海藻玉壶汤及拆方对甲状腺肿大模型大鼠mTOR-p70S6K/4E-BP1信号通路的影响

目的探讨海藻玉壶汤中海藻与甘草加减应用对甲状腺肿大模型大鼠哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)/真核起始因子4E结合蛋白(4E-BP1)信号通路的影响。方法选取Wistar大鼠84只,雄性,随机分为空白组、模型组、优甲乐组(0.02μg/g)、海藻玉壶汤组(10.08 g/kg)、海藻玉壶汤减海藻组(9.00 g/kg)、海藻玉壶汤减甘草组(9.18 g/kg)和海藻玉壶汤减海藻甘草组(8.10 g/kg),除空白组其余各组给予丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性对照药,其余各给药组给予相应药液。计算各组大鼠甲状腺系数,观察甲状腺病理形态变化,用RT-PCR法检测甲状腺组织中mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠甲状腺系数、甲状腺细胞核个数升高(P<0.01),滤泡腔面积降低(P<0.01);与模型组比较,海藻玉壶汤组及各拆方组大鼠甲状腺系数、甲状腺细胞核个数降低(P<0.01),滤泡腔面积升高(P<0.01),其中海藻玉壶汤组的恢复作用最明显。与空白组比较,模型组mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达均升高(P<0.01);与模型组比较,海藻玉壶汤组及拆方各组均可使mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论海藻玉壶汤及拆方对甲状腺肿大模型大鼠的甲状腺系数及甲状腺组织病理形态有纠正作用,其作用机制可能与其抑制mTOR-p70S6K/4E-BP1信号通路进而抑制细胞增殖有关。

P70s6k和4EBP1在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:研究PI3K-Akt-mTOR信号传导通路中P70s6k和4EBP1在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及与膀胱癌发生发展的关系。方法:用免疫组织化学法和Western blot法检测P70s6k和4EBP1在正常膀胱组织和肿瘤中的表达情况。结果:与正常组织比较肿瘤中的P70s6k和4EBP1蛋白水平表达显著增加(P<0.05),表达量在浸润性癌中高于非浸润性癌且随膀胱癌病理级别增高而增高。二者表达有显著相关性(r=0.97,P<0.05)。结论:P70s6k和4EBP1在膀胱癌中呈高表达,并与肿瘤临床分期,病理分级密切相关,可能在肿瘤发生发展过程中起重要作用。

绞股蓝总皂苷对高糖环境下小鼠肾脏足细胞自噬及mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路的影响

目的:探索绞股蓝总皂苷(Gps)对高糖环境下肾脏足细胞自噬活性的影响。方法:将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5随机分为低糖组、高糖组、绞股蓝组、雷帕霉素组,干预48h后,免疫荧光法检测足细胞LC3表达情况,Western Blot法检测Synaptopodin、Beclin-1、LC3、SQSTM1/P62、mTOR、4EBP1及P70S6K蛋白表达情况。结果:与高糖组比较,绞股蓝组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,SQSTM1/P62蛋白表达显著下降,雷帕霉素组LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达显著增高,两组mTOR、4EBP1、P70S6K蛋白表达均减显著下降(P<0.01)。结论:Gps可促进自噬从而保护高糖环境下的MPC-5,而该作用可能与其抑制了mTOR/4EBP1/P70S6K信号通路有关。

RBM5-AS1在甲状腺癌细胞中表达变化及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的观察RNA结合基序蛋白5-反义链1(RBM5-AS1)在甲状腺癌(TC)细胞中的表达变化,及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法采用qRT-PCR法检测TC细胞C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的RBM5-AS1,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。将TC细胞分别转染NC siRNA(对照组)和RBM5-AS1 siRNA(实验组),通过CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞术测算细胞凋亡率,Transwell实验分别检测细胞侵袭、迁移能力,Western blotting法检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)信号通路蛋白表达水平。结果C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C细胞中RBM5-AS1相对表达量均高于Nthy-ori 3-1细胞,其中8305C细胞RBM5-AS1表达量最高(P均<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱,细胞凋亡率升高,侵袭及迁移穿膜细胞数减少,p-mTOR、p70S6K、4E-BP1蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论TC细胞中RBM5-AS1表达上调;干扰RBM5-AS1表达抑制了TC细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进其凋亡,其机制可能与调控mTOR/p70S6K/4E-BP1信号通路有关。

雷帕霉素靶蛋白及其下游因子在大鼠脊髓背角和背根神经节的表达与分布

目的观察雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其下游因子真核细胞起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)及其磷酸化形式在脊髓背角和背根神经节(DRG)的表达和分布。方法以逆转录-聚合酶链反应、Western blot确定mTOR、4E-BP1和p70S6K及其磷酸化形式在DRG和背角的表达。免疫组化染色确定mTOR、4E-BP1和p70S6K及其磷酸化形式在DRG和背角的定位,并定量分析。结果 mTOR、4EBP1和p70S6K分布在整个脊髓背角和DRG,特别是在脊髓背角的外层,而磷酸化形式在脊髓背角和DRG表达都非常低,没有检测到。在脊髓背角,mTOR、p70S6K和4E-BP1表达于神经元细胞,在星形胶质细胞和小胶质细胞没有表达。在DRG,mTOR和p70S6K表达于神经元细胞,(26.1±3.2)%呈mTOR表达阳性,(19.1±1.9)%呈p70S6K表达阳性;4E-BP1则表达于卫星胶质细胞。结论 mTOR、p70S6K和4E-BP1在脊髓背角和DRG表达丰富,而它们的磷酸化活化形式表达非常低。