CIC-3氯离子通道在肾纤维化中的研究进展

肾纤维化作为众多慢性肾脏疾病的核心病理改变,常作为终末期肾脏疾病的典型归宿,其病理特征显著,包括细胞外基质的异常增生、肾小管的结构改变(如扩张或萎缩)以及细胞的凋亡现象。遗憾的是,截至目前,医学界尚未找到针对肾纤维化的有效治疗方法,这仍是医学领域亟待攻克的难题。CIC-3电压门控性氯通道广泛分布在细胞膜上,在离子转运、免疫应答、细胞增殖、分化和凋亡等生理过程中发挥显著作用。CIC3有望成为肾纤维化新的治疗靶点,减缓和逆转慢性肾脏疾病的进程。本文综述CIC-3氯离子通道在肾纤维化中的研究进展,对指导临床实践和提高肾脏疾病患者的生活质量具有重要意义。

SWE检查联合氯离子通道蛋白-3在诊断宫颈癌中的应用

本文探究实时剪切波弹性成像(SWE)联合氯离子通道蛋白-3(ClC-3)诊断宫颈癌的价值。选取疑似宫颈病变的105例患者作为研究对象,包括50例良性病变患者(良性病变组)和55例宫颈癌患者(宫颈癌组),选取同期50例体检健康者作为对照组。通过SWE检查所有受试者的弹性模量最大值、弹性模量平均值。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血清ClC-3 mRNA水平。以临床病理诊断为金标准,通过ROC曲线评价弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA诊断宫颈癌的价值。与对照组和良性病变组相比,宫颈癌组患者弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA水平升高(P<0.05)。弹性模量最大值和弹性模量平均值均与ClC-3 mRNA显著正相关(r=0.447,P<0.001),与单一检查相比,弹性模量最大值、弹性模量平均值、ClC-3 mRNA联合诊断宫颈癌的AUC和敏感度升高(P<0.05)。SWE成像参数与血清ClC-3 mRNA变化与宫颈癌发生具有一定相关性,SWE联合血清ClC-3 mRNA检查具有较高的宫颈癌诊断价值。

ClC-3氯离子通道对高分化鼻咽癌细胞突起形成的影响

目的:探讨ClC-3氯离子通道在高分化鼻咽癌CNE-1细胞突起形成中的作用。方法:采用免疫荧光技术(Alexa Fluor 488标记抗体)检测CNE-1细胞中ClC-3蛋白的分布;MQAE荧光探针检测细胞内氯离子浓度;吸附式单通道膜片钳技术记录氯离子单通道活动;采用FAM标记的siRNA转染细胞,实验分为对照组、阴性对照(NC) siRNA组和ClC-3 siRNA组;激光共聚焦显微镜观察转染后绿色荧光情况,流式细胞术检测转染效率,Western blot法测ClC-3蛋白的表达,倒置显微镜下观察CNE-1细胞突起形成情况。结果:ClC-3蛋白主要分布于细胞膜和细胞质,且在细胞膜突起形成部位明显聚集;细胞突起处MQAE荧光弱,氯离子浓度较高,而突起根部荧光强,氯离子浓度较低;突起根部记录到翻转电位为4.06 mV的单通道电流,在-120 mV钳制电压下,该通道电导约为78.4pS;siRNA转染细胞48 h后,ClC-3 siRNA组细胞ClC-3蛋白表达量显著降低(P<0.01),且ClC-3 siRNA组细胞无片状伪足伸出,而对照组和NC siRNA组细胞伸出明显的片状伪足;此外,3组细胞均有数量不等的丝状伪足形成。结论:ClC-3影响CNE-1细胞贴壁生长时胞膜伸出突起、形成片状伪足的过程。

氯离子通道CLC-3在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究氯离子通道CLC-3在乳腺癌组织中的表达,探讨其在乳腺癌诊断方面的临床意义及为乳腺癌发生发展方面进一步研究提供基础。方法在27例行乳腺癌改良根治术的乳腺癌患者中,分别将乳腺癌癌灶和周围正常组织用抗CLC-3抗体进行免疫组织化学染色。结果CLC-3蛋白主要表达在瘤细胞的胞浆和/或胞膜上。由于没有组间差异,应用χ2检验进行组间比较,其中乳腺癌患者21例(77.77%)阳性,6例(22.33%)阴性;乳腺正常组织中3例(11.1%%)阳性,24例(88.9%)阴性。χ2为24.3,P小于0.05,说明良恶性之间有明显差异。结论氯离子通道CLC-3在乳腺癌组织中高表达,恶性之间有明显差异。提示氯离子通道在乳腺癌发生及发展过程中有着病理生理及病理方面的临床意义,为乳腺癌的诊断及进一步研究提供临床应用基础。

氯离子通道-3反义寡核苷酸对内皮素-1促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞的抑制作用

目的观察氯离子通道-3(chloride channel3,ClC-3)反义寡核苷酸(antisense oli-gonucleotides,AS-ODN)对内皮素1(endothelin-1,ET-1)促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,BCECs)的抑制作用。方法 BCECs细胞悬液接种培养12h后,通过脂质体介导转染不同浓度的ClC-3寡核苷酸。体外培养BCECs24h后加入200pmol.L-1ET-1,继续培养48h。通过倒置荧光显微镜观察BCECs寡核苷酸的摄取。采用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。采用MTT法观察BCECs增殖状况,计算细胞存活率,同时应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果寡核苷酸可被培养的BCECs摄取。ClC-3mRNA与蛋白的表达变化呈平行关系。与不加时相比,ClC-3AS-ODN浓度依赖性地减少BCECsClC-3mRNA和蛋白的表达,同样也浓度依赖性地降低BCECs MTT吸光度值(OD值)和细胞存活率。经100mg·mL-1ClC-3AS-ODN处理后,与对照组相比,细胞G0/G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,出现明显的凋亡峰,增殖指数明显下降。结论 ClC-3AS-ODN可能通过减少ClC-3mRNA和蛋白的表达,浓度依赖性抑制ET-1对体外培养BCECs的增殖作用,并使细胞周期停滞在G1期。

氯离子通道蛋白-3对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的:观察氯离子通道蛋白-3(ClC-3)对胶质瘤BT-235细胞增殖和侵袭的影响的子机制。方法:采用siRNA技术构建ClC-3表达沉默的人胶质瘤BT-235细胞株,设为siClC-3组,并设置空白对照组和空载体组;采用Western bolting检测3组细胞中ClC-3的表达,CCK8法检测细胞增值活性,ranswell实验用于测定细胞侵袭能力,通过测量细胞容积检测细胞调控性容积下降率,流式细胞术用于测定细胞周期;采用Western bolting检测cyclin D1、MMP-2和MMP-9的表达。结果:相对于空白对照组,siClC-3组ClC-3表达明显降低(P<0.01),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞迁移率明显降低(P<0.01);空白对照组细胞调控性容积下降率为(79.35±2.31)%,而siClC组仅为(19.46±1.76)%,差异有统计学意义(P<0.01);培养48 h的空白对照组BT-235细胞G0/G1期占比率为(57.2±3.1)%,而siClC-3组G0/G1期占比率提升至(71.3±4.0)%,产生明显的G0/G1期阻滞,差异有统计学意义(P<0.01);相对于空白对照组,siClC-3组G1期调控蛋白cyclin D1、侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9表达水平明显降低(P<0.01)。结论:ClC-3能明显增强胶质瘤BT-235细胞增殖和侵袭能力,其作用机制与增加细胞调控性容积下降率,诱导cyclin D1、MMP-2和MMP-9表达有关。

缺氧缺糖/复氧复糖对大鼠皮质及海马神经元ClC-3氯离子通道表达的影响

目的:研究原代培养大鼠前额叶皮质和海马神经元缺氧缺糖/复氧复糖后电压门控氯离子通道3(voltage-gated chloride channel 3,ClC-3)在mRNA和蛋白水平的表达。方法:取原代培养8 d的大鼠皮质和海马神经元,随机分为对照组和模型组。模型组缺氧缺糖30 min后再复氧复糖,于复氧复糖后6、24、48、72 h采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)、Western blot技术检测ClC-3 mRNA及蛋白水平的表达。结果:原代培养大鼠皮质和海马神经元ClC-3 mRNA及蛋白水平呈低水平表达。缺氧缺糖/复氧复糖24 h后培养皮质神经元ClC-3mRNA及蛋白水平开始上调,48 h仍然高表达,72 h后下降(P<0.05)。海马神经元ClC-3 mRNA在缺氧缺糖/复氧复糖6 h后即开始升高,高峰持续从24～48 h(P<0.05),72 h下降至略高于正常水平(P<0.05)。海马神经元ClC-3蛋白在24 h后表达开始逐渐升高,至72 h仍高表达(P<0.05)。结论:C1C-3通道表达上调可能增强复氧复糖后细胞对氧化应激、炎性反应的同时也促进细胞凋亡。

氯离子通道ClC-3研究进展

ClC 3氯离子通道广泛分布于组织器官和各种细胞 ,ClC 3氯离子电流呈外向整合电流 ,在正性电位通道灭活 ,0mV左右出现反转电位 ,通道的离子渗透选择性是I->Cl-,能被氯通道阻断剂DIDS、tamoxifen和细胞外ATP抑制 ,被PKC磷酸化调节 。

心脏ClC-3容积感受性氯离子通道研究进展

本文对于ClC-3容积感受性氯离子通道在心血管疾病中的作用进行综述,该通道在心肌细胞容积稳定、心肌缺血再灌注、心肌肥厚及心力衰竭等状态下的电生理活动中发挥重要作用,并为多种心律失常的机制探讨及治疗提供理论依据。

氯离子通道3在脑缺血再灌注大鼠皮质和海马中的表达

目的研究大鼠脑缺血再灌注后额叶皮质和海马电压门控氯离子通道3(ClC-3)mRNA和蛋白的表达。方法健康雄性SD大鼠48只随机分为对照组(n=8)、假手术组(n=8)和模型组(n=32),对照组不作任何处理,模型组按再灌注后处死的时间分为6、24、48、72 h共4个亚组。除对照组外用线栓法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,模型组将预先经多聚赖氨酸及肝素处理过的3/0尼龙线经切口顺颈总动脉插入颈内动脉(19.5±0.5)mm,而假手术组置线栓深度为10 mm。应用RT-PCR、Western blot技术检测大鼠皮质和海马ClC-3 mRNA及蛋白的表达。结果 ClC-3 mRNA在对照组及假手术组大鼠额叶皮质和海马中均有少量表达。模型组大鼠额叶皮质与海马在缺血再灌注6 h后ClC-3 mRNA开始升高,24 h为表达高峰,48 h开始下降,与对照组和假手术组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot与RT-PCR结果基本一致。结论 ClC-3表达上调可能增强缺血再灌注后细胞对氧化应激、炎性反应、凋亡的适应性。

腹腔注射去甲肾上腺素小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3表达变化及其意义

目的观察腹腔注射去甲肾上腺素(NE)小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3(Cl C-3)表达变化,并探讨其意义。方法将C57BL/6小鼠分为NE组、酚妥拉明(Phe)+NE组、对照组; NE组每天腹腔注射NE(2 mg/kg); Phe+NE组每天先腹腔注射Phe(8 mg/kg),2 h后再腹腔注射NE(2 mg/kg);对照组每天腹腔注射等量生理盐水。所有药物连续注射7 d后,测算各组小鼠心脏指数并观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3和心房钠尿肽(ANF) mRNA,Western blotting法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3蛋白。结果 NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心脏指数分别为5. 22±0. 46、4. 80±0. 23、4. 61±0. 25,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05; NE组小鼠心肌细胞和心肌肌束排列异常,心肌细胞及细胞核异常肥大、变形,细胞核聚集,出现明显的心脏重构、心肌细胞增大现象。NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心肌组织中Cl C-3 mRNA的相对表达量分别为0. 50±0. 10、1. 16±0. 38、1. 00±0. 00,ANF mRNA的相对表达量分别为2. 95±1. 78、1. 96±0. 75、1. 00±0. 00,Cl C-3蛋白的相对表达量分别为0. 46±0. 02、0. 68±0. 02、0. 69±0. 04,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05。结论 NE可诱导小鼠心肌肥厚,其机制可能与其抑制Cl C-3 mRNA和蛋白的表达有关。

ClC-3氯离子通道与肿瘤

ClC-3氯离子通道的功能主要是调节细胞容积和保持胞内囊泡腔电中性,是正常细胞生长和增殖必不可少的元件。近年研究发现ClC-3也与肿瘤的发生和发展密切相关,其在肿瘤组织中呈高表达,在肿瘤细胞周期和凋亡的调控以及细胞迁移等过程中扮演了重要的角色,有望成为抗肿瘤新靶点。

钙激活的氯离子通道A4通过抑制JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3信号通路对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨钙激活的氯离子通道A4(CLCA4)对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测正常人食管鳞状上皮细胞与人食管癌细胞中CLCA4的表达;将合成的CLCA4过表达载体及其对照分别转染至食管癌细胞Eca109,分别记作CLCA4过表达(pcDNA-CLCA4)组、CLCA4阴性对照(pcDNA-NC)组,并将未转染的细胞作为阴性对照(NC)组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移及侵袭能力。JAK2/STAT3信号通路激活剂p-JAK2多肽对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cy⁃clinD1)、依赖性激酶抑制因子(P21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、JAK2、STAT3、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)的表达水平。结果与Het-1A相比,人食管癌细胞KYSE170、Eca109、TE10中CLCA4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CLCA4组细胞存活率显著降低[(52.16±11.41)%比(99.57±13.49)%,P<0.05],迁移细胞数[(56.47±10.03)%比(112.49±13.52)%]与侵袭细胞数[(63.43±9.87)%比(123.47±16.58)%]减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3的表达水平降低(P<0.05),P21的表达水平升高(P<0.05);激活JAK2/STAT3信号通路可逆转CLCA4过表达对Eca109细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论CL⁃CA4过表达可抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关。

钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用

目的 :探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase 3激活的关系 .方法 :在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中 ,观察钾、氯离子通道阻断剂 (Quinine ,BaCl2 ,DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase 3活性及细胞膜完整性的影响 .实验分为阴性对照组 (无药物处理 )、阳性对照组 (staurosporine处理 )与药物干预组 (staurosporine加离子通道阻断剂 ) .结果 :①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡 .与阳性对照组 (2 9.8% )相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是 5 9.7% ,4 7.2 % ,5 8.6 %和 6 0 .7% ,均有显著的增加 (P <0 .0 1 ) .相对应的DNA片断电泳显示 :Qui nine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解 .②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3活性的激活 ,与阳性对照组 (6 0 0 .4 % )相比细胞的Caspase 3活性在Quinine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组分别是 1 84 .2 % ,2 1 6 .3% ,1 75 .6 %和2 2 1 .4 % ,均有显著的抑制 (P <0 .0 1 ) .③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于 1 0 % .结论 :在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中 ,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3?

过表达氯离子通道蛋白3对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用与机制

目的探讨氯离子通道蛋白3(ClC-3)基因过表达对异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用及机制。方法运用腺相关病毒9(AAV9)感染方法构建ClC-3过表达小鼠模型和原代心肌细胞模型,采用蛋白质印迹法与qRT-PCR检测小鼠心脏组织和原代心肌细胞中ClC-3的表达以确定模型是否建立成功。32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只。对照组连续7 d腹腔注射生理盐水,ISO组连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-bv+ISO组用空白载体AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1。采用心脏超声检查小鼠心功能变化,计算心脏体重指数,采用qRT-PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)的mRNA表达水平,H-E染色观察左心室形态学变化,苦味酸-天狼星红(PSR)染色观察心脏组织胶原纤维变化。取乳鼠摘出心脏,体外培养原代心肌细胞并分为4组,对照组未予任何干预,ISO组用0.1μmol/L ISO干预48 h,AAV9-ClC-3组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染细胞48 h,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒和0.1μmol/L ISO共同干预48 h。采用芯片膜片钳技术检测小鼠原代心肌细胞的容积激活性氯电流(ICl,vol)。结果蛋白质印迹法和qRT-PCR检测结果均表明ClC-3过表达小鼠和原代心肌细胞模型成功建立。AAV9介导的ClC-3过表达能缓解ISO诱导的小鼠心脏体重指数、收缩末期室间隔厚度、收缩期左室后壁厚度和舒张期左室后壁厚度的增加,改善心脏组织形态学异常和心脏纤维化,减少心脏组织中ANP、BNP mRNA表达的增加,并能体外抑制ISO导致的心肌细胞ICl,vol降低。结论ClC-3过表达可预防ISO诱导的小鼠心肌肥厚,其机制可能与心肌细胞ICl,vol激活有关。

氯离子通道蛋白-3在胶质瘤免疫逃逸中的作用及其机制

近些年来免疫逃逸在肿瘤发生、发展中所起的作用受到越来越多学者的关注。胶质瘤起源于神经上皮组织,是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其复发率高、预后差。究其原因,高度侵袭性和免疫逃逸是导致胶质瘤患者预后不良的原因之一。氯离子通道蛋白-3(chloride channel-3,Cl C-3)作为氯通道家族一员,在胶质瘤中高表达并广泛参与细胞容积调节、增殖、迁移及凋亡等多种生理过程;但其是否介导胶质瘤的免疫逃逸目前未见报道。

氯离子通道在离体人肺泡上皮液体清除过程中的作用

目的探讨囊性纤维化跨膜传导调节体(CFTR)氯离子通道在离体人肺脏肺泡上皮液体清除过程中的作用以及β3-肾上腺素能受体激动剂BRL-37344对于人肺泡上皮液体清除能力的影响机制。方法采用离体人肺脏,以肺泡内液体白蛋白浓度的变化来测定人肺脏肺泡液体清除率(AFC)。结果BRL-37344可以提高AFC(P<0.05)。选择性β3-肾上腺素能受体抑制剂SR-59230A、CFTR氯通道抑制剂CFTRinh-172圴可以部分抑制BRL-37344引起的AFC的提高(P<0.05)。CFTR氯离子通道开放剂NS004可以提高AFC(P<0.05),钠离子通道抑制剂氨氯吡咪和CFTRinh-172可以完全抑制NS004提高AFC的作用(P<0.001)。同时氨氯吡咪可以完全阻断BRL-37344提高AFC的作用。结论BRL-37344和NS004可以提高离体人肺脏AFC。BRL-37344对AFC的提高作用部分是通过CFTR氯离子通道调节的,CFTR氯通道的开放剂NS004对于AFC的调节作用可能是通过钠离子通道和氯离子通道共同完成的。

氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响

背景氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-（3-苯丙胺）苯甲酸（NPPB）对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用，而小梁细胞上也存在C1C型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道，但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚。目的探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×10^6个／ml的密度接种于96孔培养板，将不同浓度（10、50、100μmol／L）的NPPB分别加入小梁细胞培养基中，通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度（A）值表示；采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期。将100mg／L5-氟尿嘧啶（5-Fu）加入培养的细胞中，而另-组培养的细胞中加入100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB，用AnnexinV—PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况；罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位（Adam），分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响。结果3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义（F=7．230，P=0．006），50Izmol／L、100Fxmol／LNPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10μmol／LNPPB组，50μmol／LNPPB组、100μmol／LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义（t=1．610，P=0．025；t=12．270，P=0．001）。小梁细胞培养基中加入NPPB48h后，G0／G1期的细胞比例增多，S期细胞比例减少，各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。用5-FU作用24h及48h后，100mg／L5-Fu组和100mg／L5-FU＋100μmol／LNPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加（t24h=2．130，P=0．023；t48h=4．810，P=0．011）；100mg／L5-Fu＋100μmol／LNPPB组细胞凋亡率明显高于100mg／L5-Fu组，差异均有统计学意义（t24h=1．980，P=0．037；t48h=1．290，P=0．028），小梁细胞线粒体膜电位降低，差异均有统计学意义（t24h=1．580，P=0．029；F48h=6．200，P=0．015）。结论氯离子通道阻滞剂NPPB可抑制小梁细胞增生，抑制小梁细胞通过G1／S期限制点进入s期；NPPB对5-Fu诱导的小梁细胞凋亡有促进作用，与内源性线粒体凋亡通路相关。

血管紧张素-(1-7)通过调控ClC-3氯离子通道及Nec对抗高糖诱导的内皮细胞损伤

目的:探讨ClC-3氯离子通道及RIP3在高糖(HG)损伤血管内皮细胞中的作用及血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ClC-3氯离子通道及RIP3抑制HG引起的心肌细胞损伤。方法:应用western blot法检测ClC-3、RIP3(receptor-interacting protein kinase 3)蛋白的表达;细胞计数盒(CCK-8)测定细胞存活率;DCFH-DA染色荧光显微镜着测定细胞内ROS水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP);SOD试剂盒检测SOD水平。结果:应用2μmol·L-1 Ang-(1-7)、20μmol·L-15-nitro-2-(3-phenylpropyl-amino)benzoic acid(NPPB)或10μmol·L-1 Nec-1(necrostatin 1)共处理HUVECs 24 h能显著地抑制HG对ClC-3、RIP3表达的上调作用;40 mmol·L-1葡萄糖(HG)处理心肌细胞24 h引起明显的损伤作用,是细胞存活率、SOD和MMP降低,细胞内ROS增多;Ang-(1-7)、NPPB及Nec-1或1μmol·L-1 Ang-(1-7)共处理HUVECs明显地抑制上述HG引起的损伤作用。结论:Ang-(1-7)通过抑制ClC-3氯离子通道及Nec(Necroptosis)保护血管内皮细胞对抗HG引起的损伤。

氯离子/钾离子通道阻滞剂对成骨细胞增殖的影响

目的观察氯离子和钾离子转运体阻滞剂及氯离子/钾离子通道阻滞剂是否影响MC3T3-E1成骨细胞的增殖。方法采用体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入D IOA(氯离子和钾离子转运体阻滞剂,100和500μM)、NPPB(10和300μM,氯离子通道阻滞剂)和喹啉(10和500μM,钾离子通道阻滞剂),检测细胞增殖情况。结果 D IOA抑制MC3T3-E1成骨细胞的增殖,不同浓度的NPPB和喹啉同样也能够减少MC3T3-E1成骨细胞的增殖。结论细胞内氯离子的浓度升高或降低都会抑制MC3T3-E1成骨细胞的增殖。