基于PI3K/AKT/mTORC信号通路探讨骨痹通消颗粒对人骨髓间充质干细胞成脂分化负性调节的机制研究

目的:观察骨痹通消颗粒对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成脂分化的影响,探讨其防治激素性股骨头坏死(SANFH)的作用机制。方法:收集接受髋关节置换术的SANFH患者的骨髓组织,采用全骨髓贴壁法分离培养原代细胞并通过流式细胞术鉴定其表型。CCK-8法检测骨痹通消颗粒含药血清对hBMSCs增殖的影响,油红O、茜素红染色、RT-qPCR和Western blot检测骨痹通消颗粒含药血清作用后,hBMSCs骨脂分化、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)、人骨形态发生蛋白(BMP2)、生长转化因子β1(TGF-β1)mRNA和通路蛋白的表达情况。结果:不同体积分数的骨痹通消颗粒含药血清均可促进hBMSCs增殖,且存在着一定的量效和时效关系,尤以5%组作用48 h时促进细胞增殖最为明显;与模型组比,5%含药血清作用后可明显减少胞质中的脂滴着色进而增加钙盐沉积处的橙红色矿化结节(P<0.05),同时下调细胞中PPARγ、SREBP mRNA和上调BMP2、TGF-β1 mRNA表达水平(P<0.05);此外,骨痹通消颗粒含药血清还可明显降低细胞中PI3K、p-AKT和mTORC等蛋白表达水平,上调Maf1蛋白表达(P<0.05)。结论:骨痹通消颗粒可以负性调节hBMSCs的成脂分化,促进成骨分化,进而发挥治疗SANFH的作用,其机制可能与调控PI3K/AKT/mTORC信号通路有关。

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化及PI3K/Akt/mTORC1信号通路的影响

目的观察丹红注射液对动脉粥样硬化(AS)小鼠自噬基因Atg13启动子区甲基化及自噬信号通路PI3K/Akt/mTORC1的影响,探讨其可能的作用机制。方法40只8周龄雄性ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、阳性对照组和丹红注射液低、高剂量组,每组10只,各给药组给予相应药物干预。6周后RT-PCR检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13、Atg3和Atg4a的mRNA表达;Westernblot检测AS小鼠主动脉Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、PI3K、Akt、p-Akt、mTORC1和p-mTORC1的蛋白表达;采用亚硫酸氢盐测序法检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平。结果与模型组比较,丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Beclin1蛋白表达明显升高,丹红注射液低剂量组小鼠主动脉LC3Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P<0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Atg13、Atg3和Atg4a mRNA表达显著升高(P<0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平明显降低(P<0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.01),丹红注射液高剂量组小鼠主动脉p-mTORC1蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论丹红注射液防治AS的机制可能与降低模型小鼠主动脉Atg13启动子区甲基化水平、抑制PI3K/Akt/mTORC1信号通路和促进细胞自噬有关。

二氢槲皮素对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用及mTORC2/Akt信号通路的影响

目的:探讨二氢槲皮素(DHQ)对糖尿病肾病(DN)大鼠的肾脏保护作用及对mTORC2/Akt信号通路的影响。方法:用高脂高糖饲料饲养联合腹腔给予STZ方法制备DN模型。DHQ低、中、高剂量组大鼠灌胃给予DHQ,剂量依次为50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg,厄贝沙坦组灌胃给予厄贝沙坦17.5 mg/kg,对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水,持续12周,检测24 h尿蛋白,计算肾指数,对大鼠肾脏进行病理学检测并进行炎症和纤维化评分,对肾功能检测,同时检测mTORC2/Akt信号通路相关蛋白表达。结果:对照组大鼠肾小球结构正常清晰,未见炎症细胞及系膜增加;模型组大鼠见系膜增加、节段性肾小球硬化、炎性细胞浸润和间质纤维化;DHQ和厄贝沙坦干预可减轻肾小球损伤、炎性细胞浸润及间质纤维化。与对照组比较,其余各组大鼠炎症和纤维化评分、肾指数、尿蛋白、BUN、Scr、mTORC2、p-Akt和Rictor蛋白表达水平增加(P <0.05);与模型组相比,各DHQ剂量组和厄贝沙坦组大鼠炎症和纤维化评分、肾指数、尿蛋白、BUN、Scr、mTORC2、p-Akt和Rictor蛋白表达水平降低(P <0.05),且随着DHQ剂量的增加,DHQ各剂量组大鼠炎症和纤维化评分、肾指数、尿蛋白、BUN、Scr、mTORC2、p-Akt和Rictor蛋白表达水平逐渐降低,且呈剂量依赖性(P <0.05);厄贝沙坦组和DHQ高剂量组作用相似(P> 0.05)。结论:DHQ可能通过调控mTORC2/Akt信号通路,有助于减轻DN大鼠模型的症状,发挥DN治疗作用。

基于mTORC1/4EBP1信号通路探讨银盏心脉滴丸对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞线粒体功能的影响

目的观察银盏心脉滴丸对大鼠心肌细胞(H9C2)mTORC1/4EBP1信号通路的影响以探讨其对线粒体功能的机制。方法制备银盏心脉滴丸含药血清。将细胞分为对照组、模型组(缺氧/复氧)、空白血清组及银盏心脉滴丸含药血清组。制备缺氧/复氧细胞损伤模型,利用激光共聚焦检测线粒体膜电位(ΔΨm),利用流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species, ROS),运用Western Blot技术检测细胞雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、真核翻译起始因子4E结合蛋白(eukaryotic translation initiation factor 4E-binding proteins,4E-BP)、mTOR复合体蛋白(regulatory-associated protein of mammalian target of rapamycin,Raptor)蛋白表达,运用q-PCR方法检测mTORC1、4EBP1、Raptor的mRNA含量。结果与对照组相比,模型组细胞内绿色荧光增强,ΔΨm显著高于对照组(P<0.05);而与模型组相比,银盏心脉滴丸组红色荧光增强(P<0.05),说明银盏心脉保护ΔΨm稳定,保护线粒体膜结构;与对照组相比,模型组的ROS合成较对照组升高(P<0.05);而与模型组相比,银盏心脉滴丸组细胞内ROS产生明显降低(P<0.05);与对照组相比,模型组mTOR、Raptor基因mRNA水平下调(P<0.05),4ebp1基因mRNA水平上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,银盏心脉滴丸组mTOR、Raptor基因mRNA水平上调(P<0.05),4ebp1基因mRNA水平下调(P<0.05)。结论银盏心脉滴丸改善缺氧复氧损伤的机制可能是通过激活mTORC1/4EBP1信号通路,从而抑制线粒体膜电位,改善活性氧,保护线粒体功能。

mTORC2信号通路与多发性骨髓瘤的研究进展

多发性骨髓瘤目前仍是一种无法治愈的造血系统恶性肿瘤。近年来随着蛋白组学等生物技术的发展,对多发性骨髓瘤的发病机制有了更深入的认识,从而提出更侧重于微环境和细胞因子网络的靶向治疗。最近肿瘤生物学研究表明,雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)的活性对一些肿瘤细胞的转移和活力起着至关重要的作用,却对正常细胞无影响,且关于mTORC2及其功能调控仍存在许多悬而未决的问题。本文就mTORC2信号通路和多发性骨髓瘤的靶向治疗前景作一综述。

白头翁汤对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织mTORC1-STAT3-COX-2信号通路的影响

目的探讨白头翁汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能作用机制。方法40只C57BL/6雌鼠随机分为空白组、模型组、白头翁汤给药组及雷帕霉素给药组。采用3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建小鼠UC模型。造模同时进行给药处理。白头翁汤组每日给予6.83 g·kg^(-1)白头翁汤灌胃,雷帕霉素组每日用2 mg·kg^(-1)雷帕霉素药液进行腹腔注射,空白组和模型组每日给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。记录小鼠每日体质量变化及粪便性状,7 d后处死小鼠。测量结肠长度并观察结肠组织病理学变化。采用流式细胞术检测小鼠血清炎症因子含量,采用免疫印迹法检测结肠组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转录激活因子3(STAT3)、核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)及其磷酸化蛋白表达,免疫组化法检测结肠组织中磷酸化P70S6K的表达,qPCR检测结肠组织环氧化酶(COX-2)mRNA表达水平。结果与空白组相比,模型组小鼠体质量减轻,结肠长度缩短、疾病活动指数(DAI)和组织病理学评分升高(P<0.001),血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量升高(P<0.001),结肠组织中COX-2 mRNA表达水平、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K、p-STAT3/STAT3均升高(P<0.01,P<0.001)。与模型组相比,白头翁汤组和雷帕霉素组小鼠上述表型症状均得到改善,血清中IL-6和TNF-α含量下降(P<0.01,P<0.001),结肠组织中p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K、p-STAT3/STAT3和COX-2 mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论白头翁汤能有效预防DSS诱导的小鼠结肠炎症,其作用机制可能与抑制mTORC1-STAT3-COX-2信号通路有关。

mTORC1信号通路在小鼠化疗胃黏膜损伤中的作用

目的探讨mTORC1信号通路在使用化疗药物白消安(BU)+环磷酰胺(CY)后小鼠胃黏膜损伤中的作用。方法将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,即正常对照组,BU+CY组,Rapamycin组和BU+CY+Rapamycin组,每组15只。各组分别于造模后2、6和14d处死小鼠后取胃体进行常规HE染色观察病理变化,采用免疫组织化学方法检测小鼠胃黏膜的BrdU阳性细胞和PS6阳性蛋白的表达,用Tunnel方法检测细胞凋亡,用图像分析仪进行体视学测量和图像分析。结果 BU+CY组小鼠胃黏膜损伤明显,并有大量炎症细胞浸润;BU+CY+Rapamycin组小鼠上述损伤明显减轻。与正常对照组比较,BU+CY组胃黏膜BrdU阳性细胞数密度显著降低(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则基本恢复至正常值;BU+CY组胃黏膜凋亡细胞显著增加(P<0.01),BU+CY+Rapamycin组则明显恢复;BU+CY组PS6免疫阳性蛋白的积分光密度明显增高(P<0.05),提示mTORC1通路被激活,BU+CY+Rapamycin组则显著减少,mTORC1通路受到强烈抑制;Rapamycin组可出现BrdU阳性细胞数密度降低、凋亡细胞增加。结论化疗药物BU+CY可激活mTORC1信号通路、抑制胃黏膜上皮干细胞增殖和促进胃黏膜上皮细胞凋亡引起胃黏膜损伤,且这种损伤可被Rapamycin逆转。

白头翁汤治疗溃疡性结肠炎的信号通路机制分析

溃疡性结肠炎(UC)是一种反复发作的炎症性肠病。目前研究认为,其发病与肠道上皮屏障缺陷、肠道菌群失调、免疫应答失调及遗传等因素密切相关。白头翁汤治疗UC具有一定的疗效。白头翁汤及其加减方可通过多种信号通路减少促炎细胞因子的表达,增加机体抗炎因子,促进肠上皮细胞增殖以加速肠上皮修复,保护肠道黏液屏障,减轻肠道炎症反应,从而减少肠上皮细胞异常增殖,避免“炎-癌”的发生。

大花旋覆花素对体外Hep G2细胞增殖、凋亡和mTORC1信号通路的影响

目的研究大花旋覆花素肿瘤细胞增殖、凋亡和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)信号通路的影响。方法取Hep G2细胞,分组给予0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理48 h,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western bloting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase3及mTORC1信号通路蛋白mTORC1和70S6K表达。结果5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L大花旋覆花素处理组细胞增殖率分别为(89.56±8.11)%、(66.40±6.61)%和(41.78±5.79)%,均显著低于0μmol/L大花旋覆花素对照组【(100.00±10.01)%,P<0.05】;细胞凋亡率分别为(14.75±1.34)%、(19.11±1.87)%和(27.45±1.99)%,均显著高于对照组【(7.01±0.89)%,P<0.05】;促凋亡蛋白Bax和Caspase3蛋白表达分别为(1.36±0.15)和(1.63±0.32)、(3.57±0.33)和(3.92±0.47)、(7.33±0.52)和(6.94±0.53),显著高于对照组【分别为(0.98±0.11)和(0.87±0.15),P<0.05】,而抑凋亡蛋白Bcl2表达分别为(4.71±0.52)、(2.36±0.36)和(0.89±0.14),显著低于对照组【(8.05±0.65),P<0.05】;mTORC1和70S6K蛋白表达分别为(0.82±0.08)和(0.79±0.08)、(0.63±0.06)和(0.58±0.05)、(0.51±0.05)和(0.43±0.04),显著低于对照组【(0.96±0.11)和(0.99±0.09),P<0.05】。结论大花旋覆花素可通过下调mTORC1信号通路抑制肝癌细胞体外增殖,诱导其凋亡,发挥显著的抗肿瘤效应。

塞来昔布通过c-Myc及Akt/mTORC1信号通路延缓c-Myc诱导小鼠肝细胞癌的发展

目的探讨塞来昔布对c-Myc诱导小鼠肝细胞癌发展的作用及其机制。方法选取FVB/N小鼠,尾静脉高压注射c-Myc建立肝细胞癌模型,将小鼠分为4组(每组7只):正常组、模型组、塞来昔布低、高剂量组(150、300 mg·kg^-1)。给药干预6周后采集样本,测定小鼠体重和肝重,比较各组小鼠肝脏和肝脏指数差异;HE检测小鼠肝脏组织病变情况;IHC检测小鼠肝脏组织中Ki67蛋白表达情况;West-ern blot检测小鼠肝组织中c-Myc、p-Akt T308、p-Akt S473、p-4EBP1蛋白的表达水平。结果与正常组相比,模型组肝脏重量和肝重指数明显增大;肝脏组织多核、固缩现象明显;细胞核大量Ki67阳性染色;c-Myc和p-Akt T308、p-Akt S473、p-4EBP1蛋白表达明显增加。不同剂量塞来昔布干预后能明显抑制和改善上述指标的变化。结论塞来昔布可以通过调控c-Myc及Akt/mTORC1信号通路延缓c-Myc诱导小鼠肝细胞癌的发展。

黄芪甲苷通过mTORC1通路调控IgA肾病大鼠脾淋巴细胞分化

目的:探讨黄芪甲苷(AS)通过mTORC1信号通路调控IgA肾病(IgAN)大鼠脾淋巴细胞分化的影响及机制。方法:28只SD大鼠随机分为对照组、IgAN组、雷帕霉素(RAPA)组和AS组。观测大鼠肾IgA沉积情况、脾脏病理变化及脾CD4+T细胞数密度、CD8+T细胞数密度和IL-10、p-mTOR和p-p70S6k表达。结果:与对照组相比,IgAN组大鼠肾小球有明显IgA沉积,脾脏白髓内淋巴细胞增生明显;脾脏CD4+细胞数增加而CD8+T细胞数减少(P<0.01),IL-10表达下降(P<0.01),pmTOR和p-p70S6k表达升高(P<0.01)。与IgAN组相比,RAPA组和AS组大鼠肾小球IgA沉积减少,脾脏白髓内淋巴细胞增生减轻,脾CD4+T细胞数减少而CD8+T细胞数增加(P<0.05),IL-10表达升高(P<0.01),p-mTOR和p-p70S6k表达下降(P<0.01)。结论:AS可减轻IgAN大鼠肾小球IgA沉积,可能与抑制mTORC1信号通路,调节脾淋巴细胞分化有关。

基于mTOR1信号通路研究益气凉血生肌方对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨益气凉血生肌方促进损伤血管内皮细胞修复可能的机制。方法取50只SD大鼠制备空白血清、益气凉血生肌方含药血清、阿托伐他汀含药血清、益气凉血生肌方+阿托伐他汀含药血清,对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行缺氧/复氧(H/R)造模。实验分为对照组(HUVECs加空白血清培养)、模型组(H/R损伤HUVECs加空白血清培养)、生肌方组(H/R损伤HUVECs加益气凉血生肌方含药血清培养)、阿托伐他汀组(H/R损伤HUVECs加阿托伐他汀含药血清培养)、生肌方+阿托伐他汀组(H/R损伤HUVECs加益气凉血生肌方+阿托伐他汀含药血清培养)。采用CCK-8法检测细胞增殖率,荧光探针法检测活性氧自由基(ROS)活性,比色法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量,质谱法检测三磷酸腺苷(ATP)、一磷酸腺苷(AMP)含量(计算ATP/AMP),Western blot法检测AMP依赖性蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、4E结合蛋白1(4E-BP1)蛋白及磷酸化水平。结果各含药血清组H/R损伤细胞增殖活性均明显高于模型组(P均<0.05),且生肌方+阿托伐他汀组明显高于生肌方组和阿托伐他汀组(P均<0.05)。各含药血清组ROS活性、MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05),且生肌方+阿托伐他汀组ROS活性明显低于生肌方组(P<0.05);各含药血清组SOD含量和生肌方组、生肌方+阿托伐他汀组ATP/AMP比值均明显高于模型组(P均<0.05),且生肌方+阿托伐他汀组ATP/AMP比值明显高于阿托伐他汀组(P<0.05)。生肌方组、生肌方+阿托伐他汀组p-AMPK/AMPK明显低于模型组(P均<0.05),且生肌方+阿托伐他汀组明显低于阿托伐他汀组(P<0.05);各含药血清组p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K、p-4E-BP1/4E-BP1均明显高于模型组(P均<0.05),生肌方+阿托伐他汀组p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K均明显高于阿托伐他汀组(P均<0.05)。结论益气凉血生肌方可促进H/R损伤血管内皮细胞修复,其作用可能是通过改善H/R损伤内皮细胞能量代谢、减轻氧化应激、抑制AMPK激活,调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路来实现的。

磷酸化与泛素化修饰对雷帕霉素靶蛋白复合物1(TORC1)信号通路的调控

TORC1是一个在真核生物中高度保守的激酶复合物,能通过感应营养物质、生长因子、能量水平等信号调节细胞代谢水平和生长。TORC1信号通路的失调与代谢紊乱、神经病变、癌症和衰老密切相关。本文比较了酵母细胞及哺乳动物细胞中TORC1的结构与功能,并着重综述了磷酸化和泛素化修饰在TORC1信号通路中的作用。由于磷酸化和泛素化在传导外界信号至TORC1以及调节TORC1下游通路中均发挥重要作用,因此深入研究磷酸化和泛素化对TORC1信号通路的影响,将为药物靶点的发现提供新思路。

基于AMPK/mTORC1自噬通路研究二氢杨梅树皮素对损伤A549细胞的保护作用

为研究二氢杨梅树皮素(APS)对脂多糖(LPS)诱导A549细胞损伤模型的保护作用及其对AMPK/mTORC1自噬通路的影响,随机分为正常组、模型组、APS高中低浓度组(80、40、20μg/mL)。除正常组外,其余各组用30μg/mL LPS诱导8 h构建A549细胞损伤模型,APS干预24 h后,MTT法检测A549细胞存活率、荧光法检测上清液LDH漏出量、Elisa法检测上清液TNF-α含量、MDC法细胞检测自噬体形成情况、自噬双标mRFP-GFP-LC3检测细胞自噬流情况,Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。AMPK抑制剂(CC)干预验证试验,随机分为正常组、模型组、LPS+APS组、LPS+CC组、LPS+APS+CC组,APS与CC共培养时间24 h后,采用Western blot法检测p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR以及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62蛋白表达水平。结果表明,APS使LPS损伤的A549细胞存活率明显升高,LDH漏出量、TNF-α含量明显减少,细胞内自噬体明显增加,自噬溶酶体明显增加,P62蛋白、p-mTOR/mTOR表达明显下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达明显上调;用CC抑制AMPK/mTORC1自噬通路后,APS能够明显上调P62蛋白、p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达,显著下调p-mTOR/mTOR蛋白表达。APS通过激活AMPK/mTORC1自噬通路促进自噬,增强自噬流,发挥对LPS诱导A549细胞损伤的保护作用。

SLE患者CD24-CD20hiCD11c+B细胞与mTORC1通路的相关性分析

目的 分析特异B细胞与mTORC1信号通路中PI3K、AKt、mTOR mRNA表达量的相关性。方法 收集2020年1月-2021年6月在厦门二院门诊或住院SLE患者40例及健康人40例的外周血、临床资料,用流式检测SLE患者特异表型的B细胞,对该B细胞的表达比例和临床活动指标进行相关性分析;用q PCR法测mTORC1信号通路中PI3K、A Kt、mTOR基因的表达水平,并分析其与该特异B细胞的相关性。结果 初发未治SLE患者外周血中存在高比例的CD24-CD20hiCD11c+特异性B细胞;特异性B细胞的表达比例与抗dsDNA定量、SLEDAI积分、24 h尿蛋白定量正相关(P <0.05);特异性B细胞的表达比例与补体C3、补体C4负相关(P <0.05);SLE组PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达显著高于健康(P <0.05);特异性B细胞的表达比例与PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达量呈正相关。结论 SLE患者外周血中CD24-CD20hiCD11c+特异性B细胞的比例显著增高,该特异性B细胞的表达比例可能与抗dsDNA定量、SLEDAI积分、24小时尿蛋白定量、补体C3、C4及mTORC1信号通路中PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达量具有一定相关性。

基于PI3K/AKT/mTORC1信号通路探讨三七对阿霉素肾纤维化大鼠自噬水平的影响

目的基于PI3K/AKT/mTORC1信号通路,通过实验观察三七对阿霉素肾纤维化大鼠自噬水平的影响。方法选用健康雄性清洁级SD(Sprasue-Dawley)大鼠60只,随机分成正常组、模型组、三七低剂量治疗组、三七中剂量治疗组、三七高剂量治疗组和贝那普利组共6组,每组10只。除正常组大鼠以外,各组大鼠均采用阿霉素诱导建立肾纤维化大鼠模型。造模成功后,对正常组、模型组均予以生理盐水[10mL/(kg·d)]灌胃;三七低、中、高剂量治疗组分别予以三七颗粒0.45g/(kg·d)、0.9g/(kg·d)、1.8g/(kg·d)水溶液灌胃,贝那普利组予以盐酸贝那普利5mg/(kg·d)药液灌胃,每天一次,共干预8周。分别采用HE、Masson染色方法观察肾脏组织病理情况;采用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)法检测肾组织中PI3K、AKT、mTORC1、P62、Beclin1、LC3的蛋白表达水平。结果(1)与正常组相比,模型组肾组织可见空泡样、纤维样改变,肾小球萎缩,肾小管囊性扩张,大量炎性细胞的浸润,而三七各个剂量组与贝那普利组肾组织的上述病理改变均有不同程度的改善,且三七中、高剂量组和贝那普利组肾组织病变改善最为明显。(2)与正常组相比,模型组的PI3K、AKT、mTORC1、P62蛋白表达量明显增加(P<0.05);与模型组相比较,三七各个剂量组与贝那普利组PI3K、AKT、mTORC1、P62的表达量均有不同程度减少,其中,三七中、高剂量组与贝那普利组PI3K、AKT、mTORC1、P62的表达量明显减少(P<0.05)。(3)与正常组相比,模型组的Beclin1、LC3蛋白表达量明显减少(P<0.05);与模型组相比较,三七各个剂量组Beclin1、LC3的表达量随着三七剂量的增加均有不同程度增加,其中,三七中、高剂量组Beclin1、LC3的表达量和贝那普利组LC3的表达量明显增加(P<0.05)。结论三七可能通过抑制PI3K/AKT/mTORC1信号通路的活化,进而上调肾组织自噬水平,从而发挥抗肾纤维化的作用。

不同治法方药对抑郁模型大鼠海马组织PI3K/Akt/mTORC1信号通路的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTORC1信号通路,探讨不同治法方药抗抑郁效应的作用机制。方法:60只大鼠随机分为空白组、模型组、右归丸组、四逆散组、四君子组,建立慢性不可预知应激(CUS)抑郁模型,灌胃42d后检测行为学、海马神经元尼氏染色及通路相关蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水偏好率显著降低、旷场水平运动总路程显著减少(P<0.01)、海马神经元损伤、尼氏小体减少,右归丸组、四逆散组、四君子组对其均有改善作用;模型组PI3K、Akt、mTOR磷酸化蛋白与总蛋白比值以及Raptor蛋白表达较空白组显著下调(P<0.01,P<0.05),均可被四逆散显著上调(P<0.01),而右归丸组、四君子组仅有mTOR、PI3K蛋白表达水平上调(P<0.01)。结论:四逆散可能通过激活PI3K/Akt/m TORC1信号通路来保护海马神经元并发挥抗抑郁作用。

直肠癌根治术后结肠造口感染患者肠道微环境及CD36/mTORC1信号通路表达

目的 探究直肠癌根治术后结肠造口感染与患者肠道微环境及外周血分化抗原36(CD36)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路蛋白表达的关系.方法 选取2016年6月-2021年6月武汉理工大学医院收治的284例直肠癌根治术后结肠造口患者为研究对象,根据术后是否并发造口感染分为感染组(n=82)、对照组(n=202),采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者肠道菌群及CD36/mTORC1 mRNA表达.采用多因素Logistic回归分析直肠癌根治术后造口感染的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线探究CD36/mTORC1 mRNA表达对术后造口感染预测价值.结果 感染组大肠埃希菌、肠球菌数量高于对照组(P<0.05),双歧杆菌、乳酸杆菌数量低于对照组(P<0.05);两组菌群失调分度差异有统计学意义(P<0.05),且感染组Ⅲ度失调比例高于对照组(P<0.05);感染组CD36 mRNA、mTORC1 mRNA水平均高于对照组(P<0.05);菌群失调Ⅲ度、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA是直肠癌根治术后结肠造口感染的影响因素(P<0.05);CD36 mRNA、mTORC1 mRNA预测术后造口感染的ROC曲线下面积分别为0.887、0.958.结论 直肠癌根治术后结肠造口患者存在肠道菌群失衡,且可能通过激活外周血CD36/mTORC1信号通路增加患者造口感染风险.

Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用

mTOR信号通路是细胞内重要的生命活动枢纽,它通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖来调控细胞生命活动。Rheb可以激活mTOR信号通路,进而参与多种肿瘤的发生发展。本研究以髓系白血病细胞株为研究对象,探讨Rheb在HL-60和K562中的作用及相关机制。本研究利用逆转录病毒技术使髓系白血病细胞株HL-60和K562过表达Rheb;利用Western blot和Real-Time PCR分别检测HL-60和K562细胞中Rheb的蛋白表达水平及mRNA表达水平;利用CCK-8法检测细胞活力;利用Annexin V-PE和7-AAD双染检测细胞凋亡。结果表明:成功构建了Rheb过表达的HL-60和K562细胞株,并发现Rheb过表达可以促进细胞生长;进一步研究发现,Rheb过表达加快细胞进入G2/M期(P<0.01),但不影响细胞凋亡。结论:Rheb通过加快细胞周期进程促进HL-60和K562细胞增殖。

力量和耐力组合训练生物分子适应机制及现实应用

力量训练和耐力训练对人体表型的影响不同。长期力量训练能促进肌肉激活和肥大,提高肌肉最大收缩能力,耐力训练则增加线粒体的密度和肌纤维氧化能力,从而整体提高最大摄氧量。但是,在同时提高外周肌肉肥大和肌肉有氧氧化功率时(力量和耐力组合训练),可能会抑制肌肉肥大。动物实验表明,这些潜在分子干扰机制涉及与力量训练相关的雷帕霉素复合物1(mTORC1)信号通路以及耐力训练相关的5’-AMP依赖的蛋白激酶(5’-AMPK)和Ca2+/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路。由于力量和耐力组合训练的变量较多,目前对于人体实验是否存在信号途径间的干扰现象还未得到证实,但从组合训练实践看,高水平运动员在训练后期更倾向于避免同时发展外周的局部肌肉肥大和有氧氧化能力。