N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

甲基转移酶样3抑制剂STM2457通过调节线粒体功能改善代谢相关脂肪性肝病

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)特异性抑制剂STM2457在代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的作用及机制。方法动物水平:15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为基础组(CD组,n=5,10%低脂饲料喂养16周)、高脂组(HFD组,n=5,60%高脂饲料喂养16周,建模MAFLD)、STM2457组(STM组,n=5,60%高脂饲料建模小鼠MAFLD后,给予STM245750 mg/kg腹腔注射2周)。斑点杂交实验(Dot-blot)检测小鼠肝组织m6A修饰水平,检测各组肝组织匀浆甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,HE染色观察小鼠肝组织形态,IPGTT和IPITT检验小鼠胰岛素抵抗程度,代谢笼实验检测代谢方式的改变,透射电镜(TEM)检测线粒体的形态。细胞生物学水平:油酸钠/棕榈酸钠作用48 h诱导建立人肝癌细胞株HepG2脂肪变性模型(FFA)。STM2457组在诱导脂肪变性的同时给予STM2457(1μmol/L)作用48 h,通过线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测线粒体功能。结果经高脂饮食诱导建立的MAFLD模型小鼠,其肝组织中m6A修饰水平升高,METT3的mRNA表达上调,与CD组比较,HFD组METT3的mRNA表达上调1.557±0.074倍(P<0.05),而在STM2457作用下,小鼠体质量显著下降且肝脏脂质沉积减少,肝组织m6A修饰水平下降,葡萄糖耐量和胰岛素敏感性升高,肝组织匀浆TG含量减少,(P<0.05),血清ALT、AST含量降低(P<0.05),。HFD组肝细胞线粒体肿胀明显,线粒体膜电位下降,STM2457作用后线粒体形态恢复正常,膜电位上升(P<0.05)。结论METTL3抑制剂STM2457能够通过减轻高脂饮食诱导的线粒体损伤改善MAFLD。

m6A甲基转移酶样3基因在泛癌中的表达及对肿瘤微环境的影响

目的分析m6A甲基转移酶样3(methyltransferase like 3,METTL3)基因在泛癌中的表达及对肿瘤微环境的影响。方法在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载多种癌症患者的基因测序结果及临床资料,分析METTL3基因在各类型肿瘤中的表达以及其与肿瘤微环境相关细胞浸润及预后的关系。结果METTL3基因在大多数恶性肿瘤中表达上调,导致肝细胞癌和前列腺癌患者无进展生存期缩短(P<0.05)。肝细胞癌和前列腺癌中,METTL3表达与多种免疫细胞浸润水平及抑制性免疫检查点基因表达水平相关(P<0.05)。结论METTL3基因表达增加导致肝细胞癌和前列腺癌患者的不良预后,可能通过促进免疫浸润及增加抑制性免疫检查点基因表达发挥作用。

m6A甲基转移酶METTL3通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络影响膀胱癌的研究进展

膀胱癌(BCa)是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一,发病机制目前尚未明确。甲基转移酶3(METTL3)是N6-甲基腺苷甲基转移酶复合物(m6A MTC)的核心部分,介导mRNA的甲基化修饰,影响mRNA的稳定性和翻译过程。研究表明METTL3可以通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络对BCa细胞分裂增殖起到促进作用。该信号网络涉及多种信号分子,METTL3可分别影响AFF4、NF-κB和MYC的表达水平影响其下游通路,促进肿瘤发展。

m6a甲基转移酶METTL3调控KAI1/CD82表达介导垂体神经内分泌肿瘤细胞生物学行为的机制研究

目的研究m6a甲基转移酶METTL3调控KAI1/CD82表达介导垂体神经内分泌肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的机制。方法通过实时荧光聚合酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹测定大鼠垂体细胞、大鼠垂体神经内分泌肿瘤细胞系GH3和MMQ中的METTL3与KAI1/CD82表达水平。体外培养GH3细胞,将其随机分为对照组、METTL3过表达质粒组、METTL3空质粒组、METTL3 siRNA组、METTL3 siRNA阴性对照组,经分组转染后,通过qPCR和蛋白免疫印迹检测各组细胞METTL3与KAI1/CD82表达;通过CCK-8实验检测各组细胞活力;通过细胞划痕、Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移侵袭情况;通过甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)实验检测各组细胞KAI1/CD82 m6A甲基化修饰情况。结果相比大鼠垂体细胞,大鼠垂体神经内分泌肿瘤细胞系GH3及MMQ中的METTL3蛋白及mRNA表达水平明显升高,KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组相比,METTL3空质粒组、METTL3 siRNA阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义;与对照组、METTL3空质粒组相比,METTL3过表达质粒组细胞活力、迁移距离、侵袭细胞数、METTL3蛋白及mRNA表达水平、KAI1/CD82 m6A甲基化水平升高(P<0.05),KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05);与对照组、METTL3 siRNA阴性对照组相比,METTL3 siRNA组细胞活力、迁移距离、侵袭细胞数、METTL3蛋白及mRNA表达水平、KAI1/CD82 m6A甲基化水平降低(P<0.05),KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论下调METTL3表达可降低KAI1/CD82 m6A甲基化水平,促进KAI1/CD82mRNA转录表达,抑制垂体神经内分泌肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移。

线粒体氧化应激及m6A表观遗传调控TRPC6钙通道在肾病综合征发病中的作用研究

目的 初步探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)表观遗传修饰瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)通道失调在肾病综合征发病中的作用及潜在机理。方法 按照随机数字表法将小鼠足细胞分为4组:对照组、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组、嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理组、TBHQ+PAN处理组。对照组为正常完全培养液,TBHQ组培养液中加入10 nmol/L TBHQ,PAN处理组培养液中加入PAN 50μg/mL,TBHQ+PAN处理组培养液中加入10 nmol/L TBHQ以及PAN 50μg/mL,刺激24 h收集细胞。应用膜片钳证实PAN损伤诱导TRPC6通道激活机理及1,4,5-肌醇三磷酸(IP3)受体拮抗剂TBHQ对电流的影响,检测对照组、PAN处理组、TBHQ组和TBHQ+PAN处理组细胞TRPC6通道电流变化。通过葡萄糖氧化酶(GO)建立足细胞氧化应激模型。另外按照随机数字表法将足细胞分为4组:空白对照组、GO组、姜黄素组、姜黄素+GO组。GO组给予GO 3.5 kU/L,姜黄素组给予Nrf2激动剂(姜黄素)40μmol/L,姜黄素+GO组给予姜黄素40μmol/L和GO 3.5 kU/L处理,给药处理8~12 h后收集细胞。检测各组Nrf2和特异性调控蛋白NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)、TRPC6及Transgelin蛋白和线粒体调控蛋白表达变化。通过SRAMP对TRPC6通道m6A位点进行精准预测,对PAN诱导足细胞损伤模型公共数据库GSE124622进行2次生物信息学分析。结果 对照组与TBHQ组电流比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PAN处理组电流升高,而TBHQ+PAN组电流减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与GO组比较,姜黄素+GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组线粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达均降低,Drp1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与GO组比较,姜黄素+GO组粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);空白对照组与姜黄素组TRPC6/Transgelin及线粒体调控蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TRPC6通道序列存在多个m6A修饰位点,均具有被甲基转移酶(METTL)3、METTL14、肾母细胞肿瘤1相关蛋白(WTAP)和去甲基化酶ALKB同源蛋白(ALKBH)、m6A去甲基化酶(FTO)调控的潜在可能。对12个m6A调节基因进行表达分析,发现m6A调节基因的表达在PAN诱导足细胞损伤中发生显著差异。结论 TRPC6介导钙离子内流可被氧化应激激活参与足细胞损伤,激活Nrf2可以减少钙过负荷所致线粒体损伤而保护足细胞。TRPC6序列中存在多个高m6A修饰靶点,肾病综合征发病机理可能通过m6A修饰足细胞TRPC6离子通道,m6A相关调控基因在肾病足细胞损伤中发生明显变化。

m6A甲基转移酶3在前列腺癌中的表达及其对LNCaP细胞铁死亡的影响

为探究m6A甲基转移酶3(N6-methyladenosine methyltransferase-like 3,METTL3)在前列腺癌中的表达及其对LNCaP细胞铁死亡的影响,本研究运用UALCAN在线数据库分析了METTL3和SLC7A11在正常前列腺组织和前列腺癌组织中的表达差异及其表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,采用TIMER在线数据库分析了METTL3与铁死亡相关基因SLC7A11表达的相关性。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测METTL3 mRNA和蛋白在不同前列腺癌细胞中的表达水平。沉默METTL3的表达后,采用透射电子显微镜观察LNCaP细胞的铁死亡变化,检测SLC7A11的mRNA及蛋白表达情况。UALCAN在线数据库结果显示,METTL3和SLC7A11均高表达于前列腺癌组织,且两者的表达均与前列腺癌患者的Gleason评分、淋巴结转移和TP53突变具有相关性(P<0.05);TIMER分析结果显示,METTL3与铁死亡相关分子SLC7A11的表达呈正相关(P<0.001)。细胞实验结果显示,METTL3在前列腺癌细胞中高表达,而干扰LNCa P细胞METTL3的表达后,细胞铁死亡增加且SLC7A11的表达降低。本研究结果表明,METTL3可能是参与前列腺癌发生铁死亡的重要分子,影响前列腺癌的发生与进展。

RNA甲基化转移酶METTL3在白血病中的研究进展

近年来,RNA修饰成为表观遗传调控的研究新领域,其中,N6-甲基腺苷(m6A)修饰是发生在腺嘌呤第六位N原子上的甲基化修饰,是真核细胞mRNA最常见、最丰富的化学修饰,由甲基转移酶复合体、去甲基化转移酶及相应的阅读器协同调控,对维持mRNA的稳定性、调节剪接和翻译等过程具有重要意义,并参与肿瘤、生殖、生物节律等多种病理、生理过程。甲基转移酶样蛋白3(METTL3)作为核心成分,在正常造血和恶性血液肿瘤中起着至关重要的作用。该文重点关注METTL3的结构,及其在正常造血和血液恶性肿瘤中的作用,以及METTL3治疗血液肿瘤的潜力,归纳METTL3在白血病中的研究进展及相关作用机制,为白血病的治疗提供新的思路。

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞m6A水平的影响及其机制

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌中m6A水平的影响及机制。方法将胃癌细胞株MGC-803分别与幽门螺杆菌标准菌株NCTC 11637、NCTC 26695、PM SS1在MOI=100的条件下共培养8 h,用dot-blot和ELISA方法检测细胞总体m6A水平。用qRT-PCR和Western blotting检测METTL3和METTL14的表达。下载GEO数据库中的原始数据,分析m6A甲基化转移酶与临床病理参数之间的关系。运用GEPIA分析TCGA和GTEx数据库中m6A甲基化转移酶METTL14在胃癌和正常组织中的表达差异。结果幽门螺杆菌可导致胃癌细胞m6A水平上调;幽门螺杆菌感染诱导了胃癌细胞中METTL14表达;METTL14表达与胃癌组织LAUREN分型相关,且在肠型胃癌组织中表达更高;胃癌组织中METTL14的表达高于癌旁正常组织。结论幽门螺杆菌感染诱导胃癌细胞总体m6A水平上调,其机制与m6A甲基化转移酶METTL14表达上调有关。