欧前胡素调节MAPK/mTOR/p70S6K信号通路对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨欧前胡素(IMP)对急性髓系白血病(AML)细胞恶性生物学行为的影响以及对MAPK/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制。方法将人AML细胞HL-60进行培养传代,并分为对照组(未处理组),ERK抑制剂组(PD98059组),IMP低、中、高剂量组,IMP高剂量+ERK激活剂组(IMP高+Cearoin组),每组均设置6个重复。MTT法检测IMP对HL-60细胞的毒性;MTT法、软琼脂克隆形成实验检测HL-60细胞的增殖活性;流式细胞仪术检测HL-60细胞凋亡;Transwell小室检测HL-60细胞迁移和侵袭能力;ELISA检测HL-60细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;Western blot检测通路相关蛋白及Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达。结果与未处理组比较,PD98059组和IMP低、中、高剂量组HL-60细胞的存活率、克隆形成数量、迁移和侵袭数量、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及ERK1/2、mTOR、p70S6K磷酸化水平、Bcl-2表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ显著升高(P<0.05);与IMP高剂量组比较,IMP高+Cearoin组中ERK激活剂明显消除了IMP对上述指标的影响(P<0.05)。结论IMP可能通过抑制MAPK/mTOR/p70S6K信号通路,抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞自噬和凋亡。

鲍曼不动杆菌外膜蛋白A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬

目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测Omp A对RAW264. 7细胞自噬的影响。结果:Omp A可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高Omp A引起的LC3B-II表达升高。结论:鲍曼不动杆菌Omp A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264. 7细胞自噬。这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据。

中药肝复康对肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的干预作用

目的观察中药肝复康含药血清对乙醛刺激的肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的影响,以探讨肝复康抗纤维化的分子生物学机制。方法体外培养大鼠HSC-T6细胞,用肝复康对乙醛刺激的HSCs进行干预,采用RT-PCR法测定HSCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原、mTOR、P70S6K的表达。结果空白对照组肝星状细胞各指标表达量呈相对较低水平,乙醛刺激组细胞Ⅰ型胶原、mTOR、P70S6K和Ⅲ型胶原表达量明显升高(P<0.05),而肝复康干预对于细胞Ⅰ型胶原、mTOR和P70S6K的升高有明显的抑制作用(P<0.01)。结论 mTOR/P70S6K信号通路在HSCs活化过程中起到重要作用,肝复康发挥抗纤维化的作用机制与阻断mTOR/P70S6K信号通路有关。

原发性胆囊癌组织中mTOR/p70S6K信号通路的表达及其临床病理学意义

目的探讨mTOR/p70S6K信号通路在原发性胆囊癌组织中的表达和临床意义。方法随机选取原发性胆囊癌患者86例,慢性胆囊炎患者15例,采用SABC免疫组化方法,检测胆囊癌组织和慢性胆囊炎症组织中mTOR及p70S6K蛋白的表达情况。并分析其与原发性胆囊癌组织临床病理学特征之间的关系。结果mTOR及p70S6K蛋白在原发性胆囊癌组织中的阳性表达率分别为77.91%(67/86)及80.23%(69/86),显著高于两者在慢性胆囊炎组织中的阳性表达率。两者在原发性胆囊癌组织中的表达呈正相关(r=0.791,P<0.01)。mTOR及p70S6K蛋白的阳性表达率与胆囊癌组织的分化程度、Nevin分期和淋巴结转移密切相关(均P<0.05),而与肿瘤直径、患者性别无明显关系。结论mTOR/p70S6K信号通路的特异性激活可能在原发性胆囊癌的发生、浸润、转移中起重要作用。

基于mTOR/p70S6K信号通路探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的影响

目的:探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响。方法:将小鼠足细胞MPC5分为:对照组(5.5mmoL/L葡萄糖)、高糖诱导组(30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷低浓度组(2.5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷中浓度组(5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷高浓度组(10μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)。各组向RPMI 1640培养基中加入上述浓度的相应试剂或药物,培养72h。酶标仪测定各组MPC5细胞吸光度值,计算细胞活力;流式细胞仪测定各组MPC5细胞凋亡情况;鬼笔环肽染色观察各组MPC5细胞骨架形态;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别测定各组MPC5细胞mTOR、p70S6K信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果:对照组MPC5细胞骨架形态正常,细胞长轴呈线性分布,荧光染色明显;与对照组比较,高糖诱导组MPC5细胞骨架断裂,细胞萎缩,荧光染色黯淡,吸光度值、细胞活力显著降低,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖诱导组比较,紫丁香苷低、中、高浓度组MPC5细胞骨架结构恢复清晰,荧光强度逐渐变亮,足突趋于明显,吸光度值、细胞活力依次升高,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论:紫丁香苷对高糖诱导的MPC5细胞损伤具有保护作用,能明显促进MPC5细胞增殖,抑制其凋亡;其机制可能与紫丁香苷抑制高糖状态下MPC5细胞中mTOR/p70S6K通路的激活有关。

沉默YAP1可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响。方法以卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-YAP1组(转染si-YAP1)和si-YAP1+3-BDO组(转染si-YAP1后,加入100μmol/L的mTOR通路激活剂3-BDO)。然后采用qRT-PCR检测YAP1 mRNA的表达量;CCK8检测细胞活力;Western blot检测YAP1、Ki67、E-cadherin、N-cadherin和mTOR/p70s6k通路相关蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果si-YAP1组的YAP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达明显低于si-NC组,E-cadherin蛋白表达明显高于si-NC组。si-YAP1+3-BDO组的p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达明显高于si-YAP1组,E-cadherin蛋白表达明显低于si-YAP1组。结论沉默YAP1可能通过激活mTOR/p70s6k信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

下调Ets2表达对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:探讨下调Ets2表达对裸鼠Eca109移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:选择已筛选出的在体外靶向下调Ets2基因表达的siRNA片段,构建包含此片段的慢病毒(LV-siE ts2)并感染Eca109,15只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和LV-siE ts2组,分别背部皮下接种Eca109、LV感染的Eca109和LV-siE ts2感染的Eca109,形成移植瘤,之后观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤抑制率。应用qRT-PCR检测肿瘤组织中Ets2 mRNA的表达,TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡,Western blot法检测肿瘤组织中Ets2、Caspase-3、Bcl-2、E-cadherin以及mTOR/p70S6K信号通路蛋白的表达。结果:LV-siE ts2组肿瘤生长速度明显变慢,肿瘤体积和质量显著小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);LV-siE ts2组肿瘤组织中Ets2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低;LV-siE ts2能引起Eca109细胞的凋亡,且上调Caspase-3和E-cadherin蛋白表达水平,而下调Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);LV-siE ts2能显著降低mTOR及p70S6K的蛋白表达。结论:LV-siE ts2在体内通过抑制mTOR/p70S6K信号通路促进细胞凋亡,从而抑制裸鼠Eca109移植瘤的生长。

mTOR/P70S6K信号通路活化在肝硬化门静脉高压症中意义的实验研究

目的探讨mTOR/P70S6K信号通路在早期肝硬化门静脉高压症中的活化状态,证实mTOR信号通路的激活参与肝硬化门静脉高压症的发病,并探讨其可能机制。方法本实验采用胆道结扎离断制备大鼠肝硬化门静脉高压症模型。雄性SD大鼠20只随机分为假手术组和模型组。通过组织病理学、形态学和血流动力学评估肝纤维化、炎症、和门静脉压力。采用RT-PCR和Western blot法分别测定肝纤维化标志物PC-αI、α-SMA、TGFβ1及PDGF基因的转录和mTOR信号通路标志物P70S6K和磷酸化的P70S6K(P-P70S6K)的表达。结果模型组大鼠胆道结扎离断3周后,P-P70S6K表达量明显增高而总蛋白P70S6K无显著差异,同时HSCs和胆管细胞活化增殖显著,肝脏促纤维化基因明显上调,间质胶原合成增加。结论mTOR/P70S6K信号通路主要以磷酸化功能状态参与肝硬化门静脉高压症的形成,阻断该通路可能成为肝硬化门静脉高压症治疗的新靶向。

木瓜总三萜通过调节miR-10a和PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-1法检测细胞活性和线粒体活性,实时定量PCR法检测miR-10a mRNA表达,Western blot法检测HGC-27细胞中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达及其磷酸化。结果:木瓜总三萜可显著降低HGC-27细胞活性和线粒体活性,促进细胞凋亡;上调miR-10a mRNA表达,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达及降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值(P<0.05)。结论:木瓜总三萜具有抑制人胃癌HGC-27细胞线粒体活性和细胞增殖的作用,其机制可能与促进miR-10a表达,抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活有关。

mTOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的研究mTOR/P70S6K信号通路中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其底物激酶(P70S6K)在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法用RT-PCR和免疫组织化学法检测正常宫颈、宫颈癌中mTOR和P70S6K激酶的表达。结果与正常组织相比,宫颈癌中的mTOR和P70S6K激酶在mRNA及蛋白水平表达均显著增加(P<0.05),且两者的表达具有显著的正相关性(r=0.746,P<0.001)。结论mTOR/P70S6K信号转导通路在介导宫颈癌的发生、发展的过程中起到重要作用。

mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测20例HCC患者癌组织、癌旁肝组织以及10例正常肝组织中mTOR及P70S6K mRNA表达情况;并分析mTOR及P70S6K mRNA的表达与相关临床参数的关系.结果:mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平显著高于在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达水平(mTOR mRNA:0.594±0.218vs0.437±0.156,0.594±0.218vs0.383±0.081,均P<0.05;P70S6K mRNA:0.610±0.147vs0.486±0.162,0.610±0.147vs0.440±0.141,均P<0.05).mTOR mRNA和P70S6K mRNA在HCC组织中的表达呈正相关(r=0.548,P=0.012),且两者在癌旁肝组织及正常肝组织中的表达亦正相关性(r=0.607,0.737,P=0.005,0.015).mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平与病理分期、门静脉癌栓等明显相关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、性别等无明显关系.结论:mTOR/P70S6K信号通路在HCC中特异性激活.mTOR/P70S6K信号通路可能在肝细胞肝癌的发生、发展中起重要作用.

Cx43和mTOR/p70S6K信号通路在胃癌中的研究进展

在我国,胃癌占恶性肿瘤的第二位[1],好发于中老年男性。胃癌一直是研究热点,但胃癌的发生机制尚不清楚。目前达成共识的结论是:胃癌的发生发展是一个多因素、多步骤、复杂的渐进过程,涉及多条信号传导通路的异常改变[2]。近年来,对于细胞缝隙连接通讯(gap junction intercellular communciation,GJIC)结构和功能的研究,为探索多种肿瘤的发生机制提供了新思路[3]。GJIC是由6个相同或相似的缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)环绕而成的直径约1.5mm亲水性跨膜孔道,其中Cx43介导的GJIC与肿瘤关系最为密切。许多研究发现,Cx43介导的GJIC在肿瘤中表达水平和膜定位可影响癌细胞的发生、粘附及转移[4]。

miR-381-3p靶向特异性蛋白1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1(SP1)抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1mRNA的表达;利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic、miR-control、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞,基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因,双荧光素酶报告检测靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹技术检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、p70s6激酶(p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达(P<0.01),而SP1高表达(P<0.01);miR-381-3p与SP13′UTR区存在结合位点,且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达;过表达miR-381-3p后,食管癌细胞增殖明显降低(P<0.01),Ki67和PCNA蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞凋亡率明显降升高(P<0.01),Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白表达明显上调(P<0.01),mTOR和p70s6k磷酸化明显减少(P<0.01);而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后,食管癌细胞增殖明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),增殖标记蛋白Ki67表达明显下调(P<0.01),凋亡标记蛋白cleaved caspase-3表达明显上调(P<0.01),而SP1蛋白表达无明显变化。结论miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。

miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制研究

目的探讨miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制。方法采用人宫颈癌HeLa细胞株构建宫颈癌大鼠模型,分为Gg组(宫颈癌大鼠)、Gm组(注射miR-10b-mimics)、Gi组(注射miR-10b-inhibitions)。采用HE染色观察癌组织变化,Western blotting、RT-PCR检测mTOR/P70S6K的mRNA和蛋白表达水平,Transwell检测HeLa细胞的侵袭能力。结果Gg组肿瘤组织出现丰富的血供,界限分明,切面呈鱼肉状,肿瘤细胞大小较为均等;Gm组肿瘤组织中有大量纤维血管形成,肿瘤细胞大小不等,胞浆着色较深;Gi组肿瘤组织中纤维血管较少,胞浆着色稍浅。Western blotting结果显示,mTOR/P70S6K蛋白表达水平为Gm组<Gg组<Gi组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,mTOR/P70S6K mRNA水平为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05),miR-10b mRNA水平为Gi组<Gg组<Gm组(P<0.05)。Transwell结果显示,肿瘤细胞侵袭能力为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05)。结论miR-10b过表达可激活mTOR蛋白,增加P70S6K活性,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,有望成为宫颈癌治疗的新靶点。

胃癌中CX43表达及与mTOR/p70S6K信号通路的关系

目的检测连接蛋白43(connexin 43,CX43)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及p70S6激酶(p70S6 kinase,p70S6K)在胃癌中的表达,探讨其与胃癌临床病理特征的关系及三者表达的相关性。方法采用免疫组化法、Western blot法和qRT-PCR技术检测胃癌及正常胃黏膜组织中CX43、mTOR和p70S6K蛋白及mRNA的表达。结果CX43蛋白和mRNA在胃癌组织中的表达量均低于正常胃黏膜组织;mTOR与p70S6K蛋白及mRNA在胃癌组织中的表达量均高于正常胃黏膜组织,且两者在胃癌组织中表达呈正相关(r=0.701,P<0.01;r=0.630,P<0.01)。CX43、mTOR和p70S6K均与胃癌TNM分期、分化程度、淋巴结转移、浸润深度相关,与患者性别、年龄无关。胃癌组织中CX43与mTOR、p70S6K蛋白表达呈负相关(r=-0.255,P<0.05;r=-0.273,P<0.05);CX43与mTOR、p70S6K mRNA表达亦呈负相关(r=-0.642,P<0.01;r=-0.678,P<0.01)。结论mTOR/p70S6K信号通路的特异性激活及CX43的差异性表达可能参与了胃癌的发生、发展及转移过程,为研究胃癌的发病机制及靶向治疗提供新的研究方向。

依沙佐米通过mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞凋亡

目的探讨依沙佐米通过mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞凋亡的机制。方法用依沙佐米处理食管鳞癌细胞KYSE-140和KYSE-150,分别用CCK-8法和Edu法检测细胞增殖,流式细胞仪检测依沙佐米处理后KYSE-140和KYSE-150的细胞凋亡,以及caspase-3等凋亡因子的表达,RT-qPCR和Western blot检测依沙佐米处理后mTOR、p70S6K和4E-BP1的mRNA和蛋白表达水平,以及p-p70S6KThr421/Ser424和p-4E-BP1Thr36蛋白的表达。结果依沙佐米可以抑制食管鳞癌细胞KYSE-140和KYSE-150的增殖,且存在剂量依赖性。流式细胞仪检测结果显示依沙佐米处理后,KYSE-140和KYSE-150细胞的凋亡率显著增加(P<0.05),caspase-3活性显著增高(P<0.05),处理组出现PARP的裂解产物cleaved PARP,而未处理组未见PARP的裂解,并且细胞凋亡激活物p-p38的表达升高(P<0.05)。与对照组相比,依沙佐米处理组mTOR的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),p70S6K和4E-BP1的mRNA表达水平显著下降(P<0.05),且p-p70S6KThr421/Ser424和p-4E-BP1Thr36的表达显著下降(P<0.05)。结论依沙佐米可通过抑制mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞的凋亡。

莪术提取物通过mTOR/p70S6K信号通路调控胆囊癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的机制

目的:探讨莪术提取物(β-榄香烯)通过调控mTOR/p70S6K信号通路对胆囊癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采取不同浓度(0、20、50、100μg/mL)的莪术提取物处理胆囊癌细胞GBC-SD,记为0μg/mL组、20μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组;选取100μg/mL的莪术提取物和20μmoL/L的mTOR抑制剂CCI-779,记为莪术提取物组和莪术提取物+CCI-779组。采用MTT、流式细胞仪检测细胞的活力和凋亡;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测Cleave-capase3、Bax、MMP2和mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达。结果:不同浓度的莪术提取物组可以降低细胞活力、细胞迁移数目和侵袭数目,增加细胞的凋亡率,上调Cleave-capase3、Bax蛋白表达,下调MMP2、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达,呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。莪术提取物+CCI-779组的细胞活力、细胞迁移数目、侵袭数目和MMP2蛋白表达低于莪术提取物组,细胞凋亡率、Cleave-capase3、Bax蛋白表达高于莪术提取物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术提取物通过抑制mTOR/p70S6K信号通路抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡。

mTOR/p70S6K信号通路在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨m TOR/p70S6K信号通路在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用天津市中心妇产医院2011年1-6月手术标本120例,其中正常卵巢组(Ⅰ组)、上皮性良性卵巢肿瘤组(Ⅱ组)、上皮性卵巢癌组(Ⅲ组),每组各40例。免疫组化染色检测m TOR、p70S6K在上皮性卵巢组织中的表达。反转录(RT)-PCR法测m TORm RNA、p70S6Km RNA的表达。采用Kaplan-Meier和log-rank检验进行单因素生存分析,比较m TOR、p70S6K蛋白表达水平(阴性、阳性组)的卵巢癌患者的生存率。结果:免疫组化染色显示:m TOR、p70S6K在Ⅰ组卵巢组织中表达很低,Ⅱ组卵巢组织中表达次之,而在Ⅲ组卵巢组织中却高表达。与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组m TORm RNA、p70S6Km RNA的表达增加,与Ⅱ组比较,Ⅲ组m TORm RNA、p70S6Km RNA的表达增加。非参数分析显示,上皮性卵巢癌组织中m TOR、p70S6K蛋白表达水平与手术病理分期(P=0.039、0.022)和病理分级(P=0.047、0.037)相关,与患者年龄、病理类型、腹膜转移无关(P>0.05)。单因素生存分析显示,m TOR、p70S6K蛋白的表达阴性与阳性的总生存时间比较,差异有统计学意义(P=0.021)。结论:m TOR/p70S6K信号通路在上皮性卵巢癌的发生、发展、转移和预后中可能起重要作用。

AMPK/mTOR/P70S6K信号通路在大鼠心肌细胞脂毒性损伤中的作用

目的探讨AMPK/mTOR/P70S6K信号通路在大鼠心肌细胞脂毒性损伤中的作用。方法用不同浓度的棕榈酸刺激H9c2细胞24h,或用0.4mmol/L棕榈酸分别以不同时间刺激H9c2细胞,检测细胞存活率;检测细胞内ROS、MDA及SOD水平;检测细胞内AMPK/mTOR/P70S6K信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的水平。结果 MTT结果显示,棕榈酸刺激心肌细胞后,细胞存活率呈现浓度和时间依赖性降低趋势;免疫荧光法及流式细胞法显示,与对照组相比,棕榈酸(0.4mmol/L)刺激细胞24h及48 h时,细胞内ROS及MDA水平显著升高,SOD活性显著降低;免疫印迹法显示,与对照组相比,棕榈酸(0.4mmol/L)刺激细胞24h及48h时,p-AMPK蛋白及Bcl-2蛋白表达降低,p-mTOR、p-P70S6K、Bax和cleaved caspase3蛋白表达出现增高趋势。结论大鼠心肌细胞的脂毒性损伤可能与AMPK/mTOR/P70S6K信号通路调控密切相关。

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中synaptopodin、podocin、nephrin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量升高,P62蛋白表达量、p-mTOR/mTOR和p-P70S6K/P70S6K比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:KLF4通过激活足细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤,其作用机制可能与调控mTOR/P70S6K信号通路有关。