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小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究
1
作者
冯伟
李婉宜
+7 位作者
李明远
张强
巩天祥
刘冯欢
罗俊
邝玉
王保宁
蒋忠华
《西部医学》
2010年第3期400-402,405,共4页
目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA...
目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e。鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌。免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达。结果融合基因mBD6-M2e真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖。免疫小鼠细胞因子表达改变。结论融合基因mBD6-M2e真核表达载体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。
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关键词
β-防御素
6
甲型流感病毒
mbd6-m2e融合基因
淋巴细胞增殖实验
下载PDF
职称材料
人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定
2
作者
相文忠
王飞
+5 位作者
李光富
王新军
刘丰
王群
张兆松
毕志刚
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
北大核心
2005年第7期385-387,427,共4页
目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的...
目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间;PCR扩增HPV11E6基因片段。将含有IFNα2b基因片段的质粒pET32a和含有BamHⅠ,EcoRⅠ酶切位点的HPV11E6同时用BamHⅠ,EcoRⅠ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序。结果测序结果表明成功的将HPV11E6和人IFNα2b通过连接肽(GGSGS)3连接并装入pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致。结论HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础。
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关键词
尖锐湿疣
人乳头瘤病毒
e
6
基因
IFNΑ-
2
B
融合
基因
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职称材料
题名
小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究
1
作者
冯伟
李婉宜
李明远
张强
巩天祥
刘冯欢
罗俊
邝玉
王保宁
蒋忠华
机构
四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室
出处
《西部医学》
2010年第3期400-402,405,共4页
基金
国家自然基金资助项目(NO:30671964)
文摘
目的构建小鼠β-防御素6(mBD6)与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e。鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌。免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达。结果融合基因mBD6-M2e真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖。免疫小鼠细胞因子表达改变。结论融合基因mBD6-M2e真核表达载体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。
关键词
β-防御素
6
甲型流感病毒
mbd6-m2e融合基因
淋巴细胞增殖实验
Keywords
β
6
d
e
f
e
nsin
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e
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6
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2
e
Fusion g
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Lymphocyt
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分类号
R446.9 [医药卫生—诊断学]
R373.13 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定
2
作者
相文忠
王飞
李光富
王新军
刘丰
王群
张兆松
毕志刚
机构
南京医科大学第一附属医院皮肤科
南京医科大学分子生物研究所
广东省人民医院皮肤科
出处
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
北大核心
2005年第7期385-387,427,共4页
基金
江苏省重点学科基金(135-03)
文摘
目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间;PCR扩增HPV11E6基因片段。将含有IFNα2b基因片段的质粒pET32a和含有BamHⅠ,EcoRⅠ酶切位点的HPV11E6同时用BamHⅠ,EcoRⅠ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序。结果测序结果表明成功的将HPV11E6和人IFNα2b通过连接肽(GGSGS)3连接并装入pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致。结论HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础。
关键词
尖锐湿疣
人乳头瘤病毒
e
6
基因
IFNΑ-
2
B
融合
基因
Keywords
Condyloma accuminatum
Human papillomavirus
e
6
g
e
n
e
IFNα-
2
b
Fusion g
e
n
e
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究
冯伟
李婉宜
李明远
张强
巩天祥
刘冯欢
罗俊
邝玉
王保宁
蒋忠华
《西部医学》
2010
0
下载PDF
职称材料
2
人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定
相文忠
王飞
李光富
王新军
刘丰
王群
张兆松
毕志刚
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
北大核心
2005
0
下载PDF
职称材料
已选择
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