m6A甲基转移酶样蛋白3在溃疡性结肠炎病人结肠组织中的表达及意义

目的:探讨m6A甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在溃疡性结肠炎(UC)病人结肠组织中的表达及其临床意义。方法:纳入UC病人100例作为研究对象,依据Mayo评分方法判定病情活动度:轻度活动期30例,中度活动期34例,重度活动期36例。根据预后情况分为不良预后组(56例)和预后良好组(44例)。另以同期结肠息肉病人60例为对照组。通过qRT-PCR法检测UC病人及对照组结肠黏膜METTL3 mRNA的表达,采用免疫组织化学法检测UC病人METTL3蛋白水平。比较UC不同严重程度病人METTL3 mRNA及蛋白表达变化,分析其与UC严重程度及预后的关系;受试者工作特征(ROC)曲线评价METTL3 mRNA对UC预后的预测效能;Cox回归分析影响UC预后不良的相关因素。结果:研究组病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。与轻度活动期相比较,中度活动期与重度活动期病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平以及阳性率显著升高(P<0.05);与中度活动期相比较,重度活动期病人结肠黏膜METTL3 mRNA水平以及阳性率显著升高(P<0.05)。预后不良组病人Mayo评分、METTL3 mRNA水平、METTL3阳性表达率及CRP均显著高于预后良好组(P<0.05~P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,研究组病人METTL3 mRNA与Mayo评分呈正相关关系(r=0.540,P<0.05)。ROC结果显示,METTL3 mRNA诊断病人预后的曲线下面积为0.882(95%CI:0.813~0.951),灵敏度为82.10%,特异度为86.40%。Cox回归分析显示,Mayo评分、METTL3 mRNA水平升高是UC病人发生不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:UC病人METTL3水平与预后有关,其高水平可提示病人预后不良。

m6A甲基转移酶KIAA1429在恶性肿瘤中的作用及研究进展

N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰是真核信使RNA (mRNA)上最普遍的内部修饰之一,它也参与了各种RNA相关功能,尤其是在人类恶性肿瘤发生发展的过程中发挥着重要作用。作为一种动态且可逆的修饰,m6A的表达水平受m6A甲基转移酶、去甲基酶及m6A结合蛋白的共同调节。目前已发现的甲基转移酶主要有METTL3、METTL14、KIAA1429 (VIRMA)、WTAP等。目前多篇文献报道了m6A甲基转移酶KIAA1429可促进癌症的进展,并与癌症的低生存率具有一定的相关性,如乳腺癌、肝癌和肾癌等。本文总结了KIAA1429在多种癌症中的研究进展及相关作用,其以m6A依赖性或非依赖性的方式通过ID2、lncRNA、CDK1及c-Jun等靶向干细胞因子影响癌细胞的发生、增殖、侵袭、转移和抗凋亡。KIAA1429在不同恶性肿瘤中的致癌作用以及KIAA1429促进癌症发生发展的机制为恶性肿瘤的治疗提供了一定的方向,恢复m6A甲基化的理想水平而纠正KIAA1429在癌症中的表达将可能成为治疗的关键。

广西麻鸡m6A甲基转移酶基因表达与肌纤维类型及成肌分化的关系

【目的】肌纤维类型及其转化的调节是改善肉质的重要途径,最新研究表明,m6A RNA甲基化修饰在肌肉的分化中发挥着重要作用。以优良的地方品种--广西麻鸡作为研究对象,研究其性成熟日龄不同部位肌纤维类型的组成差异,探究m6A甲基化转移酶相关基因甲基化转移酶样蛋白3/14(methyltransferase like 3/14,METTL3/14)、Wilm肿瘤1-相关蛋白(Wilms’tumor 1-associating protein,WTAP)和病毒样m6A甲基转化酶(vir like m6A methyltransferase associated,VIRMA,也称KIAA1429)在不同部位肌肉组织和成肌细胞分化前后的表达差异,为阐明肌纤维类型组成及转换的调控机理提供参考。【方法】采用ATPase染色法比较广西麻鸡胸部、腿部和背部肌肉群7个部位肌纤维类型、直径和密度等肌纤维性状差异,采用比色法检测成肌细胞分化前后不同时间点内源性m6A甲基化水平,采用实时荧光定量PCR方法检测上述4个基因在广西麻鸡7个部位肌肉以及成肌细胞分化前后的表达差异,并将其与肌纤维性状和m6A甲基化水平进行相关性分析。【结果】广西麻鸡性成熟日龄胸部肌肉群的胸大肌和胸小肌全部由白肌纤维组成,腿部肌肉群的耻坐骨肌内侧头、腓肠肌内侧头和缝匠肌均以红肌纤维为主,而髂胫外侧肌以白肌纤维为主,背部肌肉群的背阔肌则以红肌纤维为主;总体上,红肌纤维比例多的肌肉肌纤维密度显著高于白肌纤维比例多的肌肉。METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429基因表达存在显著的组织和时间特异性,总体上,在红肌纤维为主的肌肉中的表达量高于白肌纤维为主的肌肉,在分化期成肌细胞中的表达量要显著高于增殖期成肌细胞。肌肉中METTL3、METTL14和WTAP具有相似的表达模式,均在背阔肌中表达量最高,显著高于其他肌肉组织;在耻坐骨肌内侧头和腓肠肌内侧头的表达量次之,显著高于缝匠肌、胸大肌、胸小肌和髂胫外侧肌。KIAA1429基因在腓肠肌内侧头的表达量最高,显著高于其他组织;在背阔肌中的表达量次之,显著高于耻坐骨肌内侧头、缝匠肌、胸大肌、胸小肌和髂胫外侧肌;在胸大肌中表达量最低,但与在胸小肌和髂胫外侧肌中的表达量差异不显著。在鸡成肌细胞中,METTL3和METTL14基因表达变化趋势较为一致,均表现出先持续升高后下降的趋势,在刚分离0 h细胞中的表达量最低,在诱导分化后2 d(D2)细胞中的表达量最高,显著的高于增殖期和诱导分化当天(D0)细胞中的表达量。WTAP和KIAA1429基因表达变化趋势也较为一致,均呈现持续上升的趋势,在刚分离细胞中的表达量最低,显著低于其他时间点,至19 h显著上升,D0天略有增加,接着显著上升至D5天达到高峰。同时发现,随着成肌细胞的分化,内源性RNA m6A甲基化水平逐步上升,分化期的水平显著高于增殖期,在D2天甲基化水平最高,显著高于其他各时间点,随后在D5天显著下降,但略高于D0天。肌肉和成肌细胞中,METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429基因的表达两两之间均表现出极显著的正相关关系;肌肉中4个基因的表达与红肌纤维比例存在显著的正相关关系,与白肌纤维比例则呈显著的负相关关系;成肌细胞中4个基因的表达与m6A甲基化水平之间也存在正相关关系。【结论】广西麻鸡不同部位肌肉肌纤维类型组成存在差异,所研究的m6A甲基化转移酶4个基因之间协同表达,并可能对鸡肌纤维类型组成、维持及成肌细胞分化具有一定的调控作用。

m6A甲基转移酶METTL3在结直肠癌中的研究进展

越来越多的证据表明RNA甲基化作为mRNA最常见的修饰方式在肿瘤发生、发展中发挥重要的作用。结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤,严重危害中老年人健康。尽管关于结直肠癌的发生和发展的生物学机制已有许多研究,但对结直肠癌的诊断和预后作用仍存在较大的不足。随着对RNA甲基化研究的深入,发现m6A甲基转移酶METTL3与结直肠癌的发生、发展及预后显著相关;但是,其在结直肠癌中的作用尚存在争议。本文将对m6A甲基转移酶METTL3在结直肠癌发生、发展及预后中的作用进行综述。

m6A甲基转移酶KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察m6A甲基转移酶KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法 通过慢病毒转染的方法在人结肠癌细胞RKO中构建稳定敲低KIAA1429的对照组和实验组细胞系,将其分别命名为sh-NC组、shKIAA1429组,在人结肠癌细胞LS180中构建稳定过表达KIAA1429的对照组和实验组细胞系,将其分别命名为OE-NC组、OE-KIAA1429组。采用Western blotting法检测KIAA1429蛋白来验证转染效率,采用CCK-8实验和平板克隆实验检测KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响,通过差异基因的富集分析预测KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响机制,采用流式细胞术检测KIAA1429转染对细胞周期的影响,采用Western blotting法观察OE-NC组和OE-KIAA1429组细胞内E2F1、CyclinB1、p21蛋白变化。结果 sh-NC组、sh-KIAA1429组KIAA1429蛋白相对表达量分别为0.979±0.028、0.299±0.138,两组比较P=0.002;OE-NC组、OE-KIAA1429组KIAA1429蛋白相对表达量分别为0.446±0.104、0.899±0.153,两组比较P=0.026。CCK-8实验和平板克隆实验结果显示,KIAA1429显著促进了结肠癌细胞的增殖(P均<0.05)。KEGG富集分析提示差异基因主要于细胞周期相关的信号通路得到富集,GO富集分析提示差异基因的功能与遗传物质的复制及细胞周期相关。流式细胞术结果显示,RKO细胞中sh-NC组和sh-KIAA1429组的G0/G1期所占百分比分别为52.07%±1.00%、58.57%±0.98%,两组相比P=0.003;LS180细胞中OE-NC组和OE-KIAA1429组的G0/G1期所占百分比分别为68.37%±0.82%、62.40%±1.34%,两组相比P=0.006。OE-NC组CyclinB1、E2F1、p21蛋白相对表达量分别为0.491±0.116、0.661±0.132、1.007±0.058,OE-KIAA1429组分别为1.254±0.169、1.125±0.135、0.725±0.110,两组相比P均<0.05。结论 m6A甲基转移酶KIAA1429通过调控细胞周期信号通路进而促进结肠癌细胞增殖。

m6a甲基转移酶METTL3调控KAI1/CD82表达介导垂体神经内分泌肿瘤细胞生物学行为的机制研究

目的研究m6a甲基转移酶METTL3调控KAI1/CD82表达介导垂体神经内分泌肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的机制。方法通过实时荧光聚合酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹测定大鼠垂体细胞、大鼠垂体神经内分泌肿瘤细胞系GH3和MMQ中的METTL3与KAI1/CD82表达水平。体外培养GH3细胞,将其随机分为对照组、METTL3过表达质粒组、METTL3空质粒组、METTL3 siRNA组、METTL3 siRNA阴性对照组,经分组转染后,通过qPCR和蛋白免疫印迹检测各组细胞METTL3与KAI1/CD82表达;通过CCK-8实验检测各组细胞活力;通过细胞划痕、Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移侵袭情况;通过甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)实验检测各组细胞KAI1/CD82 m6A甲基化修饰情况。结果相比大鼠垂体细胞,大鼠垂体神经内分泌肿瘤细胞系GH3及MMQ中的METTL3蛋白及mRNA表达水平明显升高,KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组相比,METTL3空质粒组、METTL3 siRNA阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义;与对照组、METTL3空质粒组相比,METTL3过表达质粒组细胞活力、迁移距离、侵袭细胞数、METTL3蛋白及mRNA表达水平、KAI1/CD82 m6A甲基化水平升高(P<0.05),KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05);与对照组、METTL3 siRNA阴性对照组相比,METTL3 siRNA组细胞活力、迁移距离、侵袭细胞数、METTL3蛋白及mRNA表达水平、KAI1/CD82 m6A甲基化水平降低(P<0.05),KAI1/CD82蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论下调METTL3表达可降低KAI1/CD82 m6A甲基化水平,促进KAI1/CD82mRNA转录表达,抑制垂体神经内分泌肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移。

m6A甲基转移酶样3基因在泛癌中的表达及对肿瘤微环境的影响

目的分析m6A甲基转移酶样3(methyltransferase like 3,METTL3)基因在泛癌中的表达及对肿瘤微环境的影响。方法在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载多种癌症患者的基因测序结果及临床资料,分析METTL3基因在各类型肿瘤中的表达以及其与肿瘤微环境相关细胞浸润及预后的关系。结果METTL3基因在大多数恶性肿瘤中表达上调,导致肝细胞癌和前列腺癌患者无进展生存期缩短(P<0.05)。肝细胞癌和前列腺癌中,METTL3表达与多种免疫细胞浸润水平及抑制性免疫检查点基因表达水平相关(P<0.05)。结论METTL3基因表达增加导致肝细胞癌和前列腺癌患者的不良预后,可能通过促进免疫浸润及增加抑制性免疫检查点基因表达发挥作用。

m6A甲基转移酶3在前列腺癌中的表达及其对LNCaP细胞铁死亡的影响

为探究m6A甲基转移酶3(N6-methyladenosine methyltransferase-like 3,METTL3)在前列腺癌中的表达及其对LNCaP细胞铁死亡的影响,本研究运用UALCAN在线数据库分析了METTL3和SLC7A11在正常前列腺组织和前列腺癌组织中的表达差异及其表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,采用TIMER在线数据库分析了METTL3与铁死亡相关基因SLC7A11表达的相关性。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测METTL3 mRNA和蛋白在不同前列腺癌细胞中的表达水平。沉默METTL3的表达后,采用透射电子显微镜观察LNCaP细胞的铁死亡变化,检测SLC7A11的mRNA及蛋白表达情况。UALCAN在线数据库结果显示,METTL3和SLC7A11均高表达于前列腺癌组织,且两者的表达均与前列腺癌患者的Gleason评分、淋巴结转移和TP53突变具有相关性(P<0.05);TIMER分析结果显示,METTL3与铁死亡相关分子SLC7A11的表达呈正相关(P<0.001)。细胞实验结果显示,METTL3在前列腺癌细胞中高表达,而干扰LNCa P细胞METTL3的表达后,细胞铁死亡增加且SLC7A11的表达降低。本研究结果表明,METTL3可能是参与前列腺癌发生铁死亡的重要分子,影响前列腺癌的发生与进展。

mRNA m6A甲基化修饰在2型糖尿病发生发展中的作用机制研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)修饰是mRNA最普遍的一种表观遗传学修饰,该修饰是基于m6A甲基转移酶、m6A去甲基化酶和m6A结合蛋白的一个动态可逆的过程,可影响mRNA的稳定性、剪接、翻译以及出核等,从而参与疾病的发生发展。m6A甲基化修饰通过参与维持胰岛β细胞功能、影响靶组织对胰岛素的敏感性及糖脂代谢等,促进2型糖尿病的发生发展。

m6A甲基化修饰在胃癌中的研究进展

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰是真核细胞mRNA最常见的一种表观遗传修饰方式。m6A甲基化修饰通过调控修饰mRNA,广泛参与细胞内RNA的许多生物学行为,从而影响疾病进展与肿瘤的发生。m6A RNA修饰相关因子在胃癌(gastric cancer,GC)中的异常表达,引发m6A甲基化修饰失调,影响GC的增殖、转移与侵袭、凋亡和耐药等生物学过程。因此,本文就m6A RNA甲基化修饰在GC发生发展中的作用以及化疗耐药予以综述。

METTL3/AMPK通路在七氟烷诱发小鼠认知功能损伤中的作用

目的探讨m6A甲基转移酶3(METTL3)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)通路在七氟烷(SEV)诱发小鼠认知功能损伤中的作用。方法将出生后6 d小鼠随机分为4组(每组8只):Ctrl+sh-NC组、SEV+sh-NC组、Ctrl+sh-METTL3组和SEV+sh-METTL3组。在出生后60~65 d进行Morris水迷宫测试评估空间记忆,然后处死小鼠收集海马组织,通过斑点印迹法分析mRNA m6A甲基化,高尔基染色观察海马DG亚区的树突,免疫印迹分析METTL3、AMPK蛋白表达。体外实验考察METTL3上调对小鼠海马神经元细胞系(HT-22)中m6A水平和AMPK的mRNA稳定性影响。结果暴露于SEV的小鼠海马组织中m6A水平和甲基转移酶METTL3水平显著增加(P<0.05)。与sh-NC+SEV组相比,sh-METTL3+SEV组逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),平台穿越时间和象限时间显著增加(P<0.05),以及DG区树突棘的数量和BDNF、p-AMPK表达均显著增加(P<0.05)。METTL3过表达质粒显著增加了HT-22细胞中的m6A水平(P<0.01),同时降低了BDNF和p-AMPK表达(P<0.05)。METTL3上调显著降低了AMPK mRNA稳定性(P<0.05)。结论METTL3敲低通过m6A介导的AMPK mRNA稳定性的降低减轻了SEV诱导的幼鼠认知功能损伤。

FTO在帕金森病细胞模型中调控机制作用研究

目的探索m6A在帕金森病(PD)细胞模型中的调控机制。方法本实验观察了6-OHDA模拟诱导的帕金森损伤神经元中m6A含量的变化,并检测了调控m6A的甲基转移酶和去甲基化酶的表达水平。建立FTO敲低细胞系,观察了敲低FTO后,PD疾病相关基因和多巴胺信号通路相关基因的表达情况。结果观察到FTO在PD模型细胞中有显著升高(P<0.05),m6A的相对含量有一定程度下降。在敲低了FTO的细胞中,发现与PD疾病密切相关的一些基因的表达并未出现明显变化,但多巴胺信号通路相关基因GRIN1的表达则显著降低(P<0.05)。结论揭示了FTO在帕金森细胞模型对多巴胺代谢的影响和作用机制。