一种适于植物幼胚mRNA整体原位杂交的方法

A mRNA whole_mount in situ hybridization method is reported here for quick, direct analysis of the spatial and temporal mRNA expression patterns in plant young embryos. A cDNA clone THE 3 (tobacco heart embryo 3) was isolated by differential screening from tobacco (Nicotiana tabacum L.) heart embryo cDNA library as compared with the globular embryo cDNA library. The distribution of THE 3 mRNA in tobacco heart embryos and globular embryos was investigated by a whole_mount in situ hybridization technique, showing that THE 3 is preferentially expressed in heart embryos.

HPV E6/E7mRNA原位杂交技术在HPV分型检测阴性的子宫颈腺癌中的研究

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型检测阴性的子宫颈腺癌中HPV E6/E7mRNA的表达情况,为子宫颈腺癌的早期筛查提供新思路。方法:选择2019年1月至2021年6月于潍坊医学院附属医院和山东大学齐鲁医院就诊的HPV分型检测阴性的15例子宫颈腺癌患者为研究组,同期HPV分型检测阳性的15例子宫颈腺癌患者为对照组。采用高危型HPV E6/E7mRNA原位杂交(RISH)检测两组患者病变组织中HPV E6/E7mRNA的表达情况,同时采用免疫组化法(IHC)检测p16和Ki-67的表达情况。结果:与对照组比较,研究组HPV E6/E7 mRNA的阳性表达(73.3%vs.100.0%)、p16的阳性表达(80.0%vs.100.0%)及Ki-67的阳性表达(86.7%vs.100.0%),差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组中HPV E6/E7mRNA表达阴性的4例患者病理类型均属于非HPV相关子宫颈腺癌(胃型腺癌2例,微偏腺癌2例),HPV E6/E7mRNA在HPV相关和非HPV相关中的阳性占比分别为100.0%(26/26)和0(0/4);其中1例普通浸润型腺癌HPV E6/E7mRNA和Ki-67阳性表达,而p16阴性表达,1例胃型腺癌和1例微偏腺癌为HPV E6/E7mRNA和Ki-67阴性表达,而p16阳性表达。结论:HPV分型检测阴性的子宫颈腺癌中绝大部分由HPV感染引起,而且p16表达阴性并不能排除HPV感染,其阳性表达也不代表HPV感染。HPV E6/E7mRNA检测有助于降低HPV分型检测的假阴性率,更加精准地区分HPV相关与非HPV相关子宫颈腺癌。

大鼠消化道促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交研究

目的 探讨大鼠消化道是否存在 Gn RH受体 m RNA及其定位。 方法 用原位杂交组织化学法。 结果 胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。3段小肠绒毛上皮细胞、小肠腺细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。盲肠、结肠和直肠的粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞也能检测到 Gn RH受体 m RNA杂交信号。信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性。 结论 大鼠消化道能合成 Gn RH受体。Gn RH也是一种胃肠激素 ,它由消化系统自身合成 。

地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术

地高辛标记ｃＤＮＡ探针组织及细胞ｍＲＮＡ原位杂交技术＊杜卫东周晓虹马学玲吴浩翟为溶张月娥＊国家自然科学基金重点项目和国家教委博士点专项基金资助课题作者单位：上海医科大学病理学教研室２０００３２（第一作者现工作单位：中国科学院上海生理研究所２０００３１...

用原位杂交法研究猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位

用体外转录方法合成了瘦素 (leptin)长形受体 (Ob Rb)反义和正义RNA探针 ,用原位杂交法研究了 5头 2～ 3月龄母猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位。结果表明 ,猪瘦素长形受体mRNA分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核。

神经损伤与再生中神经元GAP-43mRNA表达的原位杂交研究

目的 研究周围神经损伤过程中生长相关蛋白 (GAP 4 3)mRNA表达的变化规律。 方法 建立大鼠坐骨神经中段钳夹损伤模型 ,用原位杂交技术对大鼠的腰髓和背根神经节的GAP 4 3mRNA表达进行观察。 结果 大鼠坐骨神经损伤 2d后 ,腰髓腹角运动神经元和背根节感觉神经元可检测到GAP 4 3mRNA杂交信号 ;术后 4、7和 14d明显增强 ;术后 30d减弱 ,6 0d已恢复正常。 结论 周围神经损伤诱导神经元胞体GAP 4 3mRNA表达显著增强 ,表明GAP 4 3在神经再生过程中起重要作用。

大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交

目的 研究大鼠胰腺促性腺激素释放激素 (Gn RH)受体 m RNA的存在及细胞定位 .方法 采用原位杂交组织化学法 .结果 胰脏的外分泌部腺上皮细胞、胰导管上皮细胞及内分泌部胰岛细胞内均可检测到较强的 Gn RH受体m RNA杂交信号 .杂交阳性信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性 .结论 大鼠胰脏内、外分泌部均能合成 Gn RH受体 .Gn RH也是一种消化激素 ,它由胰脏自身合成 ,又作用于胰脏 ,可能参与胰脏内。

肺癌组织p16和Rb基因mRNA表达的双重原位杂交观察

目的 :研究 p16和Rb基因在mRNA水平的表达及其与肺癌的关系。方法 :制备 p16和Rb基因cDNA探针 ,采用双重原位杂交的方法 ,对 89例肺癌和正常肺组织进行了 p16和Rb基因mRNA表达的定位研究。 结果 :小细胞肺癌 p16mRNA阳性表达率高达 82 4% (14/ 17) ,而非小细胞肺癌阳性率为 45 8% (33/ 72 ) ,两者差异有显著性 (P <0 0 5 )。非小细胞肺癌RbmRNA阳性表达率为 81 9% (5 9/ 72 ) ,而小细胞肺癌阳性率仅 5 9% (1/ 17) ,两者差异有高度显著性 (P <0 0 1)。两种基因在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。结论 :p16基因mRNA表达的丢失主要发生于非小细胞肺癌 ,Rb基因表达的丢失主要发生于小细胞肺癌。在翻译水平上也存在着引起 p16和Rb基因蛋白失活的可能机制。

小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立

目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。 方法 小鼠胚胎用 4 %多聚甲醛 4℃固定过夜 ,10mg L蛋白酶K(PK)室温消化 30min ,预杂交 2h后 ,加入探针 6 3℃反应 16～ 18h ,用盐溶液高温洗涤多次 ,RNA酶 37℃消化 1h ,封闭 4h后加入地高辛抗体 4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇 ,NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值 ,扣除背景、对照等假阳性信号。 结果 KIAA170 8探针在脑、脊髓等 8个区域有杂交信号 ,对图像数据分析结果表明 ,只有 1个区域的信号在 95 %可信限范围内 ,为阳性信号。 结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度 ,以及洗涤、显色过程 ,得到了低本底、着色清晰的杂交结果 ,结合图像的数据分析步骤 ,消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。

仔猪下丘脑内生长抑素mRNA的分布定位──原位杂交组织化学法研究

用原位杂交组织化学法研究了５只仔猪下丘脑内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明，生长抑素ｚｎＲＮＡ主要见于下丘脑腹内侧核、穹窿周核、腹外侧核、弓状核、室旁核和室周核，此外在视交叉上核、视上核、下丘脑前区和后区偶见零散标记细胞。本研究结果与在绵羊和豪猪上用免疫组织化学法获得的结果略有不同，除与研究方法和种属差异有关外，还可能与实验动物年龄有关。

电针可促进前脑啡肽原mRNA在大鼠脊髓和延髓的表达:原位杂交研究

本实验室以往的研究表明电针可促进脊髓脑啡肽释放,本研究进一步利用原位杂交方法观察电针后前脑啡肽原mRNA在脊髓和延髓的表达。结果表明电针刺激(2Hz,1-2-3mA,30)后24h同侧脊髓背角前脑啡肽原(PPE)-mRNA阳性细胞数高于对侧。电针后对侧延髓腹内侧网状结构[包括延髓网状巨细胞核(Gi)及其α部(GiA)和Gi的外侧旁核(LPGi)]PPE-mRNA阳性细胞数高于同侧。我们推测电针诱发前脑啡肽原mRNA表达增加可弥补因脑啡肽释放增多而导致脑啡肽前体物质的损失,从而参与针刺镇痛的长期效应。

大鼠脑内脑钠素mRNA分布的原位杂交

本工作以特异性的放射磷标记的鼠脑钠肽（ｒＢＮＰ）基因片段为探针，利用高灵敏度的原位杂交分析方法，对大鼠脑组织切片中脑钠肽的ｍＲＮＡ分布进行测定。结果表明，大鼠脑中存在脑钠肽基因的表达，其中下丘脑以及丘脑的边缘部分脑钠肽的ｍＲＮＡ浓度最高，杏仁核簇中浓度较高，嗅区其次，海马回和大脑皮层中浓度较低，小脑和延髓中几乎没有基因表达。

电针可增强大鼠脑内前脑啡肽原mRNA的表达:原位杂交组织化学研究

本文采用原位杂交组织化学技术，结合计算机图象处理系统，对电针后大鼠脑内前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达进行半定量的观察。ＰＰＥｍＲＮＡ探针以半抗原的地高辛标记。电针１０小时之后，ＰＰＥｍＲＮＡ阳性信号的强度和神经元内合ＰＰＥｍＲＮＡ的面积在许多与痛和镇痛有关的核团明显增加，如尾核，伏核，视前区，中脑的脚间核，导水管周围灰质，黑质，红核等。表明电针促进了ＰＰＥｍＲＮＡ在大鼠脑内的表达。这可能是针刺具有累积和长期效应的机制之一。

原位杂交法检测视网膜色素上皮细胞炎前因子mRNA的表达

目的 观察视网膜色素上皮细胞 ( RPE)在炎性介质刺激下炎前因子 m RNA的表达 .方法 培养的人 RPE经IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )的刺激后 ,用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交 ,检测 RPE炎前因子IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α m RNA表达 .杂交结果使用图像分析法进行比较 .结果 原位杂交显示 RPE细胞质中均呈现浓淡不一的淡蓝色着色 ,胞核不着色 .其中 IL - 6m RNA在脂多糖刺激下染色较浅 ,增加脂多糖的剂量不能提高其表达 .图像分析显示在 IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )刺激下 ,RPE表达 IL - 6m RNA的吸光度分别为 10 8± 18和3 5± 14 ,二者之间有显著性差异 ( P<0 .0 1) .结论 在 IL - 1β和脂多糖刺激下 ,人 RPE可以表达炎前因子 IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α的 m RNA .

整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达

为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。

大白鼠弓状核内生长抑素mRNA分布的原位杂交组化研究

本文用原位杂交组织化学技术对大鼠下丘脑弓状核内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＮＡ）的分布进行研究。发现生长抑素ｍＲＮＡ主要分布于弓状核的神经元胞体及近端树突内。含ＳＯＭｍＲＮＡ的神经元可分为浓染大细胞及淡染小细胞两种类型。结果表明弓状核内某些神经元可以合成生长抑素。

听源性遗传癫痫易感大鼠大脑皮层胆囊收缩素mRNA的原位杂交检测(英文)

本实验用原位杂交法 ,对听源性遗传癫痫易感大鼠 (P77PMC)癫痫发作前、单次癫痫发作和多次发作时大脑颞皮层CCKmRNA阳性信号进行了检测。结果显示 :(1)单次和多次癫痫发作后颞皮层CCKmRNA阳性神经元数量明显增加 (P <0 .0 1) ;(2 )多次癫痫发作者上述脑区CCKmRNA阳性神经元数量较单次癫痫发作有明显的下降 (P <0 .0 1)。大脑颞皮层CCKmRNA增高表明 ,CCKmRNA在癫痫发作过程中起了某种作用 ;多次癫痫发作大鼠CCKmRNA表达降低提示 ,单次和多次癫痫发作时大脑皮层对CCKmRNA转录的调控可能存在不同的机制。

应用原位杂交技术检测鼻咽癌p16 mRNA基因表达研究

目的 研究p16mRNA在鼻咽癌组织中的表达情况 ,探讨p16mRNA与鼻咽癌生物学行为的关系。 方法 应用生物素标记RNA探计的原位杂交技术 ,对 2 0例散发性鼻咽癌 (NPC)患者及 3个NPC家系中NPC患者的组织标本进行mRNA检测 ,探讨p16mRNA的异常表达在NPC的发生发展中的作用 ,以 2 0例鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。 结果 2 0例NPC标本原位杂交阳性 8例 ,p16mRNA阳性表达为 40 % ( 8/2 0 ) ,3个高发家系的NPC标本无阳性表达 ,2 0例对照 (鼻咽炎患者的标本 )全部有p16mRNA阳性表达。 结论 p16mRNA在鼻咽癌组织中呈低表达 ,提示p16基因作为一种重要的抑癌基因 。

仔猪前脑基底部内生长抑素mRNA的分布定位──原位杂交法研究

用原位杂交法研究了５只仔猪前脑基底部一些结构内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明，生长抑素ｍＲＮＡ分布于尾状核、伏隔核、壳核、屏状核、隔核、杏仁核、嗅结节和梨状叶。含生长抑素ｍＲＮＡ的神经元胞体多呈卵圆形或梭形。尾状核和伏隔核内的标记细胞分布较均匀（尾状核前部未观察）。壳核、屏状核、梨状叶和嗅结节内的多位于深层。隔核和杏仁核内出现的标记细胞较少，隔核内的分布于隔外侧核。在猪体上的实验结果与用免疫组织化学法在绵羊和马体上获得的结果有一些差异。

Dig标记探针原位杂交检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核TGF-β_1mRNA

目的 通过建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达与神经内分泌免疫网络的关系。方法 用肝大部分切除MSG 大鼠的方法建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,原位杂交技术检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达。结果 发现MSG -肝再生 -大鼠ARNTGF - β1mRNA的表达显著上调 ,切除 11天达 2 0 9± 1 6 ,与生理盐水组 (11 1± 1 2 )和MSG -大鼠假手术组 (15 2± 1 1)比较 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 MSG -肝再生 -大鼠神经 -内分泌 -免疫网络功能紊乱与其ARNTGF - β1mRNA表达失调密切相关。