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mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用
1
作者
易绍琼
彭虹
+4 位作者
王华
王岚
陈洁
赵光宇
高杰英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期579-581,共3页
目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通...
目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RTPCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定。将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PEantiNK1.1和CychromeantiCD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例。结果:通过RTPCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHOmCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加。结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖。
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关键词
mcd1.1
NKT细胞
细胞增殖
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题名
mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用
1
作者
易绍琼
彭虹
王华
王岚
陈洁
赵光宇
高杰英
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所病源微生物生物安全国家重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期579-581,共3页
基金
国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(G1999054103)
文摘
目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RTPCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定。将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PEantiNK1.1和CychromeantiCD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例。结果:通过RTPCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHOmCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加。结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖。
关键词
mcd1.1
NKT细胞
细胞增殖
Keywords
mcd1.1
NKT cell
cell proliferation
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用
易绍琼
彭虹
王华
王岚
陈洁
赵光宇
高杰英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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