蒙古绵羊输卵管上皮细胞β-防御素mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR检测

为了检测培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞内sBD-1 mRNA表达水平,运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行了相对定量测定。首先,建立蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养体系作为体外试验模型,提取细胞总RNA,根据GenBank中羊β-防御素基因序列,设计合成引物,进行实时荧光定量PCR。以β-Actin基因为内参基因,对sBD-1 mRNA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算sBD-1 mRNA的相对表达量。经测序分析,扩增产物为β-防御素。结果显示,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素mRNA表达水平的相对含量。

蒙古马母体与胎儿胃肠道NF-κB信号通路相关基因mRNA相对表达水平研究

[目的]研究蒙古马母体与胎儿胃肠道不同区段NF-κB信号通路相关基因的mRNA相对表达水平。[方法]选取3匹体况良好的妊娠蒙古马进行屠宰,屠宰过程中取出胎儿,分别采集母体及胎儿的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、大结肠、小结肠和直肠组织;采用实时荧光定量PCR方法(qPCR),对NF-κB信号通路上6个相关基因(NF-κB p50、NF-κB p65、NFKBIA、IL-1β、TNF-α和IL-8)的mRNA相对表达量进行分析,比较母体和胎儿胃肠道不同区段组织中各基因的表达差异。[结果]NF-κB信号通路上6个基因在蒙古马母体和胎儿胃肠道不同区段8个组织中均有表达;总体来看,NF-κB p50、NF-κB p65和NFKBIA基因的mRNA相对表达量在母体和胎儿上均较高,IL-1β、TNF-α和IL-8基因的mRNA相对表达量均较低。在胃肠道区段8个组织中,6个基因的mRNA相对表达量基本呈现母体高于胎儿的特征;在回肠和盲肠组织中,母体NF-κB p50基因的mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于胎儿;在大结肠组织中,母体NF-κB p65基因和NFKBIA基因的mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于胎儿。[结论]NF-κB信号通路上6个基因在蒙古马母体和胎儿胃肠道8个组织中均有表达,且存在一定差异;母体部分肠道区段组织中的NF-κB p50、NF-κB p65、NFKBIA基因mRNA相对表达量显著高于胎儿。

妊娠合并系统性红斑狼疮患者血清miR-21的相对表达水平及临床意义

目的 探讨妊娠合并系统性红斑狼疮(pSLE)患者血清miR-21的相对表达水平及其临床意义。方法 选取2021年6月至2023年6月于四川大学华西医院诊断为pSLE的48例患者作为pSLE组,另外选取同时期于该院体检的30例健康妊娠期女性作为健康对照组,采用SLE疾病活动指数(SLEDAI),将pSLE组患者分为低活动组(SLEDAI评分为1~9分)和高活动组(SLEDAI评分>9分)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-21相对表达水平,采用红细胞沉降率(ESR)仪检测ESR,采用酶联免疫吸附试验检测血清C反应蛋白(CRP)、抗心磷脂抗体(ACA)和补体C3、C4,以及循环免疫复合物(CIC)水平。统计并比较合并与未合并器官损害pSLE患者的miR-21相对表达水平。采用Pearson相关分析pSLE患者miR-21相对表达水平与ESR、CRP及血清免疫学指标的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-21对pSLE的诊断效能。结果 pSLE组miR-21相对表达水平高于健康对照组,高活动组pSLE患者miR-21相对表达水平高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。健康对照组、高活动组和低活动组ESR、CRP、补体C3、C4、ACA、CIC水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。高活动组和低活动组患者ESR、CRP水平显著高于健康对照组,且高活动组显著高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05);高活动组和低活动组患者补体C3、C4水平低于健康对照组,且高活动组低于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05);高活动组患者血清ACA和CIC水平显著高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。有肾脏和关节损害的pSLE患者的miR-21相对表达水平高于无损害患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,pSLE患者miR-21相对表达水平与补体C3、C4水平呈负相关(r=-0.346、-0.330,P<0.05),与血清ACA、CIC、ESR、CRP水平呈正相关(r=0.499、0.326、0.286、0.389,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-21诊断pSLE的曲线下面积为0.945(95%CI:0.902~0.989)。结论 血清miR-21对pSLE患者的疾病活动具有良好的评估作用,对pSLE的病情预测和诊断具有潜在应用价值。

辣蓼黄酮提取物对南美白对虾免疫功能及其免疫相关因子mRNA表达水平的影响

试验旨在探索辣蓼黄酮提取物对南美白对虾免疫功能的调节及其作用机制。将1 000尾南美白对虾随机平均分为空白对照组,黄芪对照组,辣蓼黄酮提取物高(8.0 g/kg饲料)、中(4.0 g/kg饲料)、低(2.0 g/kg饲料)剂量试验组,连续给药35 d,于第17、35天测定对虾体长、体重,肝胰腺指数、血细胞分类计数、免疫相关酶活性和含量及肝胰腺组织中免疫相关因子的mRNA表达水平。结果表明,用药后第17天,低剂量组南美白对虾终末体长、体重和增重率与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。第35天时,低中高剂量组的iNOS均极显著高于空白对照组(P<0.01);中剂量试验组南美白对虾血液中ACP和TP活性与空白对照组比较差异极显著(P<0.01),中剂量组南美白对虾终末体长、体重和增重率均极显著高于空白对照组(P<0.01);低、中、高剂量组血液中颗粒细胞比例极显著高于空白对照组(P<0.01);血液中TP、SOD、T-AOC、iNOS、ACP、AKP等免疫相关酶活性和含量以及肝胰腺组织中ProPO、PE、LGBP等免疫相关因子的mRNA表达水平均呈不同程度升高。说明辣蓼黄酮提取物对南美白对虾具有促生长、抗氧化和免疫调节作用,其作用机制可能是增加血液中免疫细胞数量和升高相关酶活性及调节免疫相关因子的基因表达水平。

抑郁症患者免疫相关mRNA表达水平与抗抑郁药物治疗反应的相关性

目的分析抑郁症(MDD)患者免疫相关mRNA表达水平与抗抑郁药物治疗反应的相关性。方法选取246例MDD患者,于治疗前检测免疫相关mRNA表达水平,给予抗抑郁药物治疗。根据患者应用抗抑郁药物治疗后的反应情况分为不敏感组和对照组。比较两组的临床资料。应用多因素Logistic回归分析相关因素与抗抑郁药物治疗无反应间的关系。结果246例MDD患者中有42例患者应用抗抑郁药物治疗无反应为不敏感组;剩余204例为对照组。药物治疗无反应率为17.07%。不敏感组MMSE评分低于对照组(P<0.01),不敏感组STAT3 mRNA表达量、mTOR mRNA表达量、IL-6和TGF-β均高于对照组(P<0.01)。回归分析结果显示,STAT3 mRNA表达量、mTOR mRNA表达量、IL-6和TGF-β是抗抑郁药物治疗无反应的独立危险因素(P<0.05),MMSE评分是抗抑郁药物治疗无反应的的保护性因素(P<0.01)。ROC曲线显示,mTOR mRNA表达量预测抗抑郁药物治疗无反应的诊断效能高于MMSE评分、STAT3 mRNA表达量、IL-6及TGF-β,其中mTOR mRNA表达量的最佳截点为>0.83,此时敏感性为81.0%,特异性为78.4%。结论MDD患者认知功能和免疫相关mRNA表达水平与应用抗抑郁药物治疗后的反应密切相关,早期监测有助于发现抗抑郁药物治疗不敏感的患者,早期改变治疗方案、提高疗效。

乳酸菌对獭兔生长性能、肉品质及肌肉胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子1受体、生长激素受体mRNA相对表达量的影响

本试验旨在研究乳酸菌对獭兔生长性能、肉品质及肌肉胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）、生长激素受体（GHR）mRNA相对表达量的影响,探讨其对肉品质的调控作用及适宜用量。选取（43±2）日龄断奶、体重为（1.15±0.05）kg的健康白色獭兔80只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复4只兔（公母各占1/2）。对照组喂饮生理盐水;试验组（Ⅰ～Ⅳ组）喂饮植物乳杆菌菌液,其水平分别为104、107、1010和1013CFU/mL。每隔1 d喂饮1次,每次10 mL。预试期7 d,正试期60 d。结果表明：1）与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ组的失水率分别降低了4.49%和2.27%,差异显著（P〈0.05）。各组獭兔肌肉的pH、剪切力和肉色均无显著差异（P〉0.05）。2）Ⅱ组平均日增重显著高于对照组（P〈0.05）,料重比显著低于对照组（P〈0.05）。各组平均日采食量差异不显著（P〉0.05）。3）Ⅰ组IGF-1 mRNA相对表达量显著高于其他各组（P〈0.05）,Ⅱ组GHR mRNA相对表达量显著高于对照组（P〈0.05）。各组IGF-1R mRNA相对表达量无显著差异（P〉0.05）。由此可知,在饮水中添加乳酸菌能提高獭兔生长性能,促进肌肉IGF-1、GHR mRNA的表达,并改善肌肉的系水力。本试验条件下,乳酸菌的适宜添加水平为107CFU/mL,推荐添加水平为104～107CFU/mL。

复方861对HSC-T6细胞基质分解素1mRNA表达水平影响的研究

为观察复方 86 1对HSC -T6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于HSC -T6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,复方 86 10 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等不同浓度的HSC -T6细胞mRNA表达水平依次为 2 75± 0 35、3 0 0± 0 0 1、3 5 0± 0 71,与空白对照组比较 ,可明显提高MMP3 mRNA表达水平 (P <0 0 5或P <0 0 1)。因此 ,复方 86 1提高HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平 ,可能是其促进胶原降解 ,抗肝纤维化的作用机理之一。

金黄色葡萄球菌氟喹诺酮耐药性与NorA基因mRNA表达水平的关系

提取金黄色葡萄球菌的总RNA，应用荧光定量RT-PCR对多药耐药转运蛋白NorA基因mRNA表达水平进行定量检测的结果表明：中度耐药（CIP）的菌株（4mg／L≤MIC≤64mg／L）NorA基因mRNA表达水平为敏感菌株的5～17倍．强耐药菌株（MIC≥128mg／L）为敏感菌的1～2倍。

不同蛋白水平饲料对斑节对虾家系生长及生长相关基因mRNA表达量的影响

研究了选育出的生长速度不同的9个斑节对虾（Penaeus monodon）家系在蛋白含量为34%、38%和42%饲料的饲喂下,其生长、生长激素基因（GH）、组织蛋白酶-L（Cathepsin-L）、胰蛋白酶（Trypsin）等基因的表达量及生长和基因表达量之间的相互关系。结果表明：1）斑节对虾的生长、3种基因的表达量与饲料中蛋白质含量均呈显著的正相关关系（P〈0.05）;2）随着饲料蛋白质含量的增加,不同斑节对虾家系之间的生长差异和3种基因表达量的差异减小,相同斑节对虾家系在不同蛋白含量饲料的饲喂下,其特定生长率和基因表达量均具有显著性的差异（P〈0.05）;3）选育的9个家系斑节对虾的生长在家系和蛋白质含量这两个因素间没有显著性的交互作用（P〉0.05）,但是肝胰腺和肠道中3种基因的表达量在家系和蛋白质含量这两个因素间具有极显著的交互作用（P〈0.01）,其中,饲料蛋白质含量因素对GH和Trypsin两个基因表达量的贡献率是家系因素的1.31-3.66倍,而饲料蛋白质含量因素对Cathepsin-L基因表达量的贡献率是家系因素的0.06-0.54倍。

氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响

旨在研究氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响。以过氧化值(POV)为9.07(新鲜鱼油)、49.72、144.64、345.45 meq O_2/kg的鱼油配制4种等氮等能的草鱼配合饲料,分别为对照组、轻度氧化组、中度氧化组和重度氧化组。挑选草鱼幼鱼(30±2.68)g 204尾,随机分成4组,每组3重复,分别饲喂上述4种草鱼饲料,饲养8周:以β-actin为内参基因,采用RT-PCR法检测组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽合成连接酶催化亚基(GCLC)mRNA相对表达量。结果表明:氧化鱼油显著降低3种组织SOD mRNA表达量(9<0.05);显著降低肾脏和背肌CAT mRNA表达量(P<0.05);轻度和中度氧化鱼油组GPx mRNA表达量显著升高(P<0.05);氧化鱼油显著降低3种组织GCLC mRNA表达量(P<0.05)。氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响具有组织差异性,鱼油氧化程度越严重,对SOD、CAT和GCLC mRNA表达的抑制作用越强。

大鼠模拟经前期综合征肝气逆证不同脑区5-HT1A受体基因表达mRNA水平变化

本文以大鼠模拟经前期综合征(PMS)肝失疏泄所导致的始发证候肝气逆证为切入点,运用现代分子生物学技术,对肝失疏泄产生肝气逆证时的主要改变指标五羟色胺(5-HT1A)受体基因表达在中枢不同脑区(下丘脑、边缘叶)mRNA水平上的变化进行了探讨。结果显示,在肝失疏泄产生肝气逆证时中枢神经系统中5-HT1A受体的基因表达在mRNA水平均受到一定的抑制,即在肝失疏泄产生肝气逆证时5-HT1A受体的活性明显下降,且下丘脑中5-HT1A受体的活性要比边缘叶中5—HT1A受体的活性下降得显著。

3种抗菌药物诱导改变marA、soxS和robA基因mRNA表达水平

本研究旨在探讨不同类抗菌药物诱导引起大肠肝菌主动外排系统调控基因marA、soxS、robA表达水平的变化特点。挑选大肠杆菌标准菌株O78经阿米卡星(AMK),环丙沙星(CIP),头孢曲松钠(CRO)逐代诱导的10、20、30代菌株作为试验菌株,提取其总RNA并反转录,采用荧光定量RT-PCR的方法测定其主动外排调控基因marA、soxS、robA的mRNA表达水平。结果表明:marA基因在CIP20中mRNA的表达水平最高,是母体菌株O78的2.30倍,且其在CIP10、CRO30、CIP30、AMK20的表达量分别为母体菌株O78表达量的2.11、1.71、1.15、1.44倍;soxS基因在AMK20中的表达量最高,是母体菌株的5.98倍,其它高于O78的菌株表达量的菌株为CRO30、CRO20、CIP20、CIP30;robA基因mRNA表达量除了在CIP10的表达量高于O78外,其余均低于母体菌株的表达。结果提示头孢曲松、环丙沙星、阿米卡星能诱导菌株的主动外排调控基因marA、soxSmRNA表达增加,robA基因mRNA表达减少。

禽脑脊髓炎病鸡脑中白细胞介素—1β mRNA表达水平的研究

用地高辛随机引物法标记白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)cDNA,制备双链cDNA探针,用该探针对20、25日龄禽脑脊髓炎攻毒病鸡和正常鸡的脑组织中IL-1βmRNA表达水平进行原位杂交检测。结果显示攻毒鸡脑组织中IL-1βmRNA表达水平高于正常对照鸡,本研究为进一步研究禽脑脊髓的发病机理和诊断禽脑脊髓奠定基础。

基因mRNA表达水平在晚期胃癌化疗敏感性预测中的应用

目的探索切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、胸苷酸合成酶(TS)、β-微管蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)检测的对于胃癌化疗敏感性的关系。方法将120例进展期或术后复发的胃癌患者随机分为2组,对照组采用FOLFOX4方案、FOLFIRI方案或者DCF方案,试验组进行基因mRNA表达水平检测,并根据检测结果针对性地选择上述3种方案。观察2组患者的近期疗效和生活质量。结果 2组患者均接受2个周期以上的化疗。试验组有效率及生活质量改善率均显著高于对照组(P<0.05)。结论 ERCC1、TS、β-微管蛋白和UGT1A1的表达水平对于晚期胃癌化疗敏感性的预测有着重要的意义,值得临床进一步研究。

细胞色素P450IIE1mRNA表达水平在酒精性肝病发病机制中的作用研究

目的:探讨细胞色素P450IIE1(CYPIIE1)mRNA表达水平和东北地区酒精性肝病发病机制之间的关系。方法:分别收集353名酒精性肝病患者、360名健康对照者的外周血2mL,采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)用于检测CYPIIE1在酒精性肝病患者及健康对照人群中mRNA的表达水平。结果:在酒精性肝病患者中CYPIIE1mRNA水平(10.21%)明显高于对照组(2.05%)(P<0.001)。结论:东北地区酒精性肝病患者与健康对照组相比CYPIIE1mRNA表达水平明显升高,该蛋白活性增加,致使体内氧自由基增加及线粒体损伤加剧,从而使肝脏发生炎症、坏死乃至纤维化,导致了酒精性肝病的发生和发展。

燃煤型氟中毒大鼠脑组织神经型尼古丁受体mRNA及蛋白表达水平改变

目的：观察燃煤型氟中毒大鼠学习记忆能力变化，

不同日龄鸡法氏囊中TLR15、LY86和TRIM39 mRNA表达水平

本研究通过荧光定量PCR方法检测了TLR15、LY86和TRIM39 mRNA在不同日龄鸡法氏囊中的变化。结果显示,10日龄时,TLR15 mRNA的相对表达量显著高于18胚龄时的,10日龄和30日龄时的表达量基本相同;出壳后,LY86 mRNA的表达水平呈下降趋势,30日龄时的表达量极显著低于18胚龄时的;而TRIM39 mRNA在出壳后表达量逐渐增加,30日龄时的表达量极显著高于18胚龄时的。本研究结果表明,TLR15、LY86和TRIM39在鸡法氏囊发育过程中发挥着重要作用。

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的：探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞（SH-SYSY细胞）中α7尼古丁乙酰胆碱受体（nAChR）基因表达后细胞氧化应激水平的变化，以了解该受体的神经保护作用。方法SH-SY5Y细胞转染针对α7MChR的小分子干扰RNA，Real-timePCR法检测转染细胞中α7nAChRmRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平；并用Aβ1-2处理培养细胞，比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性。结果转染siRNA后，α7nAChRmRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81．7％和76．9％；细胞脂质过氧化水平升高38．4％；SOD和GSH-PK活性分别降低30．3％和21．1％。用Aβ1-2处婵细胞后氧化应激水平升高，且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平，同时增强Aβ的神经毒性作用。

鸽LH β基因mRNA时空性表达水平分析

（目的）研究鸽促黄体素B（Iuteinizing hormoneβ，LHβ）基因在公、母鸽不同生理时期不同组织和时期的表达差异，为分析鸽就巢泌乳行为中LH基因的作用机制提供科学依据。（方法）根据鸡、鸭、鹅、鹌鹑、火鸡等禽类的LHmRNA保守区序列设计引物，提取鸽不同时期的脑、肝脏和肾脏组织总RNA，通过RT-PCR方法合成cDNA第一条链，然后采用实时荧光定量PCR方法对LH基因的时空性表达差异进行检测。（结果）结果表明：公、母鸽LHmRNA表达量在脑组织中与青年期相比，就巢期和哺育第1d的表达量均显著下调（P〈0.05），哺育第lOd都极显著增加（P〈0.01）；在肝脏中，就巢期LH基因的表达显著高于青年期的表达量（P〈0.05），哺育期显著低于青年期的表达量（P〈0.05）；在肾脏中，就巢期公鸽LH基因的表达有显著的上调趋势，而母鸽发生下调。（结论）通过对鸽不同生理时期三种组织LH基因mRNA表达水平的时空性检测，初步推断LH对鸽就巢行为的发生和维持起重要作用，本研究的结果将为进一步进行深入研究鸽就巢泌乳机理提供理论基础。