人KAT7基因促进雌激素受体α表达

目的:构建带有Myc标签的赖氨酸乙酰基转移酶(KAT7)的真核表达载体,获得Myc-KAT7融合蛋白,并检测其对雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术从中扩增出人KAT7基因的编码序列,插入p XJ-40-Myc载体;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测转染细胞的表达情况,并提取总RNA采用q RT-PCR检测ERα的表达。结果:双酶切和测序结果表明Myc-KAT7真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后Western印迹鉴定表明融合蛋白得到表达,q RT-PCR表明KAT7在转录水平能够促进ERα表达。结论:构建了带Myc标签的人KAT7真核表达载体,并发现KAT7对ERα的表达具有促进作用。

circMRPS35和KAT7在胃癌组织中的表达及预后评估价值

目的研究环状RNA MRPS35(circMRPS35)及赖氨酸乙酰转移酶7(KAT7)在胃癌组织中的表达及预后评估价值。方法选取2016年2月至2019年2月该院诊治的88例胃癌患者为研究对象。应用实时荧光定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中circMRPS35和KAT7 mRNA表达水平。采用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中KAT7蛋白表达情况。采用Pearson相关分析circMRPS35和KAT7 mRNA表达水平的相关性。分析胃癌组织中circMRPS35和KAT7 mRNA表达水平与患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier检验分析circMRPS35和KAT7 mRNA表达水平对胃癌患者生存情况的影响。采用单因素及多因素Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中circMRPS35表达水平明显降低(P<0.05),KAT7 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。胃癌组织中circMRPS35表达水平与KAT7 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.504,P<0.001)。胃癌组织中KAT7蛋白阳性率为70.5%(62/88),明显高于癌旁组织的13.6%(12/88),差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期患者胃癌组织中circMRPS35、KAT7 mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。circMRPS35低表达组患者3年总体生存率为50.0%,明显低于高表达组患者的88.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。KAT7 mRNA高表达组患者3年总体生存率为48.8%,明显低于低表达组患者的88.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中circMRPS35低表达、KAT7 mRNA高表达、TNM分期为Ⅲ期是胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌组织中circMRPS35表达水平降低,KAT7 mRNA表达水平及蛋白阳性率升高。circMRPS35、KAT7可作为胃癌预后评估的潜在标志物。

人赖氨酸乙酰基转移酶7结构域蛋白的原核表达及纯化

目的:克隆人赖氨酸乙酰基转移酶7(KAT7)的2个功能结构域基因,获得其原核表达产物,并纯化蛋白。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人KAT7基因的2个功能结构域(1-330aa)和(331-611aa)编码片段,将其克隆到p ET28a载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中分别扩增获得约990和840 bp的DNA片段,并克隆至p ET28a载体,测序结果表明与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别约为42 000和36 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa)。结论:获得了重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa),为后续研究KAT7与肿瘤调控奠定了实验基础。