MMP14在胰腺癌中的表达及其与肿瘤免疫微环境特征的相关性研究

目的·探究基质金属蛋白酶14(matrix metalloproteinase 14,MMP14)在胰腺癌组织中的表达及其与临床特征的相关性,并分析其与胰腺癌肿瘤免疫微环境特征的相关性。方法·通过GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据平台分析MMP家族成员在30种常见肿瘤组织中的表达情况。通过R语言整合GTEx(Genotype-Tissue Expression)数据库中167例胰腺正常组织和TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中178例胰腺癌组织及4例配对癌旁组织的转录组数据,比较MMP14在胰腺癌与正常组织及癌旁组织中的表达差异。使用GEPIA数据平台对不同MMP14表达水平胰腺癌患者进行生存分析。从TCGA数据库中下载178例胰腺癌患者的相关临床信息,应用Perl和R语言分析MMP14的表达与临床特征的相关性。应用R语言和GSEA v3.0进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析和基因本体论(Gene Ontology,GO)功能富集分析。采用CIBERSORT反卷积算法计算胰腺癌免疫微环境中各类免疫细胞亚群比例,分析MMP14的表达与各免疫细胞亚群比例的相关性。收集6例新鲜胰腺癌组织和配对癌旁组织,流式细胞术检测各类免疫细胞亚群;通过t-SNE降维与统计学分析,描述胰腺癌免疫微环境的特征。利用胰腺癌组织芯片进行多色荧光免疫组织化学实验,检测MMP14的表达与免疫细胞亚群的比例,验证生物信息学分析结果。结果·在生物信息学数据库中,与MMP家族其他成员相比,MMP14在多种肿瘤中高表达,且胰腺癌中MMP14的表达水平高于其他肿瘤;MMP14在胰腺癌中表达水平显著高于胰腺正常组织和癌旁组织(P=0.000),TNM分期Ⅱ期肿瘤MMP14表达水平显著高于Ⅰ期(P=0.012),病理组织学分级G2和G3期肿瘤MMP14显著高于G1期(均P=0.000)。MMP14低表达组患者生存预后显著优于高表达组(P=0.033)。KEGG和GO分析结果显示MMP14主要富集在胰腺癌和免疫相关通路。MMP14的表达水平与CD8+T细胞、单核细胞的比例呈负相关(均P<0.05),与巨噬细胞的比例呈正相关(P=0.000)。流式细胞实验结果提示胰腺癌肿瘤微环境呈现免疫抑制性。多色荧光免疫组织化学实验结果显示,MMP14在肿瘤组织中表达水平显著高于癌旁组织(P=0.000),TNM分期较晚及病理组织学分级较高的肿瘤MMP14的表达水平也相对较高(均P<0.05)。在MMP14高表达的肿瘤组织中,CD8+T细胞比例降低(P=0.001),巨噬细胞比例升高(P=0.000),与生物信息学分析结果一致。结论·与正常胰腺组织和癌旁组织相比,MMP14在胰腺癌中的表达显著升高且与患者不良预后相关;MMP14高表达的胰腺癌组织中CD8+T细胞比例降低,巨噬细胞比例升高;高表达MMP14的胰腺癌肿瘤微环境呈现高度免疫抑制性。

微创血肿粉碎穿刺术治疗高血压脑出血16例的护理观察

目的总结高血压脑出血行微创血肿粉碎穿刺术后患者的护理经验。方法应用微创颅内血肿粉碎穿刺针在电钻动力下进行血肿抽吸、粉碎冲洗、液化及引流。结果本组治愈8例，好转3例，死亡5例。结论微创颅内血肿穿刺术治疗高血压脑出血疗效确切。加强基础护理，严密监测，预防和及时发现潜在并发症，将对患者预后起积极作用。

Applications of multiplexed immunohistochemistry/immunofluorescence and multispectral imaging technology in the field of tumor immunotherapy

Multiplexed immunohistochemistry/fluorescence(mIHC/IF)in combination with multispectral unmixing is a novel multitarget histopathological staining and imaging technique.By simultaneously revealing expression level and spatial information for up to eight biomarkers in situ,in addition to a nuclear stain within a single formalin-fixed paraffin-embedded(FFPE)tissue section,this technology can analyze the phenotype,abundance,morphology and intercellular relationship of cells while providing statistically significant results.In recent years,technical improvements have brought new insight into mIHC/IF and multispectral imaging approaches,which have been successfully applied in the field of cancer immunotherapy,specifically in regard to tumor microenvironment research,immunotherapy drug discovery,and prognostic and metastatic risk evaluation.This review highlights the principle,workflow,advantages and disadvantages of the technology,and discusses the latest applications of mIHC/IF-based imaging technology in the field of TME-related research and immunotherapy drug discovery.

胰腺癌免疫微环境组织驻留CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润分布及其临床意义

目的探讨胰腺癌肿瘤免疫微环境中组织驻留CD103^(+)CD8^(+)T细胞的分布及浸润程度,分析其临床意义。方法应用多色免疫荧光染色检测胰腺癌组织芯片(HPanA120Su02,上海芯超生物科技有限公司)中CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润程度及其临床相关性。共53例胰腺癌组织(2009-01-06-2013-08-07行手术治疗且经病理确诊的初诊胰腺癌患者)和54例癌旁正常组织纳入研究。通过组织芯片中PD-L1表达阳性比例,取Cutoff为10%,以PD-L1<10%为PD-L1低表达组,PD-L1≥10%为PD-L1高表达组,进一步分析不同亚组中的CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润程度对预后的影响。结果胰腺癌组织中CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度〔20.9个/mm^(2)(4.8~46.3)〕较正常组织〔0.8个/mm^(2)(0~2.8)〕增高,差异有统计学意义,P<0.001。CD8^(+)T细胞中CD103^(+)CD8^(+)T所占比例为21.6%(10.5%~39.8%),较正常组织〔0.6%(0~3.1%)〕增高,P<0.001。PD-L1高表达组患者CD103^(+)CD8^(+)T细胞〔37.9个/mm^(2)(20.1~102.7)〕浸润程度较PD-L1低表达组患者〔8.5个/mm^(2)(3.1~26.8)〕增高,差异有统计学意义,P=0.014。CD8^(+)T和CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度均与PD-L1阳性表达水平呈正相关(r=0.354,P=0.009;r=0.555,P<0.001)。PD-L1高表达患者总生存(OS)差于PD-L1低表达患者(HR=2.154,95%CI为1.158~4.000,P=0.001)。CD8^(+)T和CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度高低均与OS无统计学意义的关联,均P>0.05。PD-L1高表达的患者较PD-L1低表达患者有更高的死亡风险(HR=2.732,95%CI为1.431~5.216,P=0.002)。多因素Cox分析显示,PD-L1表达水平可作为胰腺癌患者预后评估的独立风险因素(HR=4.066,95%CI为1.539~10.743,P=0.005)。PD-L1高表达+CD8^(+)T细胞高浸润组患者OS差于PD-L1低表达+CD8^(+)T细胞高浸润组(HR=6.429,95%CI为1.608~25.700,P=0.027)。PD-L1高表达+CD103^(+)CD8^(+)T细胞高浸润组患者OS差于PD-L1低表达+CD103^(+)CD8^(+)T细胞低浸润组(HR=1.600,95%CI为0.777~3.294,P=0.018)。结论CD103^(+)CD8^(+)T细胞在胰腺癌组织和PD-L1高表达患者中高度浸润,PD-L1高表达合并CD103^(+)CD8^(+)T细胞高度浸润患者对于免疫治疗可能具有更高的治疗反应率。