雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P<0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P<0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中synaptopodin、podocin、nephrin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量升高,P62蛋白表达量、p-mTOR/mTOR和p-P70S6K/P70S6K比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:KLF4通过激活足细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤,其作用机制可能与调控mTOR/P70S6K信号通路有关。

基于mTOR/p70S6K/4EBP1通路探讨白花丹素对糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:探究白花丹素对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)通路的影响。方法:SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、雷帕霉素2 mg/kg组、白花丹素50、100 mg/kg组、白花丹素100 mg/kg+自噬抑制剂2 mg/kg组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射的方法建立DN大鼠模型,造模成功后,各组给予相应药物处理,1次/d,连续给药8 w。每日观察大鼠的一般状态,并比较给药前后大鼠的体质量变化;检测大鼠24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)含量,并检测空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量;过碘酸雪夫染色观察肾组织病理学变化;免疫组织化学法检测足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、肾母细胞瘤基因1(WT-1)的表达;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;蛋白印迹法检测肾脏组织凋亡、自噬和mTOR/p70S6K/4EBP1通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的一般状态较差,出现肾小球基底膜增厚、系膜基质增多等肾脏病理损伤以及肾小球足细胞足突倒伏、足突相互融合、部分足突消失,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)蛋白和mTOR(p-mTOR)/mTOR、p70S6K(p-P70S6K)/P70S6K、4EBP1(p-4EBP1)/4EBP1蛋白比值明显升高(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、自噬相关基因12(Atg12)蛋白和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,白花丹素50、100 mg/kg组大鼠的一般状态、肾脏病理和肾小球足细胞损伤明显改善,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织Caspase-3、BAX蛋白、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/p70S6K、p-4EBP1/4EBP1蛋白比值明显降低(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、BCL-2、Atg12蛋白、LC3-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显升高(P<0.05);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤能减弱白花丹素100 mg/kg对DN大鼠的改善作用(P<0.05)。结论:白花丹素可能通过抑制mTOR/P70S6K/4EBP1信号通路,激活自噬,抑制足细胞凋亡,进而减轻DN大鼠肾脏损伤。

非瑟酮调节LKB1-AMPK-mTOR-p70S6K通路改善大鼠少弱精子症

目的研究非瑟酮对少弱精子大鼠的睾丸及精子保护作用,并探究其机制。方法构建大鼠少弱精子模型,将大鼠随机分为空白组、模型组、非瑟酮低、中、高剂量治疗组、LKB1激动剂组,每组各10只。ELISA法检测各组卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinising hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、催乳素(prolactin,PRL)水平;流式细胞术检测精子细胞凋亡;HE染色检测大鼠睾丸组织损伤;透射电镜检测精子细胞超微结构;qRT-PCR和Western blot检测LKB1、AMPK、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达。结果与空白组相比,模型组和LKB1激动剂组FSH、LH、PRL、T等激素水平明显降低,精子细胞出现凋亡,睾丸损伤严重,LKB1、p-AMPK/AMPK表达明显上调,mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达下调(P<0.05);与模型组相比,不同剂量的非瑟酮治疗后,精子细胞凋亡数明显减少,FSH、LH、PRL、T等激素水平明显上升,LKB1、p-AMPK/AMPK明显下调,mTOR、p-p70S6K/p70S6K明显上调(P<0.05)。结论非瑟酮可有效治疗少弱精症大鼠,其作用机制可能与LKB1-AMPK-mTOR-p70S6K信号通路有关。

磷酸化的mTOR、p70S6K及4EBP1在食管鳞状上皮癌变中的表达及其意义

目的分析磷酸化的mTOR、p70S6K及4EBP1在正常组织、高/低级别上皮内瘤变组织及食管鳞癌组织中的表达水平差异及其与患者临床病理特征的相关性,为早期诊断、治疗食管癌提供依据。方法收集食管鳞状细胞癌组织89例,并选取周围高级别上皮内瘤变组织34例,低级别上皮内瘤变组织17例,及远离肿瘤的正常食管组织59例,制作组织芯片,运用免疫组织化学技术检测p-mTOR、p-p70S6K及p-4EBP1在各组中的表达,并与临床病理参数进行相关性分析。结果 p-mTOR、p-p70S6K和p-4EBP1水平在食管鳞癌发生过程中呈递增趋势。p-mTOR水平与肿瘤病理分级呈正相关,在粘膜层及纤维膜层显著高于肌层;p-p70S6K水平与肿瘤临床分期和浸润深度呈负相关。结论 p-mTOR、p-4EBP1与食管癌发生、进展有关,p-p70S6K是食管癌变的早期事件,联合检测可对早期食管癌的发生具有一定预警作用。

mTOR-siRNA转染人晶状体上皮细胞对PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p70S6K及4EBP1表达的影响

目的研究m TOR-siRNA转染人晶状体上皮细胞系B3(human lens epithelial line B3,HLEB3)后,对PI3K/AKT/m TOR信号通路蛋白p70S6K及4EBP1表达的影响,并与雷帕霉素的作用作对比。方法 HLEB3分为m TOR-siRNA组(培养基加入Lipo2000和m TOR-siRNA)、control-siRNA组(培养基加入Lipo2000和control-siRNA)、Lipo2000组(培养基加入Lipo2000)、雷帕霉素组(培养基加入雷帕霉素)和空白对照组,于转染24 h、48 h、72 h后观察各组细胞的形态和密度;Western blot法检测各时间点各组细胞p70S6K及4EBP1蛋白的表达情况。结果 m TOR-siRNA组随着转染时间延长,HLEB3细胞分布稀疏、形态不规则,部分细胞贴壁不良。转染24 h、48 h、72 h时,m TOR-siRNA组细胞密度均较其他四组低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染24 h后,各组细胞4EBP1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),但与空白对照组相比,m TOR-siRNA组及雷帕霉素组p70S6K蛋白表达均下降(均为P<0.05);转染48 h、72 h后,与空白对照组相比,m TOR-siRNA组及雷帕霉素组4EBP1及P70S6K蛋白表达均下降(均为P<0.05),而control-siRNA组、Lipo2000组4EBP1、P70S6K蛋白表达与空白对照组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 m TOR-siRNA及雷帕霉素均可影响HLEB3的增殖及生长活性,并抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路蛋白p70S6K和4EBP1的表达,且m TOR-siRNA的早期作用较雷帕霉素强。

AKt/mTOR信号通路中p70S6K1、4E-BPs在促进肿瘤发生作用中的研究进展

当受细胞外生长因子等刺激作用后,可激活PI3K/AKt/m TOR信号通路,参与控制细胞的生长、增殖、生存、凋亡。AKt/m TOR信号通路在肿瘤的发生发展过程中起着很重要的促进作用。AKt/m TOR信号通路在肿瘤细胞中能够通过p70S6K1和4E-BPs的作用抑制细胞的凋亡,促进核糖体以及蛋白质的合成、促进肿瘤细胞的侵袭和转移、促进细胞周期进展、促进肿瘤血管的生成,进而促进肿瘤的发生发展。本文就AKt/m TOR信号通路通过p70S6K1和4E-BPs促进肿瘤发生的机制进行综述。

P70s6k和4EBP1在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:研究PI3K-Akt-mTOR信号传导通路中P70s6k和4EBP1在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及与膀胱癌发生发展的关系。方法:用免疫组织化学法和Western blot法检测P70s6k和4EBP1在正常膀胱组织和肿瘤中的表达情况。结果:与正常组织比较肿瘤中的P70s6k和4EBP1蛋白水平表达显著增加(P<0.05),表达量在浸润性癌中高于非浸润性癌且随膀胱癌病理级别增高而增高。二者表达有显著相关性(r=0.97,P<0.05)。结论:P70s6k和4EBP1在膀胱癌中呈高表达,并与肿瘤临床分期,病理分级密切相关,可能在肿瘤发生发展过程中起重要作用。

mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与乳腺癌关系的研究

mTOR信号通路已被确定为几种癌症的致癌因素。癌症生物学的一个主要领域是基因组生物标记的发展它可以测量pi3k-akt-mtor途径的活动水平。PI3K-Akt-mTOR信号通路包含许多信号蛋白,包括Ras,PTEN,PIP,PI3K,AKTand mTOR。作为部分信号通路功能的串联功能是是由生长因子结合在细胞膜上的受体酪氨酸激酶引起的。重要的是PI3K-Akt-mTOR信号通路在癌症细胞的生长,增殖,以及生存有重要的作用,在众多癌症中被过度表达包括乳腺癌,卵巢癌和胰腺癌等。因此开发PI3K抑制剂不仅可以消灭肿瘤的生长,也可以协同其它的标记物治疗和化疗治疗相关的癌症。由于这条信号通路重要,已经有了几种相关基因组的方法来评估细胞系中PI3K-Akt-mTOR信号通路的活性以及原发性患者肿瘤的活动情况。

人参皂苷Rb1抗小鼠脑自然衰老及其对mTOR/p70S6K通路的影响

【目的】观察人参皂苷Rb1对小鼠脑组织自然衰老的作用,并探讨mTOR/p70S6K通路在其中的作用。【方法】27只C57/B6雌性小鼠购于中山大学实验动物中心,其中7只3月龄C57/B6雌性小鼠为青年组,20只22月龄C57/B6雌性小鼠为老年组,青年组小鼠予生理盐水(PBS)腹腔注射,老年组小鼠分别予PBS(对照)、低剂量Rb1(10 mg·kg-1·d-1)、高剂量Rb1(20 mg·kg-1·d-1)腹腔注射。6周后处死小鼠,取脑组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量、单胺氧化酶(MAO)活性,western blot技术检测血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、p-m TOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K蛋白表达情况。【结果】与青年小鼠比较,老年对照组小鼠脑组织中的MDA含量增多,MAO活性增加,PAI-1蛋白表达增多,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平增加。与老年对照组比较,注射Rb1的两组小鼠脑组织MAO活性,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平均降低;此外,高剂量Rb1组MDA含量、PAI-1蛋白的表达降低。【结论】高剂量(20 mg·kg-1·d-1)人参皂苷Rb1可以减轻小鼠脑自然衰老;人参皂苷Rb1的这一抗衰老作用可能与m TOR/p70S6K通路密切相关。

4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中作用的实验研究

目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况。结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。流式细胞术结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感。Western-blot结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化。结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用。

miR-381-3p靶向特异性蛋白1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1(SP1)抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1mRNA的表达;利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic、miR-control、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞,基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因,双荧光素酶报告检测靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹技术检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、p70s6激酶(p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达(P<0.01),而SP1高表达(P<0.01);miR-381-3p与SP13′UTR区存在结合位点,且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达;过表达miR-381-3p后,食管癌细胞增殖明显降低(P<0.01),Ki67和PCNA蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞凋亡率明显降升高(P<0.01),Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白表达明显上调(P<0.01),mTOR和p70s6k磷酸化明显减少(P<0.01);而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后,食管癌细胞增殖明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),增殖标记蛋白Ki67表达明显下调(P<0.01),凋亡标记蛋白cleaved caspase-3表达明显上调(P<0.01),而SP1蛋白表达无明显变化。结论miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。

mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与结直肠腺癌关系的研究

磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路正逐渐成为科研工作者关注的焦点,它调控肿瘤细胞生长增殖、分化代谢、自吞噬等过程,促进肿瘤的形成。国内外的许多研究中已经证实mTOR与胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、结肠癌等消化系统恶性肿瘤的相关性。4EBP1(eukaryotic translation initi-ation factor 4E binding protein 1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6蛋白激酶1 (protein S6 kinase 1,S6K1)是m TOR重要的下游分子,他们调节蛋白质的翻译,在结直肠腺癌的形成过程中起到重要作用,并与预后相关,可作为较为理想的分子靶点和预后指标。

沉默YAP1可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响。方法以卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-YAP1组(转染si-YAP1)和si-YAP1+3-BDO组(转染si-YAP1后,加入100μmol/L的mTOR通路激活剂3-BDO)。然后采用qRT-PCR检测YAP1 mRNA的表达量;CCK8检测细胞活力;Western blot检测YAP1、Ki67、E-cadherin、N-cadherin和mTOR/p70s6k通路相关蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果si-YAP1组的YAP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达明显低于si-NC组,E-cadherin蛋白表达明显高于si-NC组。si-YAP1+3-BDO组的p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达明显高于si-YAP1组,E-cadherin蛋白表达明显低于si-YAP1组。结论沉默YAP1可能通过激活mTOR/p70s6k信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

mTOR/p-4EBn,p-p70S6k信号通路对绒癌细胞株JEG-3的作用

目的:运用雷帕霉素对mTOR的特异性抑制作用,探讨mTOR信号通路对人绒癌细胞株JEG-3的作用的分子机制。方法:运用RTPCR检测雷帕霉素对其靶点mTOR的mRNA表达量的影响;用western-blot检测雷帕霉素处理后mTOR及调控的下游蛋白p-4EBP1和p-P70S6K的蛋白表达量的变化。结果:绒癌细胞JEG-3中mTOR/p-4EBP1,p-P70S6k信号通路对绒癌细胞的增殖起着重要作用。

mTOR/P70S6K/HIF-1α信号通路在脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤中的作用及机制

目的:探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用,并探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)信号通路的调控机制。方法:实验分成两部分,第一部分通过使用HIF-1α激活剂、抑制剂分别处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α在LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用;第二部分则分别采用mTOR抑制剂、激活剂与HIF-1α激活剂、抑制剂联合处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α影响LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤的分子机制。分别采用ERS-2电阻仪测量跨膜电阻,荧光法测量荧光右旋糖苷(FD4)浓度,Western blot检测HIF-1α、p-mTOR、p-P70S6K和紧密连接结构蛋白(ZO-1、occludin及claudin-1)的表达。结果:LPS诱导Caco-2细胞损伤,表现为跨上皮细胞电阻值(transepithelial cell resistance,TEER)降低,FD4浓度上升;HIF-1α激活剂DMOG可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,同时上调HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而HIF-1α抑制剂BAY87-2243的作用则与DMOG作用相反;mTOR抑制剂雷帕霉素可降低LPS作用的Caco-2细胞TEER、增加FD4浓度,同时下调p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α及紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而mTOR激活剂MHY1485则可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,上调Caco-2细胞中p-mTOR和p-P70S6K表达水平(P<0.05),但不影响HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达水平。在雷帕霉素基础上加入DMOG,雷帕霉素对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转;而在MHY1487基础上加入BAY87-2243,MHY1487对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转。结论:HIF-1α可减轻LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤,其作用受mTOR/P70S6K信号通路调节。

绞股蓝总皂苷对高糖环境下小鼠肾脏足细胞自噬及mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路的影响

目的:探索绞股蓝总皂苷(Gps)对高糖环境下肾脏足细胞自噬活性的影响。方法:将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5随机分为低糖组、高糖组、绞股蓝组、雷帕霉素组,干预48h后,免疫荧光法检测足细胞LC3表达情况,Western Blot法检测Synaptopodin、Beclin-1、LC3、SQSTM1/P62、mTOR、4EBP1及P70S6K蛋白表达情况。结果:与高糖组比较,绞股蓝组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,SQSTM1/P62蛋白表达显著下降,雷帕霉素组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,两组mTOR、4EBP1、P70S6K蛋白表达均减显著下降(P<0.01)。结论:Gps可促进自噬从而保护高糖环境下的MPC-5,而该作用可能与其抑制了mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路有关。

强精煎介导PI3K/Akt/mTOR通路调控少精子症大鼠精子发生的实验研究

目的:探索强精煎通过介导PI3K/Akt/mTOR通路及其下游靶因子4EBP1、p70S6K,调控环磷酰胺(CTX)诱导的少精子症模型大鼠精子发生的作用机制。方法:将75只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、mTOR通路抑制剂组(雷帕霉素组)、强精煎+雷帕霉素组和强精煎组,每组15只。采用腹腔注射CTX法诱导少精子症大鼠模型。连续药物干预38 d后,剪开各组大鼠腹腔摘取睾丸,采用免疫组化法检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其下游通路蛋白(4EBP1、p70S6 K)、细胞增殖标记蛋白Ki-67表达;采用RT-PCT法检测睾丸组织PI3K/Akt/mTOR基因及其下游靶基因(4EBP1、p70S6K)表达。结果:与空白对照组比较,模型组、雷帕霉素组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6 K、Ki-67蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),雷帕霉素组降低尤为明显。与模型组、雷帕霉素组相比,强精煎组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K、Ki-67蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组、雷帕霉素组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K基因表达水平均显著降低(P<0.05)。强精煎组睾丸组织PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、p70S6K基因表达水平明显上调(P<0.05)。结论:强精煎可能通过激活PI3K/Akt//mTOR/4EBP1/p70S6K蛋白/基因表达、激活Ki-67蛋白表达等多途径调控少精子症大鼠生精细胞的增殖,促进精子发生,提高精子数量。

4EBP1和P70S6K在不同宫颈病变组织中的表达及其意义

目的:研究真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBP1)及核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(P70S6K)在不同宫颈病变组织中的表达水平及其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化SP法及PT-PCR法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈组织中的4EBP1和P70S6K表达水平。结果:在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中,4EBP1和P70S6K蛋白及mRNA水平表达依次增高,且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4EBP1和P70S6K在宫颈癌中的表达水平呈正相关(r=0.354,P<0.05)。结论:4EBP1和P70S6K在宫颈癌发生、发展中起促进作用,二者可作为宫颈癌诊断及靶向治疗的重要生物学标记物。

长期不同强度运动诱导p70^(S6K)和4EBP1对心肌肥大的作用

目的:以长期2种不同强度运动为干预手段,探讨心肌中p70S6K和4EBP1在大鼠心肌肥大反应中的作用。方法:7周龄雄性SD大鼠54只随机分为安静对照组、中等强度组和大强度组,运动组各分为4个时间观测点组,每组6只。运动方案为28 m/min,60 min(中等强度组)和38 m/min,60 min(大强度组),持续7周跑台训练,每周训练5 d,休息2 d。Western blot测定心肌p70S6K、4EBP1的蛋白及磷酸化表达情况。结果:中等强度与大强度组p70S6K及4EBP1蛋白含量与安静组相比均无显著差异;中等强度组磷酸化p70S6K(Thr389)与对照组相比被明显激活,在12 h达到峰值且有非常显著差异(P<0.01),且激活状态持续至运动后24 h,而大强度组未见激活且在运动后24 h显著降低(P<0.05);中等强度组磷酸化4EBP1(Thr37/46)在运动后即刻达到峰值且显著高于安静组,运动后24 h非常显著低于安静水平(P<0.01),大强度组无明显趋势。结论:p70S6K和4EBP1信号分子在中等强度组心肌肥大中发挥了作用,而在长期大强度训练后均未见激活;长期不同强度运动可能通过不同的分子机制来调控心肌肥大反应。