棉花洞A雄性不育系花药发育的mRNA差别显示

应用cDNA AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymorphism)技术 ,分析了棉花洞A雄性不育和可育材料在花药发育过程中花粉发育相关基因表达的差异。结果表明 :在花药发育的相同时期 ,不育和可育花粉cDNA AFLP的谱带在单核期的差异大于减数分裂期。在花粉发育过程中 ,花粉发育相关基因的表达具有时空特异性。共回收了 6 4条差异cDNA片段 ,随机选择 3个片段标记为探针 ,RNA斑点杂交分析表明 ,GHA2 7具有花器官组织特异性 ,仅在花器官中表达 ;GHA2 8、GHA4 7则具有花药组织特异性且仅在可育花药中表达。序列相似性比较表明 :GHA2 7与植物ADP ribosylationfactor (ARF)基因有较高的相似性 ,而GHA2 8、GHA4

白菜核雄性不育两用系花蕾的mRNA差别显示及其cDNA差异片段分析

用 m RNA差别显示技术对白菜核雄性不育两用系中不育株群与可育株群花蕾总 RNA进行了比较分析 .在 6种反转录模板和 2 0种差异随机引物共 12 0种组合的选择扩增中共回收了 18个 c DNA差异片段 ,对其中 6个 c DNA差异片段进行 Northern验证 ,获得了一个白菜核雄性不育两用系可育株群并在花蕾中特异表达的阳性差异片段 ,简称为 B0 30 2 - 4 .Northern验证结果表明它在不育株中的表达受到了明显的抑制 ,其长度为 4 6 3bp.经 Gen Bank BLAST查询 ,它与拟南芥第一条染色体上编码细胞色素 P4 5 0的基因 CYP86 C4核苷酸序列有 84 .3%的同源性 .

利用mRNA差别显示技术分离橡胶树死皮病相关cDNA

从中国热带农业科学院橡胶树早期预测试验地采集不同品系的橡胶树胶乳和树皮组织,分别提取纯化mRNA合成cDNA第一链。通过4个简并锚定引物和10个随机引物进行PCR扩增,经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现了至少4个差异DNA片段只在健康树中表达而在死皮树中没有出现。这4个差异DNA片段分别命名为Hb1(725bp),Hb2,Hb3,Hb4。对Hb1进行了分离、纯化,经Northern杂交证实,Hb1在健康树胶乳中表达活跃,而在死皮树胶乳中表达受到强烈抑制,表明Hb1是与死皮病相关的cDNA片段。进一步将Hb1片段进行回收和克隆,并进行DNA序列分析。序列在GenBank中进行BLAST分析未发现相关同源片段。死皮病相关cDNA片段的获得,将为分离全长死皮病相关基因,搞清该基因表达调控的机理提供条件,进而为从分子水平上阐明死皮病的致病机理打下基础。

利用mRNA差别显示技术分离盐胁迫下红树植物白骨壤耐盐相关cDNA

从福建龙海红树林自然保护区采集白骨壤的隐胎生果实 ,在实验室分别置于 0‰盐度海水和 5 0‰盐度海水进行沙培。分别取叶片 ,提取纯化RNA。通过锚定引物OligodT1 2 GC反转录和 8个 10核苷酸随机引物进行PCR扩增 ,经 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现了 3个差异DNA片段只在高盐培养条件的白骨壤基因组中表达 ,而在无盐培养条件中没有出现。这 3个差异cDNA片段分别命名为csrg1(6 0 0bp)、csrg2 (5 5 0bp)、csrg3(4 80bp)。 3个差异cDNA片段的RNA杂交结果显示 ,只有csrg1片段存在明显差异 高盐中有杂交斑点 ,无盐中无杂交斑点 ;而其余 2个片段在高盐和无盐条件下都没有杂交斑点出现。从而表明csrg1就是耐盐相关cDNA。进一步将csrg1片段克隆 ,并进行DNA序列分析。全序列在GenBank中查询后 ,未发现相关同源片段。耐盐相关cDNA片段的获得 ,将为分离全长耐盐基因 。

mRNA差别显示技术及其在植物基因研究中的应用

mRNA差别显示技术是近年发展起来的一种用于分离和克隆正常与异常细胞之间差异表达基因的PCR方法 ,是目前筛选差异表达基因的有效方法之一 .自问世以来在动物遗传育种方面取得了很大的成绩 ,广泛用于人类及其他动物生长发育基因调控、基因克隆的研究 .在植物基因研究方面应用起步较晚 ,现已开始用于植物基因分析、杂种优势机理等方面的研究 .在此 ,该文介绍了mRNA差别显示技术的原理、步骤、优缺点及其发展 ,并对其在植物特异基因分离方面的研究及其应用前景做了探讨 .

壳寡糖诱导植物抗性相关基因mRNA差别显示分析

壳寡糖是一种天然的信号分子 ,可以诱导植物产生各种防御反应。该文利用mRNA显示技术 ,研究壳寡糖引起的植物抗性相关基因的变化。以 50mg/l壳寡糖喷洒的烟草叶片为材料 ,分别提取处理 8h、7d和对照的叶片总RNA ,利用一个锚定引物和三个随机引物组合 ,通过mRNA差别显示技术共获得壳寡糖处理后发生变化的 8h差别条带 2 2条 ,7d后的差别条带为 74条。将壳寡糖处理 8h得到的 1 7条差别条带克隆到载体上后 ,进行反向Northern鉴定 ,有 6条可能为真实条带。测序结果表明 :其中一条差别片段与烟草热激蛋白 90基因具有 97%的核苷酸同源性。说明 50mg/l壳寡糖处理的烟草叶片在mRNA水平上发生了明显的变化 ,烟草的热激蛋白 90基因可能参与到壳寡糖诱导的抗性信号传导通路中。

BTH诱导水稻对稻瘟病系统获得抗性的mRNA差别显示分析

运用mRNA差别显示技术对水稻感病品系G71受苯并噻二唑(Benzothiadiazole,BTH)诱导3d的应答反应进行了分析,从抗病及其相关基因保守结构域设计的10个引物组合的反应中获得了11个受BTH诱导的cDNA差异片段.反向Northern鉴定其中3个为阳性片段.Northern证实G71NBS14BI2的表达确实受BTH和稻瘟病菌的诱导.RFLP分析将G71NBS14BI2定位于水稻的第11条染色体上,且该片段座落于控制水稻穗瘟部分抗性的QTL区间.

mRNA差别显示技术及其在生命科学中的应用

ｍＲＮＡ表达水平的变化决定细胞的功能状态。个体发育、细胞增殖分化与凋谢、生理刺激和药物治疗等过程，都会出现ｍＲＮＡ表达水平的变化。阐明这种变化有助于揭示细胞生理过程的分子机制。新近发展起来的ｍＲＮＡ差别显示技术为此提供了强有力的工具。该技术无需更多的背景资料，可快速有效地分离表达水平出现差别的基因。

mRNA差别显示法在农药抗性研究中的应用

ｍＲＮＡ差别显示法是近年来在分子生物领域中发展起来的一种寻找和克隆新基因的有效方法。本文就其原理、方法作了简介，并阐述了其在农药抗性研究中的应用前景。

研究基因表达的新方法──mRNA差别显示（DifferentialDisplay）：原理和应用

研究基因表达的新方法──ｍＲＮＡ差别显示（ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＤｉｓｐｌａｙ）：原理和应用何祖华，李德葆（浙江农业大学生物技术研究所杭州３１００２９）１原理和方法高等生物一般具有１０’个不同的基因，在单个细胞或个体中仅有约１５％的基因得到表达，产...

mRNA差别显示技术及其在植物逆境胁迫研究中的应用

mRNA差别显示技术是近年发展起来的一种用于分离和克隆正常与异常细胞之间差异表达基因的PCR方法,是目前筛选差异表达基因的有效方法之一。在此,介绍了mRNA差别显示技术的原理、步骤、优缺点及其发展,并着重对其在植物逆境研究中的应用现状及前景做了探讨。

mRNA差别显示研究肝再生调控基因

以正常肝和再生肝为对比材料 ,利用mRNA差别显示技术 ,研究肝再生过程中基因的差别表达 ,旨在从基因选择性表达水平上探讨肝再生调控机理 .得到 4种未知肝再生相关cDNA ,完成其克隆与序列分析 ,一例在再生肝中的表达低于正常肝 ,余者则高于正常肝 .这些序列均已在EMBL(EuropeMolecularBiologyLaboratory)数据库中登录 ,登录号分别为X9572 1、X9572 2、X9572 3、X97973.

mRNA差别显示技术对肝再生调控基因的研究

以正常肝和再生肝为对比材料,利用mRNA差别显示技术,研究肝再生过程中基因的差别表达,旨在从基因选择性表达水平上探讨肝再生调控机理。得到4种未知肝再生相关cDNA,完成其克隆与序列分析,其一在再生肝中的表达低于正常肝,余者则高于正常肝。这些序列均已在EMBL(Europe Molecular Biology Laboratory)数据库中登录,登录号分别为X95721、X95722、X95723、X97973。

mRNA差别显示技术及其在茶树基因研究中的应用

mRNA差别显示技术是研究差别表达基因的有效方法。本文介绍了mRNA差别显示技术的基本原理和特点,并阐述了近年来mRNA差别显示技术在茶树逆境胁迫基因表达、激素诱导基因表达、突变基因表达等方面的应用,并对其进行展望。

mRNA差别显示技术在植物发育研究中的应用

mRNA差别显示技术是近年发展起来的研究基因表达差异的有效方法。它不仅可比较基因表达差异、追踪已知基因的表达情况 ,而且可作为寻找特异表达基因的重要手段。本文介绍此方法在植物春化作用、光周期反应、花发育、雄性不育、成熟、衰老、种子发育和休眠及根发育等研究领域的应用概况。

α粒子诱导人支气管上皮细胞转化相关基因的mRNA差别显示技术研究

根据1993年UNSCEAR报道,人类所受的天然辐射剂量中近50％来自氡及其子体。流行病学研究表明,接触高水平氡及其子体的铀矿工人肺癌发病率增高。

Progress in mRNA Differential Display

The mRNA Differential Display is a new molecular biological strategy for detecting and characterizing altered gene expression in eukaryotic cells which wad developed in 1992.Because of its simplicity,sensitivity and reproducibility,this method should find wide-ranging underpaid application developmental and molecular biology.Therecent successful applications of this method to gene hunting and the technological improvement promise great potential of mRNA Differential Display.

安吉白茶正常与白化叶片基因表达差异的初步研究

用mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)研究了茶树温敏突变体——安吉白茶正常叶片和白化叶片的基因表达差异。从58个差异表达的片段中通过半定量RT-PCR鉴定出12个阳性片段,其中5个片段在正常叶片中特异表达,4个在白化叶片中特异表达,1个在绿色叶片中上调表达,2个在白化叶片中上调表达。通过与GenBank BLASTX比对分析,5个基因片段比对出相似序列,分别为拟南芥的血红素结合蛋白家族中心区域基因、甜菜的甲硫氨酸合酶基因、苜蓿的一个逆转座子基因、人类20号染色体上的一段3-磷酸甘油醛脱氢酶假基因和玫瑰的ACC合成酶基因,其余7个片段未比对上同源序列,可能为新基因。

水杨酸诱导的甜瓜DDRT-PCR分析及其基因差异表达片段的分离

利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII双酶切和PCR扩增.对其中的cDNA3-4-1测序,在BLAST上比较同源性,发现其与拟南芥热激转录因子hsf8基因具有83%的核苷酸同源性.说明1 mmol/L SA处理的甜瓜叶片在mRNA水平上发生了明显的变化,SA诱导了热激转录因子hsf8基因的大量表达,从而可能影响热激蛋白hsp70的表达,对维持蛋白质结构,稳定胞内环境具有积极作用.