果。方法 用Abbott实验室的HAVAB -IMx以及中国医学科学院医学生物学研究所 (昆明 )和浙江省医学科学院普康生物技术公司生产的HAVAB -E 3种试剂对 184份疫苗接种者的 12周血进行检测对比试验。IMx试剂经用WHO甲肝免疫球蛋白标准品标化后定量检测标本的mIU/ml。结果 总体GMT为 2 7 2mIU/ml,其中 16 7份 (90 8% )抗体水平 >10mIU/ml。此结果较接近疫苗的保护效果。国产试剂的阳性率分别为 95 1% (175 /184 ,昆明 -E)和 90 2 % (16 6 /184 ,浙江 -E) ,两试剂结果一致率为 92 9%。国产试剂阳性率随抗体水平升高呈增加趋势 ,当滴度 >2 0mIU/ml时 ,与IMx的符合率分别为 98 1% (10 5 /10 7,昆明 -E)和 94 4 % (10 1/10 7,浙江 -E)。结论 两种国产酶免诊断试剂的定性检测结果真实可靠 ,在甲肝减毒活疫苗抗体检测中能客观反映疫苗的免疫原性和保护效果 ,是值得推广使用的诊断试剂。

甲型肝炎病毒(L-A-1株)基因型分析

目的 分析甲肝病毒基因型,为确定我国甲肝的分子流行病学及疫苗的安全性和免疫原性奠定基础。方法 采用抗原捕获聚合酶链反应（AC/PCR）,依据国际上甲肝病毒分型标准,扩增VP1/2A结合处的168个核苦酸（nt2909～3264）。结果 经生物信息学软件分析,得出L-A-1株病毒属于甲肝病毒基因IB亚型。结论 在我国有IA和IB两个亚型甲肝病毒流行。

甲型肝炎减毒活疫苗(LA—1株)在1岁幼儿0、6个月免疫程序中的效果观察

为了了解1岁幼儿0、6个月免疫程序接种甲肝减毒活疫苗的免疫效果,我们观察了95例1岁健康儿童的免疫效果。本次研究采用ELISA免疫竞争抑制法检测1岁幼儿初免1针2个月后和按0、6个月程度免疫接种2针2个月后血清抗—HAV—IgG抗体。结果:两者抗体阳性率分别为:78.95%(75/95)和97.89%(93/95);GMT分别为1:5.76和1:12.48。经统计学处理,阳性率和GMT两者都存在非常显著性差异。按0、6个月免疫程序接种的血清免疫效果明显优于初免1针的效果。0、6个月免疫程度接种甲肝减毒活疫苗值得大力推广。

冻干RA27/3株风疹减毒活疫苗的研制

目的 研制安全有效的风疹疫苗 方法 将RA2 7/3风疹减毒株按适当比例接种MRC -5人二倍体单层细胞 ,培养、收获病毒液 ,加保护剂冻干制苗。结果 连续中试 4批疫苗 ,各项检测指标均达到现行《中国生物制品规程》标准。结论 试制RA2 7/3株风疹活疫苗 ,质量及热稳定性良好。

甲型肝炎减毒活疫苗的研究Ⅱ.实验性疫苗的研制

用H_2M_(20)K_5(32℃)甲型肝炎减毒株在KMB_(17)人胚肺二倍体细胞上制备一批实验性甲型肝炎减毒活疫苗。经暂定的生物制品检定项目检测,疫苗内不含外源因子,感染性滴度为10^(6.5)TCID_50/ml,疫苗病毒为HAV。12只猕猴体内试验表明,疫苗接种后不引起具临床重要意义的肝炎指征,但可使全部猕猴产生抗HAV抗体。本批疫苗的安全性和免疫原性在猕猴体内得到证实,有必要在少量人群中作进一步试用观察。

甲型肝炎减毒活疫苗冻干保护剂的研究

目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂。方法 甲型肝炎病毒L-A-l株经2BX二倍体细胞培养,制备成甲型肝炎减毒活疫苗,再添加不同保护剂进行冷冻干燥。结果 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂,对甲型肝炎减毒活苗病毒显示了较好的保护性,疫苗冻干前后感染滴度下降在1.0Log CCID50/ml以内,符合《中国生物制品规程》要求。结论 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂是一种安全性较高、疫苗冻干效果较好,适合于疫苗规模化生产的保护剂。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)人体免疫学效果观察

从４个观察点筛选出ＡＬＴ正常、抗ＨＡＶ阴性、无禁忌症的４～１８岁易感者５０８名，进行了５个不同批号的甲型肝炎减毒活疫苗（Ｈ２株）人体接种观察。接种疫苗后３天内每日观察接种反应，所有接种者无局部及全身反应。１个月随访期间未见与肝炎有关的副反应。免后８～１２周抗体阳转率为８８．７％～９１．５％，ＧＭＴ为２．７３～４．８８％。３～５周ＨＡＶＩｇＭ阳转率为３．６％～１８．１％。收集了３２名志愿者的大便２０５份，用ＫＭＢ１７细胞分离，阳性９８份，分离率４７．８％。３２人中有３０人排毒，排毒率９３．８％。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)的免疫原性研究

本文对国产甲型肝炎减毒活疫苗（Ｈ２株）的免疫原性进行了研究。使用随机分组对照的方法，给１９５名儿童和青年易感者分别接种３种剂量甲型肝炎减毒活疫苗，近期免疫应答效果显著，阳转率分别为７９．５％、９０．４％、９７．５％；几何平均浓度分别为８１．２、１０１．５、２６６．３ｍＩｕ／ｍｌ；免疫应答呈明显的剂量－效应关系。在本研究使用的剂量条件下，年龄因素对抗体应答没有明显的影响。

腮腺炎疫苗分别与甲肝、白破、风疹疫苗联合免疫的效果观察

目的 :观察腮腺炎疫苗分别与甲肝、白破、风疹疫苗同时接种的临床反应和免疫效果。方法 :设两种疫苗同时接种组和单苗接种组 ,比较其副反应和血清抗体水平。结果 :各接种组临床反应都轻微 ,两苗同时接种组与相应的单苗接种组免前免后同种抗体阳性率或保护率和 GMT,以及免后抗体阳转率 ,其差异均无显著意义 (均 P>0 .0 5 )。结论 :腮腺炎疫苗与甲肝、白破、风疹减毒活疫苗之一同时接种未发现加重反应和相互干扰免疫应答 ,可以同时接种。

冻干风疹减毒活疫苗免疫持久性的研究

目的 了解冻干风疹减毒活疫苗的免疫持久性。方法 在湖南省浏阳市 8月～ 6岁风疹血清HI抗体阴性儿童中 ,进行了连续 5年的冻干风疹减毒活疫苗免疫后血清学效果研究。结果 免疫 1个月后风疹HI抗体的阳转率为 97 2 % ,抗体几何平均滴度倒数 (GMT)为 15 7 6。免后 1、2、3、4、5年风疹HI抗体阳性率仍维持较高水平 ,分别为 99 7% ,10 0 0 % ,98 3 % ,97 3 %和 95 5 % ;而HI抗体的GMT则出现显著性下降 ,分别为 141 2 ,113 3 ,67 4,3 7 3和 3 1 2。在连续观察的 5年当中 ,共有 3 2名观察对象的HI抗体 (≤ 1∶3 2 )出现 4倍增长 ,获得隐性感染 ,共有 17名观察对象的HI抗体阴转 ,5年累积阴转率为 9 2 4%。

甲型肝炎减毒活疫苗检定方法精确度的探讨

目的 提高甲肝减毒活疫苗检定方法的精确度。方法 比较不同刑量组与剂量组不同的试验数，以 及采用点斜法与Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法计算ＴＣＩＤ５０。结果 通过比较４种不同的试验设计，发现随着稀释倍数减小或／和各 稀释度试验管数增加，ＴＣＩＤ５０的标准误减小，以减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数，其标准误的缩小最为明显。 点斜法计算的ＩＣＩＤ５０９５％可信区间较Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法为窄。结论 减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数，并采 用点斜法计算ＴＣＩＤ５０，能使疫苗检定方法的精确度满足规范化甲肝活疫苗滴定的要求。

H_2株冻干甲肝减毒活疫苗接种后血中T淋巴细胞亚群的变化

〔目的〕对接种H2 株冻干甲肝减毒活疫苗后机体血中T淋巴细胞亚群的变化进行动态观察。〔方法〕按一针接种程序 ,给每人接种 1瓶冻干甲肝减毒活疫苗 (H2 株 ) ,接种前及接种后 1、2、3、4、6、8周、3个月采取静脉血 ,用流式细胞仪检测全血T淋巴细胞亚群CD3 + 、CD4+ 、CD8+ 细胞的含量 ,并比较CD4+ /CD8+ 比值的变化。〔结果〕CD3 + 细胞在接种后 1-3周、CD4+ 细胞在接种后 1-2周呈现明显升高 ,分别与接种前作自身对照比较的t检验 ,差别有显著性意义(P <0 .0 5 )。〔结论〕H2 株冻干甲肝减毒活疫苗有良好的T细胞刺激能力。

风疹减毒活疫苗与基因工程乙肝疫苗同时或分别接种的免疫效果

BRDⅡ株风疹减毒活疫苗和基因工程乙肝疫苗同时或分别接种于4～5年前已进行血源乙肝疫苗基础免疫的儿童，结果表明，同时与分别接种的免疫应答类似，临床反应均轻微。2组乙肝疫苗加强免疫后，抗-HBs含量≥mIU／ml者所占的比例和几何均值均有明显提高。

动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的研究

探讨动态浊度法检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗细菌内毒素含量的可行性。参照《中国药典》2015年版通则1143细菌内毒素检测法中动态浊度法,对甲肝疫苗进行标准曲线可靠性试验、干扰初筛试验、干扰验证试验及内毒素含量的测定,同时与经凝胶法检定合格的同批疫苗进行比较。标准曲线可靠性试验结果符合规定。干扰初筛试验疫苗稀释160、320及640倍,回收率在50%~200%之间,均无干扰,符合要求。干扰验证试验结果进一步表明：疫苗稀释160倍对试验无干扰作用。采用动态浊度法检测的10批甲肝疫苗细菌内毒素含量均小于该疫苗的限值L=20 EU/m L,且与经凝胶法检定的同批疫苗结果一致。采用动态浊度法检测甲肝疫苗细菌内毒素含量是可行的,值得推广应用。