mFLOS-LAMP方法在快速检测结核分枝杆菌复合群中的应用价值

目的建立多重环介导等温扩增荧光环引物自淬灭探针(multiplex fluorescence of loop primer upon self dequenching-loop mediated isothermal amplification,mFLOS-LAMP)方法,并评价其快速检测结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)的临床应用价值。方法选取2022年2月—2023年12月新疆医科大学第一附属医院及第八附属医院就诊的肺结核患者42例和患有其他呼吸道疾病的患者46例,收集晨痰标本,提取样本DNA。以MTBC插入序列IS1081和IS6110基因为检测靶标,分别设计一套特异性引物,利用FLOS探针的设计原理,在每套基因的环引物上分别标记相对应的荧光团,建立含有双靶标的mFLOS-LAMP方法,对其检测结果进行分析。结果利用已优化好的反应体系,用结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA系列稀释液检测mFLOS-LAMP检出下限为500 fg/μL,mFLOS-PCR检出下限为5 pg/μL,mFLOS-LAMP的检出下限比mFLOS-PCR的低10倍。mFLOS-LAMP方法对24种微生物菌株均无交叉反应,具有较强的特异性。临床标本检测显示,以临床诊断结果为参照标准,mFLOSLAMP方法的灵敏度和特异度分别为92.9%、100.0%,Kappa值为0.931,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线下面积为0.964。以培养法为金标准,mFLOS-LAMP方法的灵敏度为92.6%。mFLOS-LAMP方法与Xpert MTB/RIF检测的一致率为94.3%(83/88);Kappa为0.885,mFLOS-LAMP方法与Xpert MTB/RIF检测具有较高的一致。mFLOS-LAMP方法和mFLOS-PCR方法的一致率为93.2%(82/88),Kappa值为0.861。结论mFLOS-LAMP方法具有检测快速、特异性强、灵敏性好、准确性高和仪器设备适用范围广等优点,可作为新型MTBC检测方法。