小鼠胆盐依赖脂肪酶蛋白原核表达载体的构建与蛋白制备

目的构建小鼠胆盐依赖脂肪酶(BSDL)重组蛋白的大肠埃希菌原核表达载体,制备具有生物学活性的小鼠BSDL蛋白。方法首先应用PCR合成m BSDL的cDNA序列,克隆至原核表达载体p ET-28b,转化大肠埃希菌表达菌种BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白表达。使用His Trap FF crude柱纯化重组m BSDL蛋白。Western blot鉴定后采用尿素浓度梯度降低法进行透析复性。结果成功构建原核表达载体pET-28b-m BSDL,实现该蛋白在E.coli BL21(DE3)表达菌种中的高效表达,并且表达蛋白主要存在于包涵体中。Western blot示获得较好的纯化效果且纯化后成功复性。结论成功构建m BSDL基因的原核表达质粒并制备具有活性功能的胆盐依赖脂肪酶,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。