兔抗mLAIR-1胞外区抗体的制备、纯化和鉴定

目的:表达并纯化小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(mLAIR-1)胞膜外区与人IgGFc段的融合蛋白,制备兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体。方法:构建真核表达载体,表达并纯化mLAIR-1-Fc融合蛋白。以mLAIR-1-Fc融合蛋白免疫家兔,用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体。用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性。结果:表达并纯化了mLAIR-1-hIgFc融合蛋白。以其免疫家兔,用亲和层析的方法纯化得到兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体,能与转染细胞和细胞表面天然mLAIR-1分子结合。结论:成功地构建了mLAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体,表达并纯化了mLAIR-1-Fc融合蛋白。用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化的兔抗mLAIR-1胞外区抗体,具有高特异性和高效价,为进一步研究mLAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段。

mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布

目的研究mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布。方法RT-PCR法检测mLAIR-1基因在正常小鼠胸腺细胞的表达,通过流式细胞术分析mLAIR-1在胸腺细胞发育不同阶段表达的变化,并采用免疫组织化学染色从形态学上观察mLAIR-1在胸腺的分布。结果RT-PCR和流式细胞术的结果表明mLAIR-1在小鼠胸腺中有表达,尤其是在CD4-CD8-双阴性和CD4-CD8+单阳性阶段表达水平较高。免疫组化的结果显示该分子在胸腺的皮质区和髓质区均有表达,在皮髓质交界处以及髓质区表达更为明显。结论mLAIR-1在小鼠胸腺细胞上有着明确的分布,并且在胸腺细胞分化发育的不同阶段具有不同的表达格局,提示该分子在胸腺的发育过程中可能有比较重要的作用。

四环素调控的小鼠LAIR-1/CD305转基因小鼠的初步建立

目的建立四环素调控的小鼠LAIR-1/CD305转基因小鼠,为进一步研究mLAIR-1分子的体内功能奠定基础。方法构建pBI-5-mLAIR-1载体,显微注入B6D1F1受精卵,PCR检测新生小鼠基因组DNA中LAIR-1与荧光素酶(Lucifer-ase)基因。将mLAIR-1和荧光素酶双阳性小鼠耳成纤维细胞转染含rtTA的pUHD17.1质粒,用含盐酸强力霉素(Dox)的培养基进行培养,检测细胞裂解液中荧光素酶活性。将荧光素酶表达依赖Dox小鼠与C57BL/6交配,采用PCR对子代鼠进行检测。结果共获得9只首建鼠,其目的基因表达高度依赖Dox,并得到其中5只首建鼠的F1代小鼠。结论获得了四环素调控的小鼠LAIR-1转基因小鼠,可用于该分子体内功能的研究。

白细胞相关免疫球蛋白样受体研究进展

白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyteassociatedimmunoglobulinlikereceptor,LAIR)是表达于多种免疫细胞上的重要受体,它的主要功能是抑制效应细胞对靶细胞的杀伤,并在造血细胞的分化、增殖中具有重要的调节作用。人可溶型LAIR-1(solublehumanLAIR-1,shLAIR-1)还与某些疾病的病情、病程有一定的联系。文章拟对该分子的研究进展作一综述。