雌激素对去势高脂血症兔血脂及氧化型低密度脂蛋白mRNA表达作用的实验研究

目的 观察雌激素对去势高脂血症兔血脂、氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)水平及ox LDLmRNA表达的影响。方法 采用纯种新西兰雌兔去势术 +0 .5 %胆固醇饲料 +静脉注射牛血清白蛋白造模 ,模型动物连续使用雌激素 12周后检测相关指标。结果 与模型组相比 ,雌激素组ox LDL含量及ox LDLmRNA的表达均明显降低 (P值均 <0 .0 5 )。结论 雌激素可改善去势高脂血症模型兔血脂水平 ,调控ox LDLmRNA的表达 ,减少LDL的氧化修饰 ,保护内皮细胞功能 ,防治绝经后动脉粥样硬化。

石斛合剂对衰老糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax,Bcl-2mRNA及蛋白表达的调控

目的观察石斛合剂对衰老及衰老糖尿病（DM）大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响。方法采用D-半乳糖致衰，继而加高脂高糖及注射低剂量链脲佐菌素（STZ）制备衰老DM模型，测定血清中SOD、MDA浓度，并利用RT-PCR法和Western-Blot法检测大鼠胰腺组织凋亡相关基凼Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达水平。结果与衰老及衰老DM组相比，石斛合剂各治疗组MDA浓度明显降低（P〈0．05），SOD浓度明显升高（P〈0．05～0．01），衰老DM石斛合剂治疗组胰腺组织BaxmRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.05～0．01），Bcl-2mRNA及蛋白水平明显升高（P〈0．05）。结论①衰老大鼠呈现Bax／Bcl-2比值显著升高，衰老DM大鼠Bax／Bcl-2比值升高更为显著，即衰老大鼠Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达失衡，且这种失衡在衰老DM大鼠显得更为突出；②石斛合剂降低血糖，显著升高衰老及衰老DM大鼠SOD水平，降低MDA水平，其分子机制之一与其降低衰老DM大鼠胰腺组织Bax、增加Bcl-2 mRNA及蛋白水平，即调整Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达的失衡有关。

药物对骨架蛋白表达以及蛋白-蛋白相互作用的影响及其在抗肿瘤转移研究中的意义

研究蛋白质间相互作用的最终目的是建立模式细胞系统中全部蛋白质相互作用的网络，即蛋白质相互作用组（interactome），对相互作用组的不断深入理解是21世纪生物学的巨大的智力挑战之一。更详细地了解蛋白质的复合体和蛋白网络是对生物学理解的更高水平。由于肿瘤的发生和发展是一个多步骤、多因子控制的动态变化的复杂的过程，以往的研究多集中于单个或少数几个基因和蛋白质，因此采用蛋白质组分析技术从多个水平上探讨这类多基因、多蛋白参与的疾病的生化过程具有非常重要的实际和理论意义。

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

当归多糖对衰老模型小鼠抗氧化作用及p16蛋白表达水平的影响

目的:观察当归多糖对衰老模型小鼠脑组织p16蛋白表达及不同组织中单胺氧化酶(MAO)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响,探讨当归多糖治疗衰老的作用机制。方法:将昆明种小鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、脑复康组和当归多糖高、中、低剂量组,每组10只;腹腔联合注射D-半乳糖和亚硝酸钠(NaNO2)建立衰老小鼠模型;脑复康组灌胃脑复康(200μg/g),当归多糖低、中、高剂量组灌胃当归多糖(依次为100,200,400μg/g),空白对照组和模型对照组灌胃等体积的生理盐水,连续8周;眼球采血处死小鼠,采用ELISA法检测脑组织p16蛋白的含量,比色分析法测定脑、肝、肾组织MAO活性及肝、肾组织CAT活性。结果:与空白对照组对比,模型对照组小鼠p16蛋白的表达升高,MAO活性升高,CAT活性降低,差别有统计学意义(P<0.01);当归多糖各剂量组小鼠脑组织p16蛋白表达减少、MAO活性降低,肝组织CAT活性升高,肾组织MAO活性降低、CAT活性升高,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01或P<0.05);而与脑复康组对比,当归多糖各剂量组的上述指标均无统计学意义(P>0.05)。结论:当归多糖可以降低衰老小鼠脑组织p16蛋白的表达,降低脑及肾组织MAO的活性,增强肝组织和肾组织CAT的活性,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而起到延缓衰老的作用。

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达的影响。方法:在脑缺血后再灌注模型上,应用原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法检测c-fosmRNA及蛋白表达。结果:缺血组大鼠纹皮质较假手术组c-fosmRNA和蛋白表达非常显著增加;CGRP组和NGF组c-fosmRNA和蛋白表达分别显著弱于缺血组;CGRP和NGF合用组c-fosmRNA和蛋白表达非常明显弱于缺血组、CGRP组和NGF组。结论:CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达,联合应用则能显著抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质cfosmRNA及蛋白表达,二者对保护缺血神经元可能有协同作用。

骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因mRNA的调节作用

目的 探讨骨形态发生蛋白（BMP）-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA表达的调控作用。结果 在BMP-2浓度为100μg／L（0．149±0．006，P〈0．05）和1000μg／L（0．163±0．006，P〈0．01）时，其对椎间盘细胞中Sox9基因mRNA可起到显著的正向调控作用；在此浓度下，它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用。结论 BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达。

DPN大鼠坐骨神经NGF的动态表达及胰岛素和人NGF的干预作用

目的 观察糖尿病多发性神经病 (DPN)大鼠坐骨神经NGF的动态表达以及胰岛素和人神经生长因子(hNGF)的干预作用。方法 以链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型 ,通过RT PCR和免疫组化技术 ,观察造模后 4和 8周大鼠坐骨神经NGFmRNA和蛋白的表达 ,并观察DPN 4周时用胰岛素或hNGF干预 4周后坐骨神经NGFmRNA和蛋白的表达。结果 NGFmRNA表达在DPN 4周无明显改变 ,8周时明显减少 ;NGF蛋白表达在DPN 4周和 8周均减少。hNGF干预能增加DPN大鼠坐骨神经NGFmRNA和蛋白表达 ,胰岛素则无明显调节作用。结论 DPN大鼠坐骨神经NGF表达减少 ,外源性NGF可弥补这种缺陷。

辛伐他汀对大鼠心肌细胞肥大及蛋白激酶B表达的影响

目的观察辛伐他汀对血清诱导培养大鼠心肌细胞肥大的影响,探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)途径在辛伐他汀调控心肌细胞肥大中的信号转导作用。方法以培养的新生SpragueDawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RTPCR和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测PKB的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)15%血清组干预24h后心肌细胞表面积(1611.16±160.75)μm2显著高于无血清对照组(538.04±118.60)μm2,并有统计学意义(P<0.01);给予辛伐他汀和血清共同干预后,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞表面积呈递减趋势,其中10-5mol/L和10-6mol/L组分别为(799.84±167.70)μm2和(1076.88±199.28)μm2,均显著低于血清组(P<0.01)。(2)在15%血清刺激后,心肌细胞[3H]亮氨酸掺入率为(2360±106)计数/min·孔,明显高于无血清对照组(1305±92)计数/min·孔,并有统计学意义(P<0.01);10-5和10-6mol/L辛伐他汀组[3H]亮氨酸掺入率分别为(1707±101)计数/min·孔和(1962±125)计数/min·孔,均较血清组明显降低(P<0.01)。(3)随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞ANP的mRNA表达水平逐渐降低,其中10-5和10-6mol/L辛伐他汀组分别为0.29±0.03和0.40±0.03,与单纯血清干预组(0.60±0.03)比较明显降低,差异非常显著(P<0.01)。(4)心肌细胞PKB的mRNA和蛋白表达水平均随辛伐他汀浓度的增加而呈递减趋势,其中10-5、10-6mol/L辛伐他汀组PKBmRNA表达水平为0.28±0.02和0.36±0.03,明显低于血清干预组(0.51±0.03),并有统计学意义(P<0.01)。上述两组PKB蛋白表达水平分别为42.41±2.83和45.68±3.43,也较血清组(60.80±3.49)显著降低(P<0.01)。结论辛伐他汀能够抑制血清诱导的心肌细胞肥大,PKB表达水平下调可能是其分子生物学机制之一。

用酵母双杂交系统研究载脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受体BI(SR-BI)间的相互作用

目的:利用酵母双杂交系统验证在胆固醇逆转运过程中起关键作用的大鼠载脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受体BI- (SR -BI)间存在着相互作用,为初步筛选具有降脂活性组分提供1对新的靶点。方法:首先分别克隆了Wistar大鼠的apoAI和SR -BI基因的cDNA ,并构建了酵母表达载体,利用共转化技术观察到apoAI和SR -BI间存在着相互作用,并在酵母交配实验中证实了这个结果。结果:经共转化后的实验组与阳性对照组可在SD/ -Leu/- Trp/- His/- Ade/X -α- Gal平板上生长且菌斑呈蓝色,经测定α、β半乳糖苷酶活力可知酶活分别为8～1 2U和1 0～40U。酵母交配后的二倍体实验组、阳性对照组可在SD/- Leu/- Trp/ -His/- Ade/X -α- Gal平板上生长且菌斑呈蓝色。结论:apoAI和SR BI间的确存在相互作用。

丹芍化纤方对体外大鼠肝细胞增生、Caspase-3mRNA及白蛋白合成的影响

目的:探讨丹芍化纤方抗肝纤维化的作用机制方法:采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法, 分离、培养大鼠肝细胞,加入5%、10%、20%药物血清干预体外培养的肝细胞,用MTT法测定肝细胞的增生,荧光实时定量PT-PCR(Real Time RT—PCR)法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达,并检测培养上清中的白蛋白. 结果:丹芍化纤方药物血清对肝细胞的增生及白蛋白合成有促进作用,能显著下调肝细胞内caspase-3mRNA的表达, 其表达水平与正常大鼠血清组比较有显著性差异,呈明显的浓度依赖关系. 结论:丹芍化纤方发挥抗肝纤维化作用与其促进肝细胞增生、蛋白合成功能,抑制肝细胞凋亡有关.

白血病患者ID4、WT1、GLIPR1基因启动子区异常甲基化及mRNA表达的研究

DNA甲基化(methylation)作为最早发现的修饰途径一直属于生命科学的前沿课题之一,其能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达⑴。研究显示:白血病抑癌基因启动子异常甲基化与白血病的发病机制密切相关,抑癌基因启动子高甲基化抑制相关mRNA的表达水平可能为白血病发病的重要分子机制。

水通道蛋白4在大鼠脑垂体中的表达

目的:研究水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA在脑垂体中的表达,探讨其在脑垂体激素分泌过程中的作用。方法:应用免疫组织化学和原位杂交技术,观察成年Wistar大鼠脑垂体中AQP4及其mRNA的正常分布。结果:AQP4及其mRNA在成年大鼠神经垂体的垂体细胞上表达呈阳性,分布在毛细血管窦周围的垂体细胞表达尤为强烈。腺垂体的所有细胞均有AQP4的表达,胞质中AQP4mRNA表达呈阳性。中间叶所有细胞AQP4及其mRNA的表达呈弱阳性,其中滤泡星形细胞表达较内分泌细胞强烈。结论:AQP4广泛分布于脑垂体的各种组织细胞表面,可能在垂体激素的正常分泌过程中起重要的调节作用。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2 mRNA表达的影响

目的观察糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)及组织2型金属蛋白酶抑制物(TIMP2)mRNA表达的变化及氯沙坦对它们的影响。方法建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+氯沙坦组(C组)。饲养18周后取出肾脏以RT-PCR法检测MT3-MMP、TIMP2及TGF-β1mRNA的表达,电镜观察大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积),收集24h尿检测尿白蛋白。结果B组大鼠肾组织MT3-MMPmRNA、TIMP2mRNA和TGFβ1mRNA表达以及均显著高于A组,C组显著低于B组,但与A组无显著差异。B组尿白蛋白、基底膜厚度及系膜基质密度显著高于A组,C组均显著低于B组。P<0.05。结论氯沙坦治疗可延缓糖尿病肾病的发生,并可抑制糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2mRNA表达。

基于PKC／NF-κKB／PXR调控网络对卜糖蛋白基因表达的影响及其机制研究

P-糖蛋白（P—gP；ABCB1）是ABC转运体家族重要成员，也是药物在机体内转运的重要载体，参与了药物代谢动力学过程并介导了临床上许多药物相互作用。近年来研究表明P—gP的功能与蛋白激酶C（proteinkinase C，PKC）关系密切。但其分子作用机制尚不明确。