我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌碳青霉烯酶不同检测方法的比较

目的探讨评价碳青霉烯酶的不同检测方法,为实验室检测及临床诊疗提供依据。方法选用EDTA碳青霉烯灭活方法(mCIM/eCIM)检测耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)菌株耐药表型,以两种免疫层析碳青霉烯酶检测试剂盒、荧光定量PCR法检测CRE菌株基因型。统计学方法采用Kappa一致性检验,比较各种检测方法的临床可操作性。结果经荧光定量PCR扩增后基因测序显示73株肺炎克雷伯菌中71株携带KPC基因,2株携带NDM基因;7株大肠埃希菌中6株携带NDM基因,1株携带KPC基因;mCIM联合eCIM检测KPC的灵敏度为68.1%(49/72),检测NDM的灵敏度为100.0%(8/8);NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测KPC和NDM灵敏度为100.0%、特异性为100.0%。结论NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测可以成为检测我国最常见碳青霉烯酶的快速、方便的诊断工具,从而有助于控制产碳青霉烯酶的分离株在医院间的传播,为院感防控工作起到至关重要的意义。

宁夏某医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及分子机制研究

目的分析宁夏地区某三甲综合医院临床标本分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的分布及耐药情况,了解该院CRE耐药基因的主要流行现状,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供参考。方法收集2017年1月1日至2018年12月31日住院患者临床分离的CRE菌株,利用自动化仪器进行细菌鉴定和药物敏感性试验(简称药敏试验)检测,利用改良碳青霉烯酶灭活(mCIM)试验联合乙二胺四乙酸-碳青霉烯酶灭活(eCIM)试验检测耐药菌的表型,并采用PCR检测ESBLs(blaSHV、blaTEM)、碳青霉烯酶(blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48)共7种主要的耐药基因,最后对数据进行统计分析。结果临床标本共收集CRE菌株77株,主要为肺炎克雷伯菌52株、大肠埃希菌25株;标本来源主要为痰液、无菌中段尿及血液等;标本来源科室主要为肝胆外科、重症监护室(ICU)和急诊科;药敏试验表明77株耐药菌对β-内酰胺类药物的耐药率均大于95.00%,对喹诺酮类抗菌药物耐药率均为75.00%左右;mCIM试验阳性有58株,eCIM试验阳性有35株、阴性有23株。应用PCR检测耐药基因,ESBLs以blaTEM为主,检出率为49.35%,blaSHV检出率为23.38%;碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,检出率为36.36%,其余blaKPC、blaOXA-48阳性率分别为24.68%、15.58%,未检测到blaVIM和blaIMP基因。测序发现28株blaNDM阳性菌中有10株为blaNDM-1,18株为blaNDM-5。结论宁夏某医院CRE耐药基因检出率较高,CRE对常用抗菌药物耐药率高,应多部门联动加强对CRE的监测与防控,合理应用抗菌药物。

临床克雷伯菌属碳青霉烯酶三种检测方法的实验比较研究

目的对聚合式酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、改良碳青霉烯酶灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)+EDTA碳青霉烯酶灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)和GeneXpert三种方法检测碳青霉烯酶的性能进行了比较,为临床选择合适的检测方法提供依据。方法收集2019年1月~2021年5月临床分离的43株碳青霉烯类抗生素耐药及37株碳青霉烯类抗生素敏感克雷伯菌属菌株,用PCR法和GeneXpert试验检测碳青霉烯酶基因,mCIM+eCIM试验检测碳青霉烯酶。以PCR法为金标准,对三种试验方法检测结果进行比较。结果43株耐碳青霉烯克雷伯菌属经PCR扩增检测有40株携带碳青霉烯耐药基因,blaKPC 30株,blaNDM 8株,blaIMP 2株;37株碳青霉烯类敏感克雷伯菌属经PCR扩增均未检出碳青霉烯酶基因。与PCR法结果相比,mCIM+eCIM试验检测丝氨酸酶及金属酶表型结果敏感度和特异度均为100%,Kappa值为1;GeneXpert技术敏感度和特异度分别为94.9%,97.6%,Kappa值为0.925。结论mCIM+eCIM试验和GeneXpert与PCR结果一致程度强,但鉴于临床诊断的时效性,GeneXpert技术操作简单,耗时短,结果准确可信且易于判读,对于有条件的医院,可以用于临床微生物实验室常规开展。

医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床特征和耐药分析

目的研究石家庄市人民医院156株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床特征和耐药情况,为防控院内感染和优化临床用药提供强有力的依据。方法收集2019年1月1日至2020年5月1日分离的156株CRE,回顾性调查,同源性分析,采用WHONET 5.5软件进行统计分析。结果收集156株CRE中,以肺炎克雷伯菌(80.1%)为主,标本来源以痰液(41.7%)为主。科室分布以重症监护病房ICU(48.7%)为主,改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM试验)阳性率为82.1%,以肺炎克雷伯菌为主(86%),EDTA改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM试验)分析其产酶类型,其中肺炎克雷伯菌主要以产丝氨酸酶为主(86.4%),大肠埃希菌以产金属碳青霉烯酶为主(77.8%)。结论CRE临床感染现状较为严峻,应加强监测,防止并控制传播;mCIM试验与eCIM试验检测快速简便,有较高的应用价值。

免疫胶体金试剂盒检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的临床性能评价

目的探讨商品化免疫胶体金试剂盒检测临床碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)产碳青霉烯酶的价值,以期及早预防和控制CRE的流行和暴发。方法收集2016年1月至2020年12月广东省2家三甲医院临床分离的88株非重复CRE,其中广东省中医院64株,中山大学附属第一医院24株。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测5种常见的碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP-4、blaVIM和blaOXA-48),并用Sanger法测序验证。采用改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem in activation method,mCIM)联合EDTA碳青霉烯灭活试验(EDTA-modified carbapenem in activation method,eCIM)筛选碳青霉烯酶。根据基因型,采用4种免疫胶体金试剂盒(KPC、NDM、IMP-4和VIM酶试剂盒)检测碳青霉烯酶,进一步对碳青霉烯酶表型试验和PCR进行统计学比较和分析。结果88株CRE中,30株携带blaKPC,24株携带blaNDM,9株携带blaIMP-4,5株携带blaVIM,20株未携带碳青霉烯酶基因。mCIM试验灵敏度和特异度分别为97.1%(66/68)和100.0%(20/20),2株分别携带blaNDM和blaIMP-4阴沟肠杆菌为假阴性。mCIM联合eCIM检出36株产金属β-内酰胺酶,与基因型相符。免疫胶体金试剂盒的总体灵敏度和特异度分别为98.5%(67/68)和100.0%(20/20)。KPC、NDM和VIM酶胶体金试剂盒的灵敏度和特异度均为100.0%。仅1株携带blaIMP-4的阴沟肠杆菌在IMP-4酶试剂盒检测中为假阴性,推测与IMP-4酶低表达量有关。Fisher精确检验显示,免疫胶体金试剂盒与mCIM联合eCIM差异无统计学意义(P<0.001)。结论免疫胶体金试剂盒(尤其是KPC和NDM酶试剂盒)在肠杆菌中灵敏度高、特异度强,简便、快速且经济有效,有望成为临床和实验室快速检测碳青霉烯酶的新方法。

改良Carba Np试验快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯耐药表型

目的探讨改良Carba Np试验快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯类耐药表型的应用价值。方法选取2022年邢台市第三医院从临床血培养标本分离的163株耐碳青霉烯肠杆菌目细菌菌株,分别采用改良Carba Np试验、mCIM/eCIM对菌株进行表型检测,以PCR碳青霉烯酶表型鉴定结果为金标准,比较两种改良方法的检测结果。结果163株耐碳青霉烯肠杆菌目细菌有8个菌种,其中肺炎克雷伯菌数量最多,共134株(82.21%);其次是大肠埃希菌17株(10.41%)。科室来源中ICU居首位,72株(44.17%);其次为外科20株(12.27%)。药敏试验提示氨苄青霉素、头孢唑肟、头孢曲松、亚胺培南、厄他培南耐药率100%,头孢他啶、阿奇霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高于90%,检测的16种抗菌药物中仅阿米卡星耐药率低于50%。表型检测结果显示,Carba Np试验阳性161株,阳性率98.77%;mCIM/eCIM试验阳性154株,阳性率94.47%;肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌表型试验阴性。134株肺炎克雷伯菌中101株携带blaKPC-2,3株携带blaNDM,2株携带blaIMP,28株基因检测阴性;17株大肠埃希菌中5株携带blaKPC-2,9株携带blaNDM。以PCR结果为标准,改良Carba Np试验、mCIM/eCIM试验在耐碳青霉烯肠杆菌中均具有较高的灵敏度与特异性,两种方法的灵敏度与特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论改良Carba Np试验能快速鉴定碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌菌株,具有较好的临床应用价值。

三种检测常见碳青霉烯酶型方法的评估研究

目的评估mCIM联合eCIM试验、Carba-5和Carba-R三种方法检测碳青霉烯类耐药细菌(carbapenem-resistant organisms,CRO)中常见碳青霉烯酶型的性能。方法随机挑选2019年1月至2020年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的122株非重复CRO菌株,应用生物梅里埃MALDI-TOF MS全自动快速质谱仪对菌株进行菌种鉴定,分别采用改良碳青霉烯类抗生素灭活试验(mCIM联合eCIM试验)、Carba-5检测条和Carba-R试剂盒对所有菌株进行碳青霉烯酶型检测;以PCR法检测结果为金标准,评价上述3种检测方法的性能。结果122株CRO菌株属于12个不同菌种,PCR法碳青霉烯酶型检测结果:共112株检测结果阳性,KPC-2型阳性70株,占57%(70/122),其中肺炎克雷伯菌46株,铜绿假单胞菌12株,其他菌株12株;OXA-232型阳性19株占15%(19/122),均为肺炎克雷伯菌;NDM型阳性20株占16%(20/122),其中NDM-1型阳性7株和NDM-5型阳性13株,以大肠埃希菌为主(12/20);IMP-4型阳性2株,分别为肺炎克雷伯菌和阿氏肠杆菌;检测出1株同时产KPC-2和IMP-4的肺炎克雷伯菌;未检测到VIM型碳青霉烯酶;有10株未检出以上5种基因型。与金标准PCR方法相比mCIM联合eCIM试验灵敏度为95.65%(22/23),特异度为100.00%(90/90),阳性预测值(PPV)为100.00%(22/22),阴性预测值(NPV)为98.90%(90/91),诊断准确度为99.11%(112/113);Carba-5和Carba-R试验的灵敏度、特异性、PPV、NPV和诊断准确度均为100%。结论碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌临床微生物实验室可以使用Carba-5试验快速、准确地检测常见碳青霉烯酶型,有条件的实验室还可以选择Carba-R试验,并监测患者是否存在碳青霉烯耐药菌的定植;而Carba-5和Carba-R检测结果阴性时,建议结合药敏结果进行mCIM联合eCIM试验检测。

碳青霉烯酶抑制剂检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的效能

目的评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能。方法收集2018-2020年广东省中医院临床分离的73株非重复CRE。采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测10种常见β-内酰胺酶基因。以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能。结果mCIM试验阳性54株,产丝氨酸碳青霉烯酶20株,产金属β-内酰胺酶34株,符合率为98.63%(72/73)。碳青霉烯酶抑制剂检出56株产碳青霉烯酶,产A类酶22株,产B类酶34株。1株产OXA-181的摩根摩根菌为假阴性,2株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶DHA的CRE为假阳性。碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为98.18%(54/55)和88.89%(16/18),符合率为95.89%(70/73)。结论mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶。碳青霉烯酶抑制剂符合率较mCIM联合eCIM试验稍低,能有效鉴别A类和B类酶,但在D类酶和高产AmpC酶的CRE检测上仍存在不足。碳青霉烯酶抑制剂与mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药。