腺病毒载体介导mIL-12基因治疗联合放射治疗小鼠肝癌的研究

目的 观察腺病毒介导白介素 12基因治疗联合放射治疗协同抗小鼠肝癌作用。方法 荷肝癌动物模型 ,肿瘤局部γ射线照射后 ,瘤内注射AdmIL 12腺病毒。取组织标本进行ELISA及CTL活性检测、免疫组化染色等分析。结果 联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制 ,体积明显缩小 ,并可使 5 0 %的小鼠肿瘤完全消退 ,疗效显著优于单纯照射组和瘤内注射AdmIL 12及其他对照组(P <0 0 1)。而单纯瘤内注射AdmIL 12组的疗效并不优于单纯照射组 (P >0 .0 5 )。联合治疗组小鼠血清和脾细胞的培养上清中可见IFN γ水平的显著提高 ,并诱导产生特异性的CTL活性。免疫组化结果显示 ,联合治疗组肿瘤组织中可见有大量CD4+ 、CD8+ 阳性淋巴细胞的浸润。结论 腺病毒介导白介素 12基因治疗与放射治疗的联合具有协同抗肿瘤作用 ,并诱导产生特异性抗肿瘤免疫反应。

重组腺病毒介导IL-12、IL-2联合基因治疗前列腺癌的实验研究

目的 探讨转移性前列腺癌的治疗方法 ,为前列腺癌免疫基因治疗提供实验依据。 方法 采用重组腺病毒介导IL 12、IL 2联合免疫基因疗法 ,对 6 6只C5 7BL/ 6小鼠前列腺癌模型进行致瘤性和抑瘤性观察。 结果 腺病毒AdmIL 12、AdhIL 2能有效表达目的基因。接种野生型 ,转AdLacZ及转AdmIL 12、AdhIL 2混合RM 1细胞的小鼠致瘤比例分别为 10 / 10、10 / 10及 2 / 10 ;成瘤时间分别为 (12 .3± 1.5 )d、(12 .8± 1.0 )d、(2 2 .5± 2 .1)d ;接种 30d后肿瘤结节直径分别为 (35 .0±2 .0 )mm、(34 .0± 2 .6 )mm、(10 .5± 3.5 )mm。与对照组相比 ,转AdmIL 12、AdhIL 2基因RM 1细胞小鼠致瘤率下降 ,成瘤时间延迟 (P <0 .0 1)、瘤结节小 (P <0 .0 1)。AdmIL 12、AdhIL 2瘤体注射还可抑制肿瘤生长 (P <0 .0 1) ,减少肺转移灶数目 (P <0 .0 1)。 结论 IL 12、IL 2联合基因治疗可诱发前列腺癌小鼠的肿瘤特异性免疫反应。

HBx和mIL-12双基因重组腺病毒的构建

目的构建携带双基因HBx和mIL-12的重组腺病毒Ad-HBx-mIL-12。方法采用酶切、连接的方法分别将基因HBx和mIL-12连接到穿梭质粒载体pAdenoVator-CMV5。将构建正确的穿梭质粒pAdV-HBx-mIL-12经EcoRⅠ酶切线性化后,转化于含腺病毒骨架质粒pAdenoVatorΔE1/E3的BJ5183感受态细菌,实现细菌内同源重组。将鉴定正确的重组腺病毒质粒pAd-HBx-mIL-12经PacⅠ酶切线性化后,以脂质体法转染至293细胞,包装并扩增获得携带双基因HBx和mIL-12的重组腺病毒Ad-HBx-mIL-12。结果经鉴定携带HBx和mIL-12双基因的重组腺病毒构建成功,并可在293细胞中有效表达。结论成功构建了携带双基因HBx和mIL-12的重组腺病毒Ad-HBx-mIL-12,为探讨其联合抗肿瘤机制及后续基因治疗奠定了基础。