m^(6)A修饰在病毒感染宿主细胞中的调节作用

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是指RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上发生的甲基化修饰,是信使RNA(mRNA)和非编码RNA(ncRNA)中最常见的转录后修饰。m^(6)A修饰在RNA循环的所有阶段,包括RNA稳定、剪接、核输出、折叠、翻译和降解等过程中发挥重要作用,这一过程需甲基转移酶(writers)、去甲基酶(erasers)和m^(6)A阅读蛋白(readers)的参与。随着RNA高通量测序技术的不断发展,m^(6)A修饰参与病毒与宿主互作中的研究不断涌现。研究表明m^(6)A修饰发生在多种RNA病毒中,影响病毒感染、复制及子代病毒粒子的生成。病毒也可通过改变宿主细胞转录物组的m^(6)A修饰影响病毒的感染性或宿主对病毒的抵抗性。本文对呼吸道病毒、反转录病毒、疱疹病毒等感染宿主细胞造成的m^(6)A修饰进行概述,并针对m^(6)A修饰对病毒的复制及对宿主免疫反应的调节作用进行综述,为了解病毒与宿主互作机制研究及抗病毒药物筛选供理论基础。

日本脑炎病毒感染宿主后m^(6)A甲基化相关蛋白的表达和定位研究

为了研究日本脑炎病毒(JEV)感染宿主后在体内外对m^(6)A甲基化相关蛋白表达和定位的影响,本试验建立了JEV感染的C57BL/6小鼠模型及乳仓鼠肾细胞(BHK-21)模型,检测JEV感染后小鼠的脑、肾及BHK-21细胞的m^(6)A修饰水平,通过蛋白免疫印迹检测小鼠脑、肾以及JEV感染不同时间点的细胞中m^(6)A相关蛋白的表达水平,共聚焦显微镜观察JEV感染细胞的m^(6)A相关蛋白的亚细胞定位变化。结果显示:与对照组相比,感染JEV后m^(6)A修饰水平极显著上升(P<0.01);感染JEV的小鼠脑、肾中m^(6)A甲基转移酶样蛋白(METTL)3表达量大幅上升,细胞中METTL3表达量随感染时间推移而逐渐增加;METTL3和METTL14的亚细胞定位发生改变,大量由细胞核转移至细胞质。综上所述,JEV可使体内外的m^(6)A水平和METTL3的表达水平上升,细胞中METTL3和METTL14的亚细胞定位改变,表明JEV的感染与m^(6)A修饰具有较强的关联性,为进一步研究m^(6)A及其相关蛋白调控JEV复制的机制奠定了基础。

沉默调节蛋白1、沉默调节蛋白3、沉默调节蛋白6调控肺癌机制的研究进展

肺癌是一种致死率极高的恶性肿瘤,其复杂的发生和发展过程涉及多种分子机制。近年来,研究逐渐揭示了沉默调节蛋白1、沉默调节蛋白3和沉默调节蛋白6在肺癌调控中的关键作用。本文综述了3种去乙酰化酶通过影响细胞周期、凋亡、氧化应激等关键生物学过程,参与调控肺癌细胞的生长、侵袭、转移、凋亡、自噬等过程,并影响肺癌细胞的耐药性。具体而言,沉默调节蛋白1、沉默调节蛋白3和沉默调节蛋白6通过去乙酰化作用调节多种转录因子的活性,进而影响肺癌细胞的增殖和分化。同时,它们还参与调节细胞凋亡和自噬等过程,从而影响肺癌细胞的生存与死亡。此外,这三种去乙酰化酶在氧化应激和炎症反应中也发挥重要作用,通过调节抗氧化酶和炎症因子的表达,影响肺癌的发生和发展。它们还影响肺癌细胞对化疗药物的敏感性,对于逆转细胞的耐药性有重要作用。沉默调节蛋白1、沉默调节蛋白3和沉默调节蛋白6作为肺癌治疗的新靶点正受到越来越多的关注。未来的研究需要进一步阐明这些去乙酰化酶在肺癌发生和发展中的具体作用机制,并在临床治疗中验证其潜在的应用价值。

新型植物生长调节剂SHK-6对大豆产量与蛋白品质的化学调控

试验应用 3个大豆品种经 3年研究 ,探讨了新型植物生长调节剂SHK 6对大豆产量与品质协同提高的效应及生理基础。结果表明 :1)SHK 6处理增强植株抗倒伏能力 ,同时明显提高了大豆产量 ,产量增幅可达到 2 9%～ 4 2 % ,改善了大豆产量构成因素 ;2 )SHK 6处理提高了籽粒蛋白质含量 ,其质量分数为 2 84 %～ 10 2 8% ,且改善了氨基酸组分 (除中黄 17外 ) ,例如必需氨基酸质量分数提高了 4 15 %～ 8 39% ,氨基酸总量增加了 4 84 %～6 6 5 % ;3)SHK 6处理显著提高了大豆根系对氮素的吸收、转化和向地上部运输 (伤流 )的能力 。

铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素在乳腺癌组织中的表达及其与贫血的关系

目的研究乳腺癌组织中铁调素调节蛋白(hemojuvelin,HJV)、骨形成蛋白6(bone morphogenetic protein 6,bmp6)及铁调素(hepcidin)的表达的临床意义及和贫血的关系。方法采用免疫组化方法对64例乳腺癌患者组织以及15例癌旁的正常乳腺组织中的铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素的表达情况进行检测,并分析上述指标之间的关系及其与患者临床特征、乳腺癌内分泌分型以及贫血的关系。结果乳腺癌组织中铁调素表达阳性率为48.4%,明显高于癌旁组织(P<0.01)。铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达阳性率在乳腺癌组织中与癌旁组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。预后较好的luminal A型+luminal B型组中铁调素表达阳性率明显低于预后差的组;而铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达在两组无明显区别。铁调素的表达在ER阴性组中明显高于ER阳性组,而铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达在两组无明显区别。铁调素的表达与淋巴结转移有关,与患者的年龄、T分期无关,铁调素调节蛋白及骨形成蛋白6的表达与患者的年龄、T分期、和淋巴结转移均无关。铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达与铁调素无相关。贫血组与无贫血组患者铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素的表达无区别。结论乳腺癌组织中铁调素的表达阳性率高于癌旁正常组织,铁调素的表达与乳腺癌内分泌分型及肿瘤的临床病理特征有关。乳腺癌组织中铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达与铁调素的表达无关。乳腺癌患者术前贫血与肿瘤组织中的铁调素、铁调素调节蛋白及骨形成蛋白6的表达无关。

双向调节蛋白、转录因子E2启动子结合因子1、白细胞介素6的表达与结直肠癌发生发展的相关性

目的观察结直肠癌患者的双向调节蛋白(AREG)、转录因子E2启动子结合因子1(E2F-1)、白细胞介素6(IL-6)的表达情况,并分析其临床意义。方法选取在住院接受治疗的结直肠癌患者为研究对象,同时选取同期住院接受治疗的结肠息肉患者作为对照。观察两组患者AREG、转录因子E2F-1、IL-6的表达,比较不同临床病理特征结直肠癌患者的AREG、转录因子E2F-1、IL-6的表达,分析影响AREG、转录因子E2F-1、IL-6表达的因素。结果结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率高于结直肠息肉组;有淋巴结转移、组织学分型为黏液腺癌、TNM分期为Ⅲ期+Ⅳ期的结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率较高;回归分析结果显示组织学分型和TNM分期是影响表达的因素。结论结直肠癌患者的AREG、IL-6水平,转录因子E2F-1阳性表达率较高,相关因子的表达与结直肠癌的组织学分型和TNM分期具有一定的相关性。

铁调节蛋白与白细胞介素6在铁代谢中的研究进展

铁是机体必需的微量元素,主要储存在肝脏、脾脏及骨髓,参与机体的生物代谢、肌红蛋白合成、血红蛋白合成,还参与细胞的呼吸、各种酶的合成以及生物氧化过程中的电子转运等,对于细胞保持稳定性有重要作用。机体铁代谢的异常可引发多种疾病,如因铁缺乏引起的免疫力下降、缺铁性贫血、生育障碍等症状,若铁负荷过重可能会引起肝脏疾病、心脏疾病、糖尿病等疾病。近些年研究发现存在一种调节铁代谢的蛋白,即铁调素,又称铁调节蛋白(hepatic bactericidal protein,hepcidin)。Hepcidin是由肝脏合成的具有丰富二硫键的多肽,主要作用是调节哺乳动物全身铁代谢。Hepcidin在肝脏中高表达,这可能是许多贫血包括炎症和慢性病贫血的根本原因 [1] ,而hepcidin的诱导依赖白细胞介素6(interleukin-6,IL-6),在各种炎症和感染中IL-6对hepcidin调节起到关键的作用 [2] 。

老年脑梗死患者血栓调节蛋白及IL-6水平

急性脑梗死发病率高、起病急、多复发、威胁着人们的生命，对患者家庭带来经济负担和沉重的打击。血栓调节蛋白（TM）在内皮细胞发生损伤时被释放，是内皮损伤时的一种保护因子。白细胞介素（IL-6）主要由T淋巴细胞和巨噬细胞释放，两者在血清中的水平可以随脑梗死的发生产生相应的变化。本研究探讨TM、IL-6在急性脑梗死病变中的临床价值。

老年颅脑急性损伤血清血栓调节蛋白、vWf及IL-6的动态监测

目的探讨老年急性颅脑损伤患者血栓调节蛋白(TM)、血管性假血友病因子(vWf)及白介素-6(IL-6)血清水平的变化及其临床意义。方法将54例老年急性颅脑损伤患者分为轻、中和重度损伤组,分别于发病后1、3和7d时测定TM、vWf及IL-6的血清水平。TM、vWf及IL-6血清水平采用ELISA法测定。结果与轻度组比较,中和重度组在损伤后1d时TM、vWf及IL-6血清水平明显升高(P<0.05);损伤后3和7d时,TM、vWf血清水平无显著性差异,中、重度组IL-6水平与轻度组比较有统计学意义(P<0.05)。与轻度组比较,中和重度组迟发性外伤性脑内血肿(DTICH)的发生率增高(P<0.05)。结论TM、vWf及IL-6参与了急性颅脑损伤的病理生理过程,在老年中、重度颅脑损伤中,测量TM、vWf及IL-6血清水平来评估颅脑损伤的严重程度和预后具有重要的临床意义。

葡萄糖调节蛋白75基因对H_2O_2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤有保护作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白75(grp75)基因对H2O2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤的保护作用。方法:以grp75基因瞬时转染C6胶质瘤细胞,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型,运用MTT、LDH、苔盼兰拒染、细胞周期流式细胞术(FCM)和凋亡小体方法观察grp75对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤的影响。结果:grp75转染组C6细胞在H2O2(0.1mmol/L,24h)刺激后MTT增加、LDH活性降低,细胞凋亡明显抑制,与空载体转染组相比有显著差异。结论:grp75基因对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤有保护作用。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白在L6骨骼肌细胞调节性体积增加中的作用(英文)

在许多类型的哺乳动物细胞中,细胞体积对介导胰岛素发挥其生理功能起关键作用.细胞体积调节机制在胰岛素的主要靶组织骨骼肌中尤为重要.为了解该组织中细胞体积调节的机制,对Na+K+2Cl-共转运蛋白在大鼠L6骨骼肌细胞中的表达及其在调节性体积增加中的作用进行了研究.应用免疫印迹法,在L6肌管细胞中检测到分子量为170kD的钠钾氯共转运蛋白.K+(86Rb+)输入实验结果表明,54%的86Rb+是通过钠钾氯共转运蛋白输入细胞的,而其余86Rb+的输入是通过钠钾三磷酸腺苷酶和其他未知转运蛋白实现的.当L6细胞被置于高渗透压溶液(420mosmolL)中,导致细胞体积减少40%,同时钠钾氯共转运蛋白的活性迅速增加(高达2倍).细胞体积在60min内恢复至正常,但在钠钾氯共转运蛋白抑制剂bumetanide存在时,这种调节性体积增加的过程被阻断.这些结果表明,L6肌管细胞表达具有生理活性的钠钾氯共转运蛋白;此转运蛋白被高渗透压诱导造成的细胞体积缩小激活的现象表明,它是细胞调节性体积增加(RVI)机制中的关键元素,在L6骨骼肌细胞体积的调节中起重要作用.

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。

刀豆蛋白A对CD4^+CD25^+调节性T细胞CCR4和CCR6表达的影响

目的探讨刀豆蛋白A(Con A)对CD4+CD25+调节性T细胞趋化因子受体4(CCR4)和CCR6表达的影响。方法采用密度梯度离心法分离1名健康志愿者的外周血单个核细胞,免疫磁珠阴性分选法富集CD4+T细胞。采用流式细胞术分选出CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-T细胞,并分析其纯度及存活率。采用20μg/m L Con A对细胞进行刺激,流式细胞术检测两种细胞刺激0、24、48 h的CCR4和CCR6表达。结果流式细胞术分选CD4+CD25+调节性T细胞的纯度为97.8%,CD4+CD25-T细胞为90.1%,两种细胞存活率均>90%。随着Con A刺激时间延长,CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-T细胞CCR4表达均呈升高趋势,CCR6表达均呈先升高后降低趋势;Con A刺激0、24、48 h,CD4+CD25+调节性T细胞CCR4、CCR6表达均高于CD4+CD25-T细胞(P均<0.01)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞CCR4、CCR6表达均升高,经Con A刺激后CCR4表达呈时间依赖性。

氨基末端B型脑钠肽前体及肺泡沉默调节蛋白6对儿童急性呼吸窘迫综合征严重程度的预测价值

目的研究儿童急性呼吸窘迫综合征(ARDS)严重程度预测中肺泡沉默调节蛋白6(SIRT6)、氨基末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)的价值。方法采用回顾性分析方法,取2018年月6月至2021年6月四川大学华西医院资阳医院收治入院的100例ARDS患儿作为研究对象,设为ARDS组,并根据ARDS严重程度分为轻度组(n=50)、中度组(n=34),重度组(n=16);同时,将同期入院的30例下呼吸道感染患儿作为对照组。比较所有患儿肺泡灌洗液SIRT6含量与血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、NT-proBNP水平,分析SIRT6、NT-proBNP预测重度ARDS的价值。结果ARDS组血清IL-6、TNF-α、NT-proBNP与肺泡SIRT6水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。较轻度组、中度组,重度组血清IL-6、TNF-α、NT-proBNP与肺泡SIRT6水平更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。较轻度组,中度组血清IL-6、TNF-α、NT-proBNP与肺泡SIRT6水平更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,SIRT6与据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))呈负相关(r=-0.33),与IL-6、TNF-α水平呈正相关(r=0.34,0.43,P<0.05);NT-proBNP与PaO_(2)/FiO_(2)呈负相关(r=-0.35,P<0.05)。受试者工作特性(ROC)分析显示,SIRT6预测重度ARDS的敏感度、特异度、曲线下面积(AUC)依次为78.31%、63.92%、0.74,NT-proBNP预测重度ARDS的敏感度、特异度、AUC依次为72.13%、64.54%、0.71。结论ARDS患儿肺泡SIRT6、血清NT-proBNP水平上升,且与ARDS严重程度呈正相关,可辅助预测重度ARDS。

广西巴马地区长寿人群沉默信号调节蛋白6基因mRNA的表达

目的：分析广西巴马有长寿家族史人群外周血沉默信号调节蛋白6（SIRT6）基因的mRNA表达水平,探讨其与SIRT6基因多态性及其蛋白的关系。方法：选取广西巴马地区有长寿家族史者（长寿家族史组）137例（年龄30~106岁,男70例,女67例,汉族占6.57%,壮族和瑶族占93.43%）,无长寿家族史者（无长寿家族史组）91例（年龄22~89岁,男51例,女40例,均为壮族和瑶族）。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测两组人群外周血SIRT6基因mRNA的表达水平。结果：长寿家族史组总体和女性人群外周血SIRT6 mRNA表达水平均高于无长寿家族史组（P〈0.05）。长寿家族史组SIRT6基因rs350846位点GG、CG基因型及G等位基因携带者（GG、CG）的SIRT6 mRNA水平均高于无长寿家族史组（P〈0.05）。长寿家族史组SIRT6 mRNA表达水平与血清中SIRT6蛋白无相关关系（P〉0.05）。结论：SIRT6基因mRNA表达水平与广西巴马人群家庭聚集性长寿相关,且G等位基因携带者的SIRT6 mRNA高表达更有利于长寿。

沉默信号调节蛋白6在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义

探讨沉默信号调节蛋白(SIRT)6在溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中的表达及意义。方法将22只14日龄清洁级无病原体C57BL6/J野生型(WT)小鼠分为WT对照组(n=6)和WT-葡聚糖硫酸钠(WT-DSS)组(n=16),将13只肠道上皮细胞敲除SIRT6基因(SIRT6^(IKO))小鼠分为SIRT6^(IKO)对照组(n=3)和SIRT6^(IKO)-DSS组(n=10)。WT对照组和SIRT6^(IKO)对照组小鼠给予正常蒸馏水喂养,WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠给予25 g·L^(-1) DSS间断性喂养(每日5 mL,连续7 d,然后更换正常饮用水喂养14 d为1个循环,共3个循环)建立UC模型。每天称小鼠体质量,观察小鼠大便性状、肉眼血便,计算小鼠疾病活动度指数(DAI)评分。于造模第3个循环末,将各组小鼠采用颈椎脱臼法处死,取新鲜结肠组织,应用苏木精-伊红(HE)染色观察WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠黏膜损伤的病理学变化并进行评分,Western blot法检测WT对照组,SIRT6^(IKO)对照组和WT-DSS组小鼠结肠组织中SIRT6蛋白表达来判断基因敲除效率,免疫组织化学法检测WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠组织中巨噬细胞特异性标志物F4/80的表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平。结果SIRT6^(IKO)对照组小鼠结肠组织中SIRT6蛋白相对表达量显著高于WT对照组(P<0.05)。WT对照组小鼠结肠组织中SIRT6蛋白相对表达量显著高于WT-DSS组(P<0.05)。造模第3个循环末,WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠体质量均显著低于第1、2个循环末(P<0.05);2组小鼠造模第1循环末与第2个循环末体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第1、2个循环末,SIRT6^(IKO)-DSS组与WT-DSS组小鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第3个循环末,SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠体质量显著低于WT-DSS组(P<0.05)。造模第3个循环末,WT-DSS组和SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠DAI评分均显著高于第1、2个循环末(P<0.05);WT-DSS组小鼠造模第2个循环末与第1个循环末DAI评分比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第2个循环末,SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠DAI评分显著高于第1个循环末(P<0.05);造模第2、3个循环末,SIRT6IKO-DSS组小鼠DAI评分显著高于WT-DSS组(P<0.05)。SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠组织组织学损伤指数显著低于WT-DSS组(P<0.05)。SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠组织F4/80表达评分显著高于WT-DSS组(P<0.05)。SIRT6^(IKO)-DSS组小鼠结肠组织中IL-6、TNF-αmRNA相对表达量显著高于WT-DSS组(P<0.05)。结论UC小鼠结肠组织中SIRT6呈低表达,结肠组织中SIRT6缺失会加重结肠组织的炎症反应和损伤,增加UC易感性。

过表达和敲除沉默信息调节蛋白6质粒的构建及稳定肺癌A549细胞株的筛选

目的构建过表达和敲除沉默信息调节蛋白6(SIRT6)基因质粒,并筛选过表达和敲除稳定肺癌A549细胞株。方法采用PCR技术扩增SIRT6基因序列,通过中间质粒p SK连接在慢病毒质粒CD513B上,鉴定正确后进行慢病毒包装,收集含慢病毒颗粒的上清感染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出过表达SIRT6基因的稳定细胞株,蛋白质印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达水平。利用规律成簇间隔短回重复/Cas9基因编辑技术敲除SIRT6基因,确定敲除靶点位置为SIRT6基因的第一外显子和第二外显子,分别构建第一个显子,第二外显子的SIRT6-小向导RNA(sgRNA),将SIRT6-sgRNA连接到有Cas9的质粒CD513B上后转染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出转染成功的细胞,通过无限稀释法筛选出SIRT6敲除基因的A549细胞系,蛋白印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达情况。结果 A549细胞的感染荧光效率接近100%,蛋白质印迹法检测过表达SIRT6基因A549细胞的SIRT6蛋白呈高表达。DNA测序检测敲除SIRT6基因A549细胞系有移码突变,蛋白质印迹法检测无SIRT6蛋白表达。结论成功构建过表达和敲除SIRT6基因质粒,并筛选出过表达和敲除SIRT6基因的稳定肺癌A549细胞株。

m^6A甲基化调节因子影响口腔鳞状细胞癌生存预后的生物信息学分析

目的分析m^6A甲基化调节因子对口腔鳞状细胞癌(OSCC)生存预后的影响,探寻相关信号通路和预后相关基因,为OSCC的治疗与预后评估提供候选靶点。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库中OSCC的数据,提取m^6A相关基因的表达。使用R软件分析m^6A甲基化调节因子基因间的相关性、对m^6A甲基化调节因子的基因进行样品聚类分析,并对聚类分组的患者做生存分析和差异性比较。然后,对聚类分组的样本进行基因集富集分析(GSEA)。最后,筛选出m^6A甲基化调节因子中OSCC的预后相关基因。结果OSCC样本分成cluster1和cluster2两组,cluster1的生存期显著低于cluster2,其肿瘤级别显著高于cluster2(均P<0.05)。m^6A甲基化调节因子基因间具有相关性。单因素Cox分析发现YTH结构域结合蛋白2(YTHDF2)、异质核糖蛋白C(HNRNPC)和甲基转移酶样因子14(METTL14)是预后相关基因。GSEA分析显示,m^6A甲基化调节因子的基因主要涉及肿瘤发生与恶化相关的生物学功能和通路。结论m^6A甲基化调节因子对OSCC生存预后产生影响并反映其恶性程度,其中YTHDF2、HNRNPC和METTL14是预后相关基因,可以作为OSCC治疗和预后评估的候选分子靶点。

METTL3介导的PDK1 mRNA m^(6)A修饰通过Akt/mTOR信号通路促进肺上皮细胞增殖

腺苷N6-位点甲基化(m^(6)A)在细胞增殖过程中发挥重要作用。RNA甲基转移酶3(METTL3)作为催化m^(6)A关键酶,其介导m^(6)A修饰在肺上皮细胞增殖中的作用机制尚不明确。本研究旨在探讨METTL3介导m^(6)A修饰调控肺上皮细胞增殖的效应及机制。结果显示,在肺上皮细胞中敲低METTL 3显著抑制细胞生长,而过表达METTL3则促进了细胞增殖(P<0.05)。进一步的蛋白质免疫印迹结果显示,细胞生长和增殖的关键蛋白质PCNA在METTL 3敲降的肺上皮细胞中蛋白质水平的表达显著下调,并且Akt以及mTOR的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果发现,METTL 3敲降的肺上皮细胞中m^(6)A修饰水平显著降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹结果表明,Akt-mTOR信号通路上游调控分子PDK1的mRNA和蛋白质表达水平在METTL 3敲降的肺上皮细胞中显著下降(P<0.05)。机制上,m^(6)A-IP-qPCR和RIP-qPCR结果进一步表明,METTL3催化PDK 1 mRNA的3′UTR区域m^(6)A修饰,进而被YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)识别,增强其mRNA的稳定性。总之,本研究揭示了METTL3通过增强PDK1 m^(6)A修饰,进而激活Akt-mTOR信号通路,促进细胞增殖。本研究为METTL3在上皮细胞增殖中的新角色提供了证据,同时为治疗肺上皮细胞损伤修复提供了新的治疗靶点。

m^(6)A RNA甲基化调节因子与前列腺癌预后的关系

目的探索N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)RNA甲基化调节因子(以下简称m^(6)A调节因子)与前列腺癌预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载416例前列腺癌样本和80例癌旁样本的临床病理数据及其mRNA相关数据,获取METTL3、METTL14、WTAP、RBM15、ZC3H13、YTHDC1、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2、HNRNPC、FTO和ALKBH5共12种m^(6)A调节因子。筛选出前列腺癌样本差异表达的m^(6)A调节因子。对前列腺癌组织样本进行无监督聚类分组,并比较其总体生存率的差异。进行多因素Cox回归分析,根据风险评分分为高风险组和低风险组,比较2组生存率。对临床病理因素进行风险评分,构建多因素Cox回归模型,评估预后预测价值。采用免疫组织化学染色方法检测前列腺癌组织中METTL14和FTO的表达。结果从12个m^(6)A调节因子中筛选出8个差异表达的调节因子。通过无监督聚类分析将前列腺癌样本分成3组,分别为Cluster 1、Cluster 2和Cluster 3,3组的生存时间存在显著差异。多因素Cox回归分析发现,METTL14和FTO与前列腺癌患者的预后密切相关。构建Cox回归模型,对前列腺癌患者进行风险评分,发现高、低风险组总生存率有统计学差异,且风险评分可作为独立预后指标。前列腺癌组织中METTL14和FTO蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论本研究构建了基于m^(6)A调节因子的前列腺癌预后预测模型,其中风险评分可作为独立的预后指标,METTL14和FTO可作为诊断前列腺癌的分子标志物和治疗的潜在靶点。