mRNA前体剪切因子19蛋白对乙型肝炎病毒感染Huh7细胞病毒复制的影响

目的 观察mRNA前体剪切因子19(pre-mRNA processing 19, PRP19)蛋白对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染Huh7细胞HBV核心启动子、EnhⅡ/基本核心启动子(basal core promoter, BCP)活性的影响,探讨其调控HBV复制的可能机制。方法 取对数生长期Huh7细胞分为PRP19过表达组(转染pcDNA3.1-Flag-PRP19过表达质粒和HBV B基因型表达质粒pUC19-HB-Bj),PRP19敲低组(转染PRP19-siRNA 36 h后转染pUC19-HB-Bj),空白对照组(转染NC-siRNA 36 h后转染pUC19-HB-Bj),正常对照组(转染pUC19-HB-Bj)。转染72 h, 4组采用Western blot法检测PRP19蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测HBV前基因组RNA(pregenomic RNA, pgRNA)和HBV-DNA相对表达量;采用Western blot法检测PRP19过表达组、正常对照组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量。取PRP19过表达组和正常对照组细胞,分别转染HBV核心启动子及EnhⅡ/BCP驱动的海肾荧光素酶报告质粒,转染48 h,测定2组HBV核心启动子、EnhⅡ/BCP荧光素酶活性;采用DNA pull down法检测PRP19与HBV核心启动子、EnhⅡ/BCP的关系。结果 PRP19过表达组PRP19蛋白相对表达量(0.92±0.11)高于正常对照组(0.08±0.06)(t=27.941,P<0.001),PRP19敲低组(0.13±0.05)低于空白对照组(0.51±0.10)(t=5.494,P=0.005);PRP19过表达组pgRNA相对表达量(0.40±0.22)低于正常对照组(1.07±0.05)(t=7.173,P=0.002),PRP19敲低组(1.61±0.14)高于空白对照组(1.05±0.08)(t=10.504,P=0.005)。PRP19过表达组HBsAg(0.35±0.09)、HBcAg(0.20±0.09)蛋白及HBV-DNA(2.60×10~7±0.28)相对表达量均低于正常对照组(0.83±0.06、0.78±0.12、5.50×10~7±0.15)(t=13.204,P<0.001;t=12.346,P<0.001;t=11.232,P<0.001)。PRP19过表达组HBV核心启动子(0.28±0.23)、EnhⅡ/BCP(0.16±0.12)荧光素酶活性均低于正常对照组(1.10±0.09、1.08±0.07)(t=9.864,P=0.005;t=21.342,P<0.001)。PRP19可与生物素标记的EnhⅡ/BCP探针相结合。结论 PRP19通过与HBV核心启动子上的EnhⅡ/BCP区相互作用,负向调控HBV核心启动子活性,抑制HBV感染Huh7细胞HBV转录。

前体mRNA剪接因子基因突变与视网膜色素变性的研究进展

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)是一种遗传性进行性视细胞损伤性疾病,具有基因型和表型异质性。目前已鉴定的RP致病基因达到103个,其中有一类基因(PRPF3、PRPF4、PRPF6、PRPF8、PRPF31、SNRNP200、RP9和DHX38)与前体mRNA剪接相关,该类基因全身广泛表达,但其突变后引起RP这种组织特异性表型疾病的机制目前尚不清楚。现汇总近年来国内外研究进展,介绍前体mRNA的剪接过程、前体mRNA剪接因子在剪接过程中的作用及前体mRNA剪接因子导致RP的疾病模型,并探讨前体mRNA剪接因子突变导致RP的致病机制。

前体mRNA剪切因子在视网膜色素变性发病机制中的研究进展

根据表达方式和对组织影响的不同,视网膜色素变性(RP)相关基因可分为三种类型。本文介绍了前体mRNA的剪切过程,简述了三种前体mRNA剪切因子基因及其在剪切过程中的作用,以探讨剪切因子突变导致常染色体显性遗传性RP的生物学作用机制。

前体mRNA剪接及剪接调节因子SR蛋白和Tra2蛋白

在高等真核生物中,前体mRNA的剪接及其调节是一个复杂的、由多因子参与的过程,它对基因的正常功能的发挥起着重要的作用,任何一种剪接调节因子的异常变化均有可能导致疾病的发生。因此,研究参与前体mRNA剪接调控的相关因子的功能及作用机制,对前体mRNA剪接机制的阐明,无疑是相当必要的。本文着重介绍了两类重要的mRNA剪接调节蛋白——SR蛋白和Tra2蛋白的研究近况,以期对前体mRNA剪接机制的研究的重要性和复杂性有更多的了解。

野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31基因克隆及真核表达载体的构建

目的构建野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31(pre-mRNA processing factor 31,PRPF31)基因的真核表达载体。方法通过逆转录聚合酶链反应(reverse tran-scriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增小鼠PRPF31野生型全长编码序列、体外定点突变获得331del12突变型PRPF31的cDNA编码序列,将上述两序列分别克隆入pGEM-T Easy载体,经限制性内切酶NheⅠ和EcoRⅠ双酶切后,再克隆入pTracer-CMV真核表达载体,予DNA测序鉴定。结果PCR成功扩增出野生型和突变型PRPF31基因,DNA序列分析证实两种基因的真核表达载体构建成功。结论野生型和突变型PRPF31基因真核表达载体的构建,为研究PRPF31基因突变引起视网膜色素变性的机制奠定了基础。

mRNA前体的剪接因子

真核生物通过mRNA前体的剪接,包括选择性剪接机制,调控着自身的生长与发育,了解其基本过程和有关参与因子,对进一步探索真核生物基因的表达调控和分子进化都具有极其重要的意义。该文简要综述了mRNA前体剪接的基本过程及有关剪接因子的最新研究进展,介绍了SR蛋白(Ser-Arg rich protein)家族因子、某些新发现的参与形成核不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)的因子及部分RNA解旋酶等在mRNA前体剪接过程中的功能和作用。

视网膜色素变性疾病相关前体mRNA剪接因子研究进展

视网膜色素变性（RP）是临床上常见的一组遗传性视网膜变性疾病，并具有显著的遗传异质性。前体mRNA（pre—mRNA）的剪接是指在剪接体的催化作用下，将基因初始mRNA中的内含子去掉并将外显子拼接的过程。在目前已发现的80多个RP致病基因中，有8个（PRPF3、PRPF8、PRP31、PRPF6、PRPF4、SNRNP200、RP9和DHX38）在全身广泛表达并与前体mRNA剪接相关，然而这些基因突变只引起眼部病变的机制尚不清楚。本文介绍了pre—mRNA的剪接过程，总结了与RP相关的pre—mRNA的基因突变和8种剪接基因在剪接过程中的作用，并探讨相关基因突变仅引起眼部病变的机制。

神经胶质瘤中前体mRNA可变剪接研究进展

胶质瘤是最常见的脑肿瘤,前体mRNA可变剪接可能在不同类型胶质瘤的发生、恶化以及侵入中发挥作用.参与调控胶质瘤中前体mRNA可变剪接的因素包括顺式元件如内含子剪接抑制序列(ISS)、外显子剪接抑制序列(ESS)等,反式因子包括SRp55、SC35、SF2/ASF、PTB等剪接调节因子.近期的研究进展发现,有多种与胶质瘤相关的基因受到可变剪接的调控,包括肿瘤抑制因子、肿瘤促进因子、酶、受体、离子通道等.因此,研究胶质瘤中的前体mRNA可变剪接将有利于深入了解胶质瘤发生的分子机制、有利于为胶质瘤的早期诊断和治疗提供新的潜在靶点.

核前体mRNA的剪接与视网膜色素变性

视网膜色素变性（RP）是一组常见的遗传性视网膜变性疾病，具有高度的遗传异质性。在超过40个不同种类的RP致病基因中包括一部分全身广泛表达的基因，最具代表性的为5个核前体mRNA（pre—mRNA）的剪接相关基因。在RP基因的最新研究中，人们认识到核前体mRNA剪切缺陷在常染色体显性遗传RP（adRP）病因学中占有非常重要地位，同时也使人们对核前体mRNA剪切这一基本的生物学过程有了更清楚的认识。目前，人们在此领域的研究主要集中在两个方面：（1）adRP相关的核前体mRNA剪切基因（adRP-剪接因子）突变如何影响核前体mRNA剪切功能。（2）这些全身表达的基因变异为何特异性地引起视网膜病变。这两个研究主题也恰恰吻合了此类疾病发病机制中的前后两个重要环节。近年来，人们已经在第一个研究主题中取得了显著的进步，第5个adRP-剪接因子SNRNP200基因的克隆及其相关功能研究是此研究方向的重要进步之一。在第二个研究主题中人们也进行了大量的工作，各种生物模型的建立使得人们对疾病的病理过程有了更清晰的描述，然而在关键的发病机制问题上依然面临着许多令人迷惑的问题。总结adRP-剪接因子的最新研究成果，重点阐述核前体mRNA的剪接缺陷引发RP的分子机制研究中亟待解决的问题。

剪切体蛋白PRPF8的研究进展

真核生物中,mRNA前体的可变剪切是一个重要过程,在这过程中剪切体蛋白起到重要的作用。PRPF8是剪切体的核心蛋白,它的突变可引起一些模型细胞的死亡,并且与疾病的发生有重要的关系。

血清ProGRP、CEA、SCC、Cyfra21-1及其趋化因子蛋白在肺癌患者中的表达及意义

目的探讨血清胃泌素释放肽前体(ProGRP)、癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)及其趋化因子蛋白在肺癌患者中的表达及意义。方法收集2015年3月至2016年3月我院的80例肺癌患者,其中65例非小细胞肺癌患者和15例小细胞肺癌患者,并选择同期于我院进行体检的健康人群80例作为对照组。分析血清ProGRP、CEA、SCC、Cyfra21-1及其趋化因子蛋白在肺癌患者中的表达及意义。结果非小细胞肺癌患者和小细胞肺癌患者血清ProGRP、CEA、SCC、Cyfra21-1均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);在logistic回归分析中显示,血清ProGRP、CEA、SCC、Cyfra21-1均是肺癌发病的危险因素(P<0.05);小细胞肺癌组、非小细胞肺癌组CCL28、LIF、LIGHT、GRO水平均显著高于对照组(P<0.05),NAP-2、MDC水平显著低于对照组(P<0.05);在logistic回归分析中显示,趋化因子蛋白LIF、LIGHT、MDC是肺癌发病的危险因素(P<0.05)。结论血清ProGRP、CEA、SCC、Cyfra21-1及其趋化因子蛋白对肺癌诊断、疾病进展、预后评估具有一定价值。

早老素/γ-分泌酶依赖性剪切β淀粉样前体蛋白调控表皮生长因子受体的表达

由中美科学家组成的研究组近日发现，在阿尔兹海默病发病过程中起关键性作用的γ-分泌酶具有抑制肿瘤的作用。该研究组．课题第一次较深入地探讨了阿尔兹海默病与肿瘤的关系，对这两个当前热门的研究领域都将产生巨大影响。

血清标志物联合检测在肺癌诊断中的应用研究(附60例报告)

目的探讨血清中肿瘤标志物胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)、水溶性细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和癌胚抗原(CEA)在肺癌诊断中的应用。方法健康对照组70例,肺癌组80例,均同时检测Pro-GRP、GYFRA21-1、VEGF和CEA。结果肺癌组Pro-GRP、CYFRA21-1、VEGF、CEA和对照组比较,差异有统计学定义(P<0.01)。且CYFRA21-1、VEGF、CEA在非小细胞肺癌中的敏感性和诊断准确性较高。结论血清肿瘤标志物能敏感、特异地进行肺癌的诊断,并对肺癌的分型有重要主义。

血管紧张素Ⅱ和醛固酮对肝星状细胞细胞外通路调控的体外研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(Aldo)对肝星状细胞(HSC)细胞外调节蛋白激酶(ERK)和激活蛋白1(AP1)信号转导通路的影响。方法采用HSCT6细胞株,分别予AngⅡ1μmol/L和Aldo1μmol/L处理,免疫Western印迹检测磷酸化P42/44蛋白水平。另外,观察AngⅡ1型受体(AT1受体)阻断剂伊贝沙坦(irbesartan),细胞外调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126,抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和肿瘤坏死因子α(TNFα)对磷酸化P42/44蛋白水平的影响。电泳迁移率变更分析(EMSA)检测AP1DNA结合活性的变化;反转录聚合酶链反应检测α1Ⅰ型前胶原基因的表达。结果AngⅡ和Aldo可诱导磷酸化P42/44蛋白水平的变化,与阴性对照组的比值达4.3±0.1、4.0±0.1,并呈时间依赖性,10min达到峰值后逐渐减低。U0126可抑制磷酸化P42/44蛋白水平。irbesartan可抑制AngⅡ诱导的磷酸化P42/44蛋白水平。AngⅡ和Aldo可增强HSC的AP1的DNA结合活性。irbesartan和ACEI可显著抑制AP1的活性;U0126和NAC可以显著抑制AngⅡ诱导的AP1的活化,部分抑制Aldo诱导的AP1的活化。AngⅡ和Aldo可诱导α1Ⅰ型前胶原mRNA的表达。irbesartan、U0126和NAC可显著抑制AngⅡ诱导的α1Ⅰ型前胶原mRNA表达增强;U0126和NAC可显著抑制Aldo诱导的α1Ⅰ型前胶原mRNA表达增强。结论AngⅡ和Aldo可经ERK通路诱导HSCAP1结合活性增强。AngⅡ和Aldo可经AP1通路调控α1Ⅰ型前胶原基因的表达。

人剪切题蛋白FBP21的结构与功能研究

人剪切体相关蛋白 FBP21(Formin binding protein 21)是剪切体复合物 A/B 的组成部分并与 U2 snENP(小核糖核蛋白)相互作用(1)。FBP21 含有一个 matrin-type

切割与多聚腺苷酸化特异因子与肿瘤相关研究进展

在人类实体肿瘤中,首选治疗方法是手术切除,但多数临床确诊的肿瘤患者已处于中晚期,失去了手术机会.切割与多聚腺苷酸化特异因子是参与mRNA 3＇端的切割和多聚腺嘌呤poly （A）尾的添加,在mRNA成熟和细胞信号转导过程中扮演着重要的角色.在某些条件下,切割与多聚腺苷酸化特异因子表达的异常能导致癌基因的激活,进而引起肿瘤的发生.本文就切割与多聚腺苷酸化特异因子与肿瘤相关研究进行综述.

肿瘤中可变剪接事件与靶向治疗

可变剪接(alternative splicing)是人类基因表达调节的关键途径,它在扩大功能蛋白的多样性方面起着决定性作用。可变剪接事件是肿瘤进展中的一个重要生物标志物,它与肿瘤的发展密切相关。肿瘤细胞倾向于产生有利于其进展的可变剪接体,因此,针对肿瘤特异性可变剪接体进行靶向调控是肿瘤治疗的一个潜在策略。在此,本文对可变剪接和肿瘤之间的复杂关系做了一个简要回顾。可变剪接通过去除前体mRNA(pre-mRNA)的非编码序列,并将蛋白质编码片段以不同的组合方式进行组装,最终产生具有不同甚至相反功能的蛋白质。可变剪接事件可以通过凋亡、侵袭和转移、血管生成和代谢,促进正常细胞向肿瘤细胞的转变;也可通过影响免疫通路中起关键作用的基因,从而影响癌症治疗的有效性。通过直接或间接靶向可变剪接因子以及基于寡核苷酸的疗法是目前逆转肿瘤可变剪接事件的主要策略。这些发现将有助于研究者更好地了解与肿瘤相关的可变剪接,并为肿瘤的治疗开发新的策略。