节律蛋白mPERl在NIH3T3细胞增殖和迁移中的作用

目的研究PER 1蛋白对N IH 3T 3细胞增殖和迁移的影响。方法将重组表达质粒pcDNA 3.1/m PER 1转染入N IH 3T 3细胞中,并以未转染的N IH 3T 3细胞为对照,利用M TT法检测细胞增殖的改变。利用RT-PCR技术和W esternb lot检测节律蛋白m PER l对细胞迁移关键性蛋白基质金属蛋白酶2(MM P-2)表达的影响。结果M lTT法显示PER 1表达上调可以抑制N IH 3T 3细胞增殖,RT-PCR技术和W estern b lot检测显示在N IH 3T 3细胞中,当节律蛋白m PER 1表达上调时,细胞迁移关键性蛋白MM P-2在RNA和蛋白水平的表达较对照组降低。结论上调N IH 3T 3细胞内的PER 1蛋白表达能抑制细胞增殖以及细胞迁移的关键性MM P-2在RNA和蛋白水平的表达。

C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析

目的建立分析C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态。方法利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究。结果C57BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13,低谷位于ZT01。序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2。亚硫氢酸修饰测序结果显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态。不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458)。结论肝脏中mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合。甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达。

NIH3T3细胞中miR-29b表达变化对mPer1和Egr2的影响

目的探讨NIH3T3细胞中miR-29b对血清诱导的立早基因Egr2 mRNA表达的影响及其机制。方法将体外培养NIH3T3细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组用miR-29b转染,阴性对照组空转,而空白对照组则不做任何处理。RT-qPCR检测近日节律基因mPer1与立早基因Egr2 mRNA的表达水平。结果实验结果显示,mPer1和Egr2的表达均发生了较明显的变化。与阴性对照组相比,空白对照组中mPer1和Egr2的mRNA表达水平无明显差异;而实验组中mPer1的mRNA表达降低了42%,Egr2的mRNA表达升高了49%。结论 miR-29b能上调Egr2的表达,其途径可能是通过抑制NIH3T3细胞近日节律基因mPer1的表达实现。