mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014(10、100、500、1000 nmol/L)对肝癌细胞增殖的作用,再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1(UHRF1)mRNA和蛋白的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示,10、100、500、1000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力,抑制程度与其浓度呈正相关(P<0.05);荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,500和1000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论:AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。

mTOR蛋白抑制剂Torin2的合成与合成工艺优化

目的对mTOR抑制剂Torin2合成方法进行探索及优化。方法以对溴苯胺作为起始原料,通过氨基键合、合环、氯化、键合3-氨基三氟甲苯环、氧化、合环和Suzuki反应得到目标产物。采用正交实验对关键中间体3、8和终产物合成条件进行了优化。结果与结论中间体和目标化合物结构经MS和1H NMR数据确认,目标化合物的反应总收率从3%提升至18%,无需柱色谱分离,适合工业化生产。

45例结节性硬化症的临床表型及TSC1/TSC2基因变异分析

目的总结45例经基因诊断确诊的结节性硬化症(TSC)临床特点及TSC1/TSC2基因变异分析,提高对本病的认识。方法回顾性收集2018年1月至2021年10月确诊的45例TSC1/TSC2基因变异相关结节性硬化症合并癫痫患儿的临床资料进行总结及分析。结果45例患儿中44例患儿以癫痫起病,包括婴儿痉挛发作25例、全面强直-阵挛发作23例、肌阵挛发作8例、失神发作6例、失张力5例、局灶性发作20例。45例均有皮肤色素脱失斑,6例伴发颜面部血管纤维瘤。25例智力低下;12例有运动发育落后;6例心脏错构瘤;8例肾囊肿;1例多囊肾;8例视网膜错构瘤。15例患者检出TSC1基因杂合突变,其中8例新生突变,7例为遗传性突变;移码突变4例,无义突变7例,错义突变2例,剪切突变2例。30例患者检出TSC2基因杂合突变,其中21例为新生突变,9例为遗传性突变;移码突变7例,无义突变4例,错义突变7例,整码突变3例;剪切突变7例,大片段缺失1例,延长突变1例。1例TSC1基因变异与10例TSC2基因变异之前未见报道。结论结节性硬化症临床表现多样,基因型-表型关联复杂。临床上对于疑诊结节性硬化的患者应尽早行TSC1/TSC2基因分析以期及早诊断、对症治疗。

抑制Wip1磷酸酶对肝再生及肝细胞有氧糖酵解的影响

目的:探讨Wip1抑制剂GSK2830371对肝部分切除小鼠肝再生的影响及GSK2830371对肝细胞有氧糖酵解的影响。方法:小鼠2/3肝切除模型,腹腔注射GSK2830371,免疫组化Brd U染色和肝脏称重检测肝再生水平,酶学比色法检测肝脏中乳酸含量以及HK、PFK、PK和LDH的活性。GSK2830371作用于LO2肝细胞,酶学比色法检测葡萄糖和乳酸水平及关键酶活性,酶化学发光法检测ATP水平,CCK-8检测线粒体活性,Western bot和QRT-PCR检测相关机制。结果:经GSK2830371治疗,小鼠肝再生明显加快,PFK、HK和LDH的活性以及肝脏乳酸量均增高。经GSK2830371刺激,LO2消耗的葡萄糖和产生的乳酸明显增多,PFK、HK和LDH的活性增强,mTOR蛋白表达量及其磷酸化水平增高,HIF1α、PDK1、GLUT1和MCT4的mRNA表达上调。结论:GSK2830371抑制Wip1后能促进肝再生并提高肝细胞的有氧糖酵解水平。

联合mTOR1/2抑制剂AZD8055和MEK1/2抑制剂PD0325901抑制三阴乳腺癌细胞研究

MEK1/2抑制剂在作用于三阴乳腺癌(TNBC)细胞时,会负反馈引起PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。对于PI3K抑制剂不敏感的TNBC细胞,无法选择PI3K抑制剂和MEK1/2抑制剂联合。本研究选择联合mTOR1/2抑制剂(AZD8055)和MEK1/2抑制剂(PD0325901)作用于TNBC细胞。在MDA-MB-435细胞中,AZD8055可以抑制由PD0325901导致的PI3K通路的负反馈激活,从而完全抑制MDA-MB-435细胞中ERK1/2通路和PI3K通路的活性。DNA复制实验与细胞增殖抑制结果证明二者具有协同抑制细胞增殖的作用,细胞周期实验证明二者联合后协同引起细胞周期中的G1期阻滞。

mTOR信号通路在DDC诱导的胆管损伤中的作用

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在3,5-二乙氧基羰基-1,4-氢-尿嘧啶(DDC)诱导的胆管损伤中的作用。方法24只雌性C57BL/6J小鼠随机分为N-甲基呲咯烷酮(NMP)组、mTOR抑制剂(Torin1)处理组(Torin1组)、NMP+DDC组、Torin1+DDC组,每组6只小鼠。DDC组给予3 w 0.1%DDC饲料喂养,4组小鼠均在造模第1天通过腹腔注射的方式给予NMP或Torin1处理,每2 d注射1次,连续3 w。血清学检测肝功能变化情况;苏木素-伊红(HE)和Masson染色检测胆管增生、炎性细胞浸润及肝脏纤维化程度;免疫组织化学法检测肝脏(Ki67)和细胞角蛋白(CK19)的表达;qRT-PCR检测肝组织炎症相关基因白细胞介素(IL)-6、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、IL-10、精氨酸(Arg)1的表达;Western印迹检测mTOR信号通路活化表达情况。结果与NMP组和Torin1组相比,NMP+DDC组血清谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)均明显升高,肝脏炎症细胞浸润、胆管增生及肝纤维化病变严重,IL-6、MCP-1和Arg1 mRNA表达明显升高,IL-10明显下降。而Torin1处理后,IL-6和MCP-1 mRNA表达明显下调,IL-10和Arg1 mRNA的表达明显升高。Western印迹检测结果显示NMP+DDC组p-mTOR、p-蛋白激酶B(Akt)、p-p65的表达相比于NMP组和Torin1组明显升高,而注射Torin1则抑制该信号通路的活化。结论mTOR/AKT/核因子(NF)-κB信号通路参与DDC诱导小鼠胆管损伤的发生发展,抑制该信号通路可以减轻肝胆管的损伤。

第二代mTOR抑制剂的抗肿瘤研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是PI3K/Akt/mTOR等多种信号通路的下游分子,在细胞增殖、分化、转移和存活中发挥重要作用,已成为癌症治疗的一个重要靶标。传统的mTOR抑制剂主要是雷帕霉素及其衍生物,能特异性抑制mTORC1,但在部分癌症临床治疗中未达到预期疗效,且易产生耐药性。第二代mTOR抑制剂即双重或多重mTOR抑制剂能与mTOR的催化位点竞争ATP,高度选择性地抑制mTORC1和mTORC2,比单靶点mTOR抑制剂具有更大的治疗优势。此外,某些天然来源产物也具有对mTOR的抑制作用,且毒性、副作用更小。综述近几年有关mTOR及其抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的自噬调节剂研究进展

细胞自噬与多种疾病的发生密切相关。在神经退行性疾病、代谢性疾病、遗传性肝脏疾病、心脏疾病及肿瘤等疾病中均出现异常自噬。通过小分子药物调节相关疾病中的自噬功能,有可能成为疾病治疗的新策略。目前研究阐明,PI3K/Akt/mTOR信号通路与自噬的发生关系密切,小分子药物通过干扰该通路中相关激酶来调控细胞自噬。本文针对PI3K/Akt/mTOR信号通路中可以调控自噬发生的泛PI3K抑制剂、PI3K/mTOR双重抑制剂、泛mTOR抑制剂、mTOR1抑制剂及Akt抑制剂进行了全面综述,以期为自噬调控剂的开发提供一定的借鉴。