利用SMART（switching mechanism at 5’end of the RNA transcript）技术构建了红肉猕猴桃品种‘红阳’（Actinidia chinesis cv‘Hongyang’）内果皮组织的全长cDNA文库，此文库的构建有助于克隆与次生代谢相关的基因，特别是红肉猕...利用SMART（switching mechanism at 5’end of the RNA transcript）技术构建了红肉猕猴桃品种‘红阳’（Actinidia chinesis cv‘Hongyang’）内果皮组织的全长cDNA文库，此文库的构建有助于克隆与次生代谢相关的基因，特别是红肉猕猴桃花青素特异合成代谢的基因。文库滴度为6．7×10^4cfu／mL，库容为2．72×10^8cfu／mL，文库重组率99．8％，插入片段多数分布在700～1000bp。随机挑选1014个克隆进行测序，测序成功963个，经过序列拼接去除低质量序列后获得632个unigenes，包括92个contigs和540个singletons，获得已知功能unigenes共441个。从所测克隆中得到一个花青素途径的结构基因AcF3H，其cDNA序列长1369bp（GenBank登录号：FJ542819），CDS区为1101bp，编码366个氨基酸的多肽。与拟南芥、葡萄及龙胆已知乃日氨基酸序列比对，发现该基因十分保守。通过RT—PCR技术对苍溪栽培的不同发育时期‘红阳’猕猴桃果实AcF3H基因的表达进行了分析。结果表明，果肉转色前AcF3H基因表达量较高，而转色初期表达量降低，此后随着果实着色加深表达量维持在较高水平。展开更多
文摘利用SMART（switching mechanism at 5’end of the RNA transcript）技术构建了红肉猕猴桃品种‘红阳’（Actinidia chinesis cv‘Hongyang’）内果皮组织的全长cDNA文库，此文库的构建有助于克隆与次生代谢相关的基因，特别是红肉猕猴桃花青素特异合成代谢的基因。文库滴度为6．7×10^4cfu／mL，库容为2．72×10^8cfu／mL，文库重组率99．8％，插入片段多数分布在700～1000bp。随机挑选1014个克隆进行测序，测序成功963个，经过序列拼接去除低质量序列后获得632个unigenes，包括92个contigs和540个singletons，获得已知功能unigenes共441个。从所测克隆中得到一个花青素途径的结构基因AcF3H，其cDNA序列长1369bp（GenBank登录号：FJ542819），CDS区为1101bp，编码366个氨基酸的多肽。与拟南芥、葡萄及龙胆已知乃日氨基酸序列比对，发现该基因十分保守。通过RT—PCR技术对苍溪栽培的不同发育时期‘红阳’猕猴桃果实AcF3H基因的表达进行了分析。结果表明，果肉转色前AcF3H基因表达量较高，而转色初期表达量降低，此后随着果实着色加深表达量维持在较高水平。
