用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异

通过调整差异显示反转录PCR (DDRT PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT PCR方法 .PCR扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的条带数最少为 40个 ,最多达 80个 ,平均为 6 0个 ,条带大小分布在 10 0～ 90 0bp范围 ,灵敏度为 5pg/mm2 .此方法操作简便快速 ,灵敏度高 ,重复性好 .采用这个改良的方法 ,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异 .从 16 0 0 0个cDNA扩增产物条带中筛选出 2 8个差异条带 .二次PCR扩增后 ,进一步筛选出 13个差异条带 ,其中 7个是野生型特异表达的 ,6个是突变型特异表达的 。

反转录差异显示技术及其方法的改进

运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的RT PCR方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价 ,并对其应用前景进行了简单分析。

苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列。为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测。结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05)。提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节。

mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用

21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技术手段的原理、特点及其在动物营养研究中的应用作一综述。

mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用

21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学视为本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。笔者旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术两种最常用的分子生物学技术手段的原理、特点及其在动物营养研究中的应用作一综述。

mRNA差异显示技术的应用与改进

目的 :克隆和研究高低分化胆管癌间差异表达基因。方法 :对mRNA差异显示PCR(DDRT PCR)的一系列条件进行了探索和改进 ,建立了有效的DDRT PCR法。结果 :在高、低分化胆管癌差异分化基因的研究方面获得了满意的结果 ,共获得 9个有显著差异的cDNA片段 ,测序后进行同源序列比较 ,有一个与层粘连蛋白受体基因高度同源 ,还有一个可能是一个新基因的部分序列。结论 :通过对传统方法的改进 ,大大提高了工作效率 ,降低了实验成本和工作量并对相关问题进行了探讨 ,为进一步的研究奠定了基础。

mRNA差异显示技术的研究进展

针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。

mRNA差异显示PCR的研究进展

mRNA差异显示PCR技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一,该方法在生物的发育、性状和对各种生物、理化因子作用时应答过程基因表达的研究中应用十分广泛,笔者简述了mRNA差异显示PCR技术的基本原理、技术改进以及此技术在球虫抗药性研究中的应用。

mRNA差异显示技术的研究进展

对mRNA差异显示技术中引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定的方法等方面进行了概述。

mRNA差异显示技术的优化及其在苏淮猪育种中的应用

运用mRNA差异显示技术可以了解不同组织细胞或同类组织细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,为研究生命活动过程提供重要信息。本文对差异显示技术的基本原理、优缺点以及近年来此方法的改进进行了论述和评价,对其方法提出了优化方案,并初步就初步报道了其在苏淮猪的分子标记辅助选育实践中的应用效果。

差异显示逆转录PCR技术及其应用和进展

差异显示逆转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术是一种筛选和克隆差异表达基因的新方法。该方法利用ｃＤＮＡ逆转录技术、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）的高效扩增和凝胶电泳分离技术，能同时显示多种来自相关细胞的ｍＲＮＡ样品。可用于多种研究目的，如鉴别和观察基因表达的改变；差异表达基因的迅速测序并与基因库比较；单个的差异表达基因片段能迅速克隆并制成探针从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中分离基因等。ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术具有迅速、简便、灵敏和高效等优点，已被广泛地应用于癌症、心脏疾病、细胞分化、衰老及其它领域的研究中，并且在应用中被不断地改进和发展而更趋合理和完善。

mRNA差异显示技术及其在动物遗传研究中的应用

mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,并对其前景进行了展望。

mRNA差异显示技术在妇产科领域的应用

mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达差异的有效方法,其通过一系列的锚定引物与随机引物组合把不同种细胞的mRNA进行分组逆转录及PCR扩增,在相邻泳道上显示扩增结果,通过比较电泳图谱找出差异,对各种不同类型、不同分化时期以及异常细胞差异表达基因进行分离和比较,具有简单、快速、灵敏、重复性好的持点。简介此项技术并综述其在女性生殖器肿瘤、妊娠滋养细胞分化及疾病和生殖调控中的应用。

施氏假单胞菌75 mRNA差异显示PCR方法的建立

为丰富原核生物基因表达差异的研究方法,将应用于真核生物中的差异显示PCR方法应用于原核生物基因差异表达的研究,以1株有机磷农药乐果的降解菌施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzer)75为研究材料,以5′末端依赖性的RNA外切酶(Terminator Exonuclease)降解其中的16S rRNA和tRNA,并用随机引物替代锚定引物,改良真核生物差异显示PCR,建立原核生物mRNA差异显示PCR的试验体系。以LB培养基培养的菌株为对照组,以无机盐培养基(乐果为唯一碳源)为试验组。结果表明:提取总RNA,通过5′-磷酸基团依赖的核酸外切酶降解法获得mRNA,经逆转录,用双随机引物扩增获得253个差异基因,16S rRNA、tRNA的污染较少,其中之一为硫酸盐运输蛋白基因。

人胎脑mRNA的差异显示分析及脑表达新ESTs的分离

应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其中部分产物进行克隆、测序获得了39个CDNA序列，长度为100～500bp。其中34个已被Genbank接受并给予新序列编号。

六种回收纯化差异显示PCR产物方法的比较

目的:建立mRNA差异显示PCR产物回收纯化方法。方法:采用了6种方法对干旱东亚砂藓mRNA差异显示技术的特异PCR产物进行分离回收纯化。结果:6种不同回收方法,显示不同的结果。结论:冻融法简单、方便、经济、有效,对东亚砂藓构建的mRNA差异显示技术中特异条带进行回收,具有有效性和可靠性。

信使核糖核酸差异显示技术在动物科学中的应用

mRNA差异显示反转录PCR技术 ,简称mRNA差异显示技术 (DDRT -PCR)是近年来国外发展起来用于分离未知基因的一种新技术。本文就其技术的原理、步骤、优缺点及其在动物科学中的应用作一简要介绍。

mRNA差异展示技术在肿瘤研究中的应用和改进

基因表达分析是分子及细胞生物学领域中的研究热点。近年来信使核糖核酸差异展示技术（mRNAdifferentialdisplay）的建立和应用使基因功能研究，筛选新基因和克隆转录更加简单、快速和灵敏。这一新技术正日臻完善并成为研究肿瘤发生、发展分子机制的重要研究手段。现将其基本原理、在肿瘤研究中的应用和对技术本身的改进作一综述。