SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。 结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。 结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较

采用逆转录－ＰＣＲ方法，用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列，发现二者均由１９７８个核苷酸组成，比７６／１１８株少６个核苷酸，并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较，发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示，在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域，弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同，而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测，Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关，而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代，同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。

天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因片段克隆和序列分析

目的分析天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒TJJ16,提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RN A,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR分别扩增M1和M2基因片段,克隆于T载体并测序拼接,对其进行序列分析和生物信息学分析。结果汉坦病毒TJJ16株的M基因片段全序列长为3616nt,仅有1个开放读码框架(ORF),编码1 136个氨基酸,序列分析表明其为汉滩型(HTN型)汉坦病毒,与HTN型Q32株同属1个亚型。结论TJJ16病毒株M基因片段的克隆和序列分析证实其为HTN型,系天津地区的首次报道。

流行性出血热病毒M基因片段的结构与特性

流行性出血热病毒Ｍ基因片段的结构与特性董关木，俞永新（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）ＴｈｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＭＧｅｎｏｍｅＳｅｇｍｅｎｔｏｆＨＦＲＳＶｉｒｕｓｂｏｎｇＧｕａｎｍｕ；ＹｕＹｏｎｇｘｉ...

汉坦病毒A9株M基因片段核苷酸序列的测定及分析

采用反转录-ＰＣＲ方法，分节段扩增汉坦病毒Ａ９株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭＴ载体中，用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明，Ａ９株Ｍ片段ｃＤＮＡ由３６１８个碱基组成，编码１１３５个氨基酸， 核苷酸序列及由其推导的氨基酸序列同７６／１１８株的同源性分别为９４．３３％和９７．８０％，说明汉坦病毒Ａ９株与７６／１１８株在糖蛋白的结构上高度保守。同７６／１１８株比较，在３'末端非编码区变异极大，变异率为２０％，且多了２个核苷酸。Ａ９株Ｍ基因片段核苷酸序列的获得，为利用该ｃＤＮＡ进行基因工程疫苗的研制创造了条件。

汉坦病毒Z5株M和S片段全基因序列测定及分析

目的测定汉坦病毒Z5株M、S片段的全长序列,了解其分子结构特征,并分析Z5与其他汉坦病毒株的遗传学差异。方法设计引物,用RT-PCR技术扩增Z5株全长M与S片段。PCR产物纯化后克隆入T载体并测定序列及分析。结果Z5株M片段的全基因序列含有3 616个核苷酸,编码1 135个氨基酸。S全基因序列含有1 700个核苷酸,编码429个氨基酸。经核苷酸与氨基酸同源性分析,Z5株应属于汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与Z10株同属一个亚型。结论Z5株病毒和其他汉滩病毒病毒在核苷酸序列上有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍较高。

汉滩病毒西安分离84FLi的M片段全基因序列测定及分析

目的 测定我国肾综合征出血热患者流产胎儿肝脏分离病毒 84 FL i株的全 M片段基因序列 ,了解其分子基础 .方法 采用反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR) ,分节段扩增 M基因片段的 c DNA,直接用 PCR产物或克隆入 p MD18- T载体后进行测序 .结果 84 FL i株的全 M基因序列组成为 :M片段基因共由 36 16个核苷酸组成 ,四种核苷酸的比例分别为A 30 .92 % ,C 18.0 3% ,G 2 1.18% ,T 2 9.87% . GC含量为39.2 1% ,AT含量为 6 0 .79% .最大开放读码框为 4 1～ 344 8,共编码 1135个氨基酸 .核苷酸序列同源性分析表明 84 FL i株与 HTN型同源性高于与其他型汉坦病毒的同源性 ,其中与中国株的同源性较高 ,与 HV114株的同源性为 85 .5 % .与HTNV的国际标准毒株 76 - 118的核苷酸同源性分别为84 .0 % ,氨基酸的同源性为 96 .0 % .结论 84 FL i株属于汉滩型病毒 。

汉坦病毒Q32株L和M片段全基因序列分析

目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列共6533个核苷酸,GC含量为37·38%,AT含量为62·62%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),该读码框架从38到6493,由6456个核苷酸组成,编码2151个氨基酸,可以合成相对分子质量为2·46×105的蛋白。M片段全基因序列共3616个核苷酸,GC含量为39·44%,AT含量为60·56%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),其读码框架从41到3448,由3408个核苷酸组成,编码1135个氨基酸,可以合成相对分子质量为1·26×105的蛋白。Q32编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。结论汉坦病毒Q32株M和L片段具有和其他汉坦病毒糖蛋白和RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,核苷酸序列虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高。

辽宁省2011—2017年发热伴血小板减少综合征流行病学特征与M片段基因序列分析

目的了解辽宁省2011—2017年发热伴血小板减少综合征(SFTS)的流行病学特征及病毒分离株的基因型分布和进化规律,为SFTS的诊断和制定预防控制策略和措施提供参考依据。方法以辽宁省2011年1月—2017年12月SFTS确诊病例为研究对象,描述疾病的流行病学特征;将病原体按年份进行分层随机抽样,每年随机选取5株,采用RT-PCR方法扩增分离株M片段基因序列,应用软件Mega6.0软件进行同源性分析,构建亲缘进化树。结果辽宁省2011年1月—2017年12月共报告SFTS确诊病例438例,死亡病例19例,病死率为4.34%;发病时间集中于春夏季,每年7—9月为发病高峰;省内高发地区为丹东市(242例)和大连市(144例);主要发病人群集中于≥45岁中老年人群,占总报告病例数的89.95%;农民及家务待业者发病较多,占总报告病例数的91.32%。基因序列分析结果显示,辽宁省35株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)分离株的核苷酸序列同源性分别为92.20%~100%,且在C和J2个基因型上均有分布,25株分布在C2基因型分支。结论辽宁省SFTS发病具有一定的季节性和地域性,≥45岁的中老年农民为高危人群;2011—2017年辽宁省SFTSV流行优势株为C2基因亚型。

某部驻区肾综合征出血热自然疫源地调查

目的了解某部驻区肾综合征出血热自然疫源地情况。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增该地鼠类脏器模板的M片段基因序列,用BLAST软件进行序列分析,并用Clustal X(1.8)软件进行聚类分析。结果RT-PCR检测结果显示,2份大林姬鼠的肺组织标本汉城型汉坦病毒检测结果阳性,对1份阳性标本进行序列测定并分析其核苷酸序列,所测序列与中国黑龙江的AF28829株、朝鲜的HVU38177株和HVU37729株、日本的HANG12GP等汉城型汉坦病毒同源性为99%。结论该部驻区可能存在汉城型汉坦病毒的肾综合征出血热自然疫源地。

发热伴血小板减少综合征病毒分离株M片段的分子特征分析

目的分析安徽省六安市发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)分离株的M片段分子特征。方法从2014-2015年六安市发热伴血小板减少综合征(SFTS)病例血液标本中分离的SFTSV株,进行M片段全基因序列测定,得到10株SFTSV的M片段基因序列。将其与从GenBank下载的54株SFTSV国内外公布的序列进行比对分析。结果六安市SFTSV分离株基因型主要为B、D和F基因型,分别为2、1和7株。10株SFTSV分离株与A、B、C、D、E、F各亚型代表分离株间核苷酸序列同源性分别为93.7%~96.1%、93.3%~99.2%、94.4%~97.3%、93.7%~99.5%、94.0%~96.6%、93.6%~99.0%。人源株与动物源株、蜱源株核苷酸同源性分别为93.4%~99.3%、93.5%~99.6%,动物源株与蜱源株核苷酸同源性为93.6%~99.8%。结论安徽省六安市SFTSV分离株为B、D和F基因型,与国内外代表株核苷酸高度同源。

2016—02 一种获得高活力的里氏木霉融合纤维素酶的方法及重组菌株

本方法涉及基因工程领域，具体涉及一种获得高活力的里氏木霉融合纤维素酶的方法及重组菌株。所述方法包括在宿主细胞中融合表达来自里氏木霉的纤维素酶cbM基因片段和egl基因片段，或纤维素酶cbM基因片段和egll基因片段的步骤。表达融合纤维素酶CBHI—EGI和CBHI—EGII的转化子在BMMY培养基中诱导培养2d后，