四环素调控的PTA1/CD226转基因小鼠的初步建立

为研究小鼠PTA1分子在体内的功能,建立四环素调控的小鼠PTA1/CD226转基因小鼠,我们构建了pBI-5-mPTA1载体,显微注射入B6D1F1受精卵,使用PCR检测新生小鼠基因组DNA中的PTA1与荧光素酶(luciferase)基因。将mPTA1和荧光素酶双阳性小鼠耳成纤维细胞转染含rtTA的pUHD17.1质粒,用含有盐酸强力霉素(Dox)的培养基进行培养,检测细胞裂解液中荧光素酶的活性。将荧光素酶表达依赖Dox的小鼠与C57BL/6小鼠交配,采用PCR对子代鼠进行检测。最终共获得7只首建鼠,其目的基因表达高度依赖Dox,并得到了其中2只首建鼠的F1代小鼠。

小鼠PTA1/CD226分子参与杀伤性T细胞(CTL)的分化

目的阐明小鼠PTA1(mPTA1)/mCD226对杀伤性T淋巴细胞(CTL)分化的影响。方法构建小鼠PTA1-hIgFc真核表达载体,表达并纯化mPTA1融合蛋白,免疫家兔,获得抗mPTA1的多克隆抗体,并用偶联mPTA1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体。间接免疫荧光染色后经流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性。通过混合淋巴细胞培养(MLC)诱导产生CTL效应细胞,以51Cr释放试验检测mPTA1多克隆抗体在MLC中对T淋巴细胞分化及杀伤功能的影响。结果获得了mPTA1-hIgFc融合蛋白和针对mPTA1胞膜外区的多克隆抗体,该抗体能与转染细胞表面天然mP-TA1分子结合。mPTA1多克隆抗体对MLC诱导的CTL的杀伤有明显的抑制作用,并呈剂量依赖关系,mPTA1多抗加入的时间愈早,抑制杀伤作用的效果愈明显。结论抗小鼠PTA1的多克隆抗体可在小鼠混合淋巴细胞培养中明显抑制CTL的分化。