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mGM-CSF重组质粒的构建、表达及活性鉴定 被引量:3
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作者 洪晓武 窦骏 +2 位作者 陈国兵 陈峻崧 赵枫姝 《实用癌症杂志》 2004年第1期9-12,共4页
目的 构建pc mGM CSF重组质粒载体 ,为mGM CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法 采用RT PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM CSF ,克隆于 pcDNA3 .1/Myc His( -) (A )质粒上 ,成为pc mGM CSF ,用PCR、酶切进行鉴定 ,然后用脂质... 目的 构建pc mGM CSF重组质粒载体 ,为mGM CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法 采用RT PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM CSF ,克隆于 pcDNA3 .1/Myc His( -) (A )质粒上 ,成为pc mGM CSF ,用PCR、酶切进行鉴定 ,然后用脂质体转染小鼠骨髓瘤细胞SP2 / 0 ,用G 418筛选后通过RT PCR和SDS PAGE鉴定 ,将转染SP2 / 0上清加入NFS 60细胞 ,检测蛋白活性。结果 重组质粒中含有mGM CSF基因 ,在SP2 / 0中有表达 ,且表达产物能分泌到肿瘤细胞外 ,分泌到细胞外的产物用mGM CSF依赖株NFS 60细胞检测证明具有生物学活性。结论 成功构建含mGM CSF真核表达重组质粒 。 展开更多
关键词 mgm—csf 重组质粒 表达 活性鉴定 基因治疗 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 肿瘤
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融合基因mGM-CSF/hIL-2在肝癌细胞瘤苗特异性免疫治疗中的作用 被引量:1
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作者 杨威 郭成 +1 位作者 刘青光 姚英民 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第2期149-154,共6页
背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H2... 背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌瘤苗,观察其特异性抗肿瘤免疫作用。方法:用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体,在体外转染H22细胞,制成疫苗,皮下接种小鼠,同时建立荷瘤小鼠模型。用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、空载组、未转染组小鼠脾细胞对亲本H22细胞的杀伤活性。取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平,观察小鼠存活期。结果:成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗。免疫小鼠脾细胞体外对H22细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对S180细胞的9.1%,以及空载组和未转染组的13.6%和7.5%(P<0.05)。转基因瘤苗免疫组血清IFN-γ为(12.83±0.75)pg/mL,较空载瘤苗组的(7.83±0.65)pg/mL明显升高(P<0.01),血清IL-10[(4.58±0.34)pg/mL]较空载瘤苗组的(8.15±0.28)pg/mL明显降低(P<0.01)。同时,转基因瘤苗免疫组小鼠存活期为(40±6)d,较对照组[空载瘤苗组(30±3)d,未转染组(19±4)d]明显延长。结论:转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠存活期。 展开更多
关键词 免疫治疗 HIL-2 mgm—csf 瘤苗 肝肿瘤
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mGM-CSF/βhCG融合蛋白的制备及其致敏树突状细胞疫苗抗小鼠RM-1前列腺癌的作用 被引量:4
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作者 曹荣月 常娜 +5 位作者 李曼曼 王云康 吴迪 时宝莹 袁玉婷 龙军 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期111-116,共6页
利用分子生物学方法设计并构建含有βh CG基因和m GM-CSF基因的表达载体p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37质粒。乳糖诱导表达该融合蛋白,通过硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱DEAE-cellulose进行纯化,并以此融合蛋白致敏从C57BL/6J小鼠... 利用分子生物学方法设计并构建含有βh CG基因和m GM-CSF基因的表达载体p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37质粒。乳糖诱导表达该融合蛋白,通过硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱DEAE-cellulose进行纯化,并以此融合蛋白致敏从C57BL/6J小鼠体内提取的树突状细胞(DC)从而获得DC疫苗。将DC疫苗回输至接种前列腺癌RM-1的C57BL/6J小鼠体内,分组检测。结果显示,DC组和DC与紫杉醇(Pac)联用(DP)组与Pac组相比抗肿瘤效果具有极显著性差异(P<0.01);且DP组的抗肿瘤效果优于DC组。可见构建的新型DC疫苗可抑制前列腺癌的生长,且与紫杉醇联合使用具有协同抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 ΒHCG mgm-csf 抗肿瘤 前列腺癌 融合蛋白 免疫治疗 树突状细胞
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结核杆菌Ag85A和mGM-CSF共同表达载体的构建与CTL活性的诱导 被引量:5
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作者 陈峻崧 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 陈国兵 房雪峰 洪晓武 唐权 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期399-403,共5页
构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI... 构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI85A质粒上 ,成为共同表达质粒pI85AGM。然后转染 772 1细胞 ,进行蛋白的表达和鉴定。结果经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。通过RT PCR、SDS PAGE、Westernblot检测证实Ag85A与mGM CSF基因的转录和蛋白表达正确。Ag85A与mGM CSF免疫组小鼠的CTL活性明显增强。表明细胞因子GM CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功 ,并能诱导小鼠的CTL活性 。 展开更多
关键词 结核杆菌 GM-csf 抗原85A 重组质粒 基因疫苗
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hIL-2/mGM-CSF融合蛋白的构建及表达 被引量:3
5
作者 夏荣 林来兴妹 +4 位作者 周宏伟 周明乾 陈泽洪 胡志明 王小宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期534-537,共4页
目的 :构建hIL 2 /mGM CSF原核表达载体 ,获得具有hIL 2和mGM CSF活性的hIL 2 /mGM CSF融合蛋白。方法 :利用PCR重叠延伸术 ,将人白细胞介素 2 (hIL 2 )和鼠粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因 ,通过 2个脯氨酸 (Pro)基因的中... 目的 :构建hIL 2 /mGM CSF原核表达载体 ,获得具有hIL 2和mGM CSF活性的hIL 2 /mGM CSF融合蛋白。方法 :利用PCR重叠延伸术 ,将人白细胞介素 2 (hIL 2 )和鼠粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因 ,通过 2个脯氨酸 (Pro)基因的中间接头连接起来 ,扩增出hIL 2 /mGM CSF融合基因 ,并克隆于表达载体pBV2 2 0和pLY4中。结果 :获得序列正确的hIL 2 /mGM CSF融合基因 ,并在大肠杆菌中成功表达 ,表达率在 2 0 %左右。活性测定其hIL 2活性为 4 5×10 5U/mg ,mGM CSF活性为 3 85× 10 6U/mg。结论 :获得了具有hIL 2和mGM CSF活性的hIL 2 /mGM CSF融合蛋白 ,为研究hIL 2 /mGM CSF融合蛋白的新生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 鼠粒细胞 巨细胞集落刺激因子 细胞因子 融合蛋白 大肠杆菌
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肿瘤抗原P1A与细胞因子mGM-CSF共表达载体的构建和表达 被引量:5
6
作者 赵枫姝 陈峻崧 +3 位作者 房雪峰 陈国兵 洪晓武 窦骏 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2004年第3期184-188,共5页
目的 :构建并鉴定细胞因子mGM CSF和肿瘤特异抗原P1A共表达载体 ,为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法 :以PCR方法从pCI neo P1A中扩增出P1A编码基因片段 ,构建于pRSC质粒上 ;再从pORF mGM CSF中扩增出mGM CSF基因片段 ,插入pRSC P1... 目的 :构建并鉴定细胞因子mGM CSF和肿瘤特异抗原P1A共表达载体 ,为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法 :以PCR方法从pCI neo P1A中扩增出P1A编码基因片段 ,构建于pRSC质粒上 ;再从pORF mGM CSF中扩增出mGM CSF基因片段 ,插入pRSC P1A重组质粒P1A基因的上游。以酶切和DNA测序进行鉴定。并将鉴定过的重组质粒以脂质体法转染 772 1细胞 ,用RT PCR法鉴定转染细胞中P1A基因和mGM CSF基因的表达。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证实mGM CSF和P1A重组质粒构建正确 ,并在转染此质粒的 772 1细胞中检测出了P1A和mGM CSF基因的表达。结论 :成功构建mGM CSF和P1A的共表达载体 。 展开更多
关键词 肿瘤抗原P1A 细胞因子 mgm-csf 表达载体 肿瘤疫苗
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工程菌BL21/pET-11c/hIL-2-mGM-CSF培养条件的优化 被引量:1
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作者 温茜 马骊 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期418-420,424,共4页
目的优化BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF的培养条件以提高目的蛋白的表达量。方法采用拉丁方试验设计方法进行培养基、诱导温度和IPTG使用浓度的综合比较试验,对电泳结果进行扫描后作统计分析,并对该试验所推导出的培养条件进行验证。... 目的优化BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF的培养条件以提高目的蛋白的表达量。方法采用拉丁方试验设计方法进行培养基、诱导温度和IPTG使用浓度的综合比较试验,对电泳结果进行扫描后作统计分析,并对该试验所推导出的培养条件进行验证。以最佳的培养条件进行连续3次扩大培养,将其与常规培养条件进行比较。结果采用高浓度肉汤培养得到的蛋白相对表达量优于2×YT和LB培养基。42℃诱导与37℃诱导相比能显著提高蛋白表达量,而低至0.3 mmol/L的 IPTG可得到优于1.0mmol/L所能诱导得到的蛋白表达量。统计学分析表明优化的培养条件与常规培养条件相比能显著提高目的蛋白的相对表达量。扩大培养时,采用最佳的培养条件培养,蛋白的相对表达量比优化之前提高了5倍,表达量达到菌体总蛋白的29%以上。结论通过改良方法培养工程菌BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF,hIL-2-mGM-CSF 蛋白以较高的水平表达,为下一步的蛋白纯化和功能分析奠定了基础。 展开更多
关键词 IL-2 mgm-csf 双功能 细胞因子 微生物培养 正交拉丁方
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融合蛋白hVEGF121/βhCG与mGM-CSF/βhCG联合抗肿瘤作用及其机制 被引量:3
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作者 井亮亮 苗梓韬 +4 位作者 李曼曼 叶佳 金亮 曹荣月 龙军 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期102-109,共8页
探讨m GM-CSF/βh CG(GC)和h VEGF121/βh CG(VC)两种融合蛋白联用对C57BL/6J小鼠RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的抑制效果,并对其抗肿瘤作用机制进行初步研究。采用含有p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37和p ET-28a-VEGF-M2-X10-βh C... 探讨m GM-CSF/βh CG(GC)和h VEGF121/βh CG(VC)两种融合蛋白联用对C57BL/6J小鼠RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的抑制效果,并对其抗肿瘤作用机制进行初步研究。采用含有p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37和p ET-28a-VEGF-M2-X10-βh CG-CTP37的两个重组菌进行乳糖诱导表达,分离纯化融合蛋白。将两种蛋白制备抗肿瘤蛋白疫苗(VC蛋白疫苗和GC蛋白疫苗),并将两蛋白混合制备联合蛋白疫苗(VGC蛋白疫苗),免疫C57BL/6J接瘤小鼠,测量瘤块生长状态;检测免疫小鼠脾细胞增殖以及对肿瘤细胞的细胞毒作用;ELISA检测小鼠体内细胞因子IFN-γ和抗h VEGF抗体浓度。结果发现,在前列腺癌和黑色素瘤小鼠移植瘤模型中,与生理盐水NS组相比,各实验组均具有统计学意义(P<0.05)。其中VGC组抗肿瘤效果优于GC组和VC组(P<0.01),且对前列腺癌和黑色素瘤的抑瘤率分别达到(41.7±0.83)%和(46.4±1.27)%。由此可见,VC和GC两种蛋白联合后,通过发挥抗肿瘤免疫和抗肿瘤血管生成双重作用,高效地抑制了RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的生长。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子(VEGF) 人绒毛膜促性腺激素(hCG) 鼠源粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(mgm-csf) 前列腺癌 黑色素瘤
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mGM-CSF-GnRH3与mGM-CSF-GRP6融合蛋白体外抗肿瘤作用及生物信息学预测 被引量:3
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作者 刘淑君 韦晓芳 +3 位作者 刘生凤 黄滢霜 张焱 曹荣月 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期582-589,共8页
目的:制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,m GM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)的融合蛋白m GM-CSF-Gn RH3(m GGn)和m GM-CSF与胃泌素释放... 目的:制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,m GM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)的融合蛋白m GM-CSF-Gn RH3(m GGn)和m GM-CSF与胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的融合蛋白m GM-CSF-GRP6(m G6),探讨这两种融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞的抑制效果,并对其等电点、相对分子质量、疏水性、稳定性、亚细胞定位、信号肽、空间结构、潜在抗原表位等进行初步预测。方法:m GGn与m G6融合蛋白制备成功后,通过显微观察、划痕实验、CCK-8法、流式细胞术分别检测不同浓度蛋白对B16F10细胞形态、细胞迁移、细胞增殖、细胞周期的影响,利用蛋白质在线分析系统EXPASY、GOR4、SWISS MODEL对重组融合蛋白进行基本属性、二三级结构分析预测,运用IEDB和ABCpred软件综合预测其B细胞抗原表位,采用SYFPEITHI、Bl MAS和Net CTL软件综合预测其CTL表位,利用Net MHCIIpan 3.1 Server和IEDB软件综合预测其Th表位。结果:m GGn和m G6融合蛋白均抑制肿瘤细胞的增殖和迁移;m GGn能使B16F10细胞周期阻滞于G1期,m G6能使B16F10细胞周期阻滞于S期,不能进入G2期,从而抑制瘤细胞的增殖。m GGn和m G6结构丰富,含有较多潜在的B细胞、CTL和Th表位。结论:m GGn与m G6融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞具有抑制作用,其生物信息学预测为进一步研究两种融合蛋白的生物学功能和免疫活性奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 促性腺激素释放激素 胃泌素释放肽 黑色素瘤 B16F10细胞 生物信息学分析
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Expression, Purification, and Refolding of Recombinant Fusion Protein hIL-2/mGM-CSF 被引量:4
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作者 QIAN WEN LI MA +2 位作者 WEI LUO MING-QIAN ZHOU XIAO-NING WANG 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2008年第6期509-513,共5页
Objective To study the activities of interleukin (IL)-2 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) (hlL-2/mGM-CSF). Methods SOE PCR was used to change the linker of the fusion protein for high... Objective To study the activities of interleukin (IL)-2 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) (hlL-2/mGM-CSF). Methods SOE PCR was used to change the linker of the fusion protein for higher activities. The fusion protein was expressed in Escherichia coli (E. coil) BL21 (DE3) in inclusion body (IB) form. After IB was extracted and clarified, it was denatured and purified by affinity chromatography. The protein was refolded by dilution in a L-arginine refolding buffer and refined by anion chromatography. The protein activity was detected by cytokine-dependent cell proliferation assay. Results The expression of hIL-2/mGM-CSF in E. coli yielded approximately 20 mg protein/L culture and the purity was about 90%. The specific activities of IL-2 and GM-CSF were 5.4×10^6 IU/mg and 7.1×10^6 IU/mg, respectively. Conclusion This research provides important information about the anti-tumor activity of hIL-2/mGM-CSF in vivo, thus facilitating future clinical research on hlL-2/mGM-CSF used in immune therapy. 展开更多
关键词 HIL-2/mgm-csf Fusion protein PURIFICATION REFOLDING
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mGM-CSF转导的小鼠黑色素瘤细胞融合巨噬细胞的抗肿瘤作用研究
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作者 许进力 王新娟 《癌症进展》 2011年第4期448-450,403,共4页
目的比较小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性与转导mGM-CSF基因的小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性的差别,同时研究转导该基因阳性的B16肿瘤细胞与同源小鼠巨噬细胞融合后其致瘤性变化,初步探讨巨噬细胞在肿瘤生成中的作用。方法本实验以FuGENE6介导,... 目的比较小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性与转导mGM-CSF基因的小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性的差别,同时研究转导该基因阳性的B16肿瘤细胞与同源小鼠巨噬细胞融合后其致瘤性变化,初步探讨巨噬细胞在肿瘤生成中的作用。方法本实验以FuGENE6介导,将融合基因Lxpsp-mGM-CSF转导逆转录病毒包装细胞PA317,以含适量感染能力的重组逆转录病毒上清液转导B16,潮霉素筛选获得阳性细胞(B16+GM-CSF),再将阳性细胞在PEG介导下与同源鼠巨噬细胞(MΦ)融合(B16+GM-CSF+MΦ)。B16、B16+GM-CSF、B16+GM-CSF+MΦ三种细胞分组分别接种于C57BL/6小鼠皮下观察成瘤能力。结果 B16组平均21天长出肿瘤;B16-GM-CSF长成实体瘤延迟7天,B16-GM-CSF-MΦ在第40天仍未长出实体瘤。结论巨噬细胞在小鼠黑色素瘤生长、转移中有重要作用。 展开更多
关键词 mgm-csf 黑色素瘤B16 巨噬细胞 融合 肿瘤转移
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锚定表达GM-CSF疫苗的抑瘤效果研究 被引量:1
12
作者 程绍辉 马晓慧 +1 位作者 陈兴 于继云 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第1期27-30,共4页
目的:研究锚定表达GM—CSF的小鼠黑色素瘤作为肿瘤疫苗的有效性。方法:GM-CSF基因嵌合GPI信号肽修饰序列实现在B16小鼠黑色素瘤细胞表面的锚定表达,研究锚定修饰的B16细胞于同源C57BL/6小鼠的成瘤性及诱导抗肿瘤免疫的效果。结果:抑瘤... 目的:研究锚定表达GM—CSF的小鼠黑色素瘤作为肿瘤疫苗的有效性。方法:GM-CSF基因嵌合GPI信号肽修饰序列实现在B16小鼠黑色素瘤细胞表面的锚定表达,研究锚定修饰的B16细胞于同源C57BL/6小鼠的成瘤性及诱导抗肿瘤免疫的效果。结果:抑瘤实验结果表明,锚定修饰GM—CSF的肿瘤细胞免疫原性增强,成瘤性明显下降;成瘤率为58.8%,而肿瘤对照组为100%。活瘤苗接种实验结果显示锚定修饰的肿瘤细胞可以预防肿瘤的发生,肿瘤发生率仅为20%,说明抗肿瘤的免疫应答有记忆性,能够有效地防止野生型肿瘤细胞的攻击。结论:锚定修饰GM-CSF的肿瘤细胞可以诱导抗特异性的抗肿瘤反应,这种设计可以应用于肿瘤疫苗的研究中。 展开更多
关键词 膜表达 GM—csf 抗肿瘤免疫
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小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达、纯化与鉴定 被引量:4
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作者 温茜 马骊 +2 位作者 苏瑾 罗微 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1124-1127,共4页
目的构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)工程菌,通过摸索其变、复性和纯化条件,得到高纯度高比活的重组mGM-CSF蛋白。方法以本实验室构建的hIL-2/mGM-CSF融合蛋白表达载体为模板,PCR扩增mGM-CSF基因,克隆入pET-11c表达载体,... 目的构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)工程菌,通过摸索其变、复性和纯化条件,得到高纯度高比活的重组mGM-CSF蛋白。方法以本实验室构建的hIL-2/mGM-CSF融合蛋白表达载体为模板,PCR扩增mGM-CSF基因,克隆入pET-11c表达载体,转化BL21,构建BL21/pET-11c/mGM-CSF工程菌,用本所专利方法提取包涵体,在含低浓度盐酸胍的复性液中复性,采用镍离子亲和层析纯化。结果工程菌采用TH肉汤培养,32℃、0.1mmol/LIPTG双重诱导,表达量达菌体蛋白总量的60.6%。提取包涵体在含1.5mol/L盐酸胍的谷胱甘肽复性液中复性效果最好,比活达4.2×106U/mg。经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达95%,比活与标准品相当。结论构建了高效表达mGM-CSF的工程菌,建立了其复性和纯化工艺,为进一步研究DC、GM-CSF体内抗肿瘤功能奠定了基础,并可为IL-2/GM-CSF双功能分子的生物学功能研究提供对照。 展开更多
关键词 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 表达 纯化
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鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞 被引量:2
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作者 刘金辉 Glenn Larsen 《江西医学院学报》 CAS 2002年第5期10-12,共3页
目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含... 目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞 。 展开更多
关键词 黑色素瘤B16F1细胞 脂质体 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因转移 基因表达
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