mTORC1抑制剂通过影响肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性抑制KRAS基因突变型结肠癌的进展

目的研究mTORC1抑制剂通过肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性影响KRAS基因突变型结肠癌的进展。方法建立KRAS突变型结肠癌小鼠模型,将小鼠随机分为4组:对照组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;流式细胞术检测肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴T细胞的数量;ELISA法检测小鼠血清中IL-2、IL-10、IFN-γ、TGF-β的表达情况;另外构建KRAS突变型结肠癌细胞系HT29,将细胞分为4组:HT-29组,KRAS突变组,mTORC1抑制剂组和KRAS突变+mTORC1抑制剂组;CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖情况;流式细胞术检测其凋亡情况;Western blot法检测p53、Bcl-2、Bax、cleaved caspase3蛋白的表达水平。结果与KRAS突变组结肠癌小鼠相比较,KRAS突变+mTORC1抑制剂组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞数量增加(P<0.01,P<0.001),Foxp3^(+)Treg细胞的数量减少(P<0.0001),小鼠血清中IL-2、IFN-γ的水平升高(P<0.0001,P<0.001),IL-10、TGF-β的水平降低(均P<0.001);另外,与KRAS突变型HT29组细胞相比,KRAS突变+mTORC1抑制剂组细胞的增殖能力减弱(P<0.05),并且凋亡情况显著提高(P<0.0001),并且Bcl-2蛋白水平降低(P<0.001),Bax、cleaved caspase3、p53蛋白水平显著升高(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论mTORC1抑制剂通过影响肿瘤浸润淋巴细胞的分布情况以及通过p53/caspase相关通路抑制KRAS基因突变型结肠癌的进展。

mTORC2/mTORC1抑制剂OSI-027诱导骨髓增生异常综合征转化急性髓系白血病细胞发生自噬性死亡

目的:研究mTORC2/mTORC1抑制剂OSI-027对骨髓增生异常综合征转化急性髓系白血病(myelodysplastic syndrome/acute myeloid leukemia,MDS/AML)细胞SKM-1增殖的影响,并从凋亡和自噬两方面研究其作用机制。方法:采用不同浓度的雷帕霉素和OSI-027分别处理SKM-1细胞后对细胞活性、周期及凋亡的影响;透射电镜观察细胞内自噬泡及自噬小体;吖啶橙染色法检测酸性自噬泡数量;RT-qPCR和Western-blot分别检测自噬相关基因Beclin-1和LC3B的mRNA和蛋白水平的表达量。结果:OSI-027比雷帕霉素更明显地抑制了SKM-1细胞的增殖;并能将细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期;但OSI-027不能有效地导致细胞凋亡,透射电镜观察到胞质内出现大量的自噬泡和自噬小体。阻断自噬后并不能提高细胞凋亡比例,但可部分解救OSI-027造成的抑制增殖作用;OSI-027干预后自噬相关基因Beclin-1和LC3B在mRNA和蛋白水平均显著上调。结论:mTORC2/mTORC1抑制剂OSI-027能有效地导致SKM-1细胞发生自噬性死亡从而抑制其增殖。

第二代mTOR抑制剂的抗肿瘤研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是PI3K/Akt/mTOR等多种信号通路的下游分子,在细胞增殖、分化、转移和存活中发挥重要作用,已成为癌症治疗的一个重要靶标。传统的mTOR抑制剂主要是雷帕霉素及其衍生物,能特异性抑制mTORC1,但在部分癌症临床治疗中未达到预期疗效,且易产生耐药性。第二代mTOR抑制剂即双重或多重mTOR抑制剂能与mTOR的催化位点竞争ATP,高度选择性地抑制mTORC1和mTORC2,比单靶点mTOR抑制剂具有更大的治疗优势。此外,某些天然来源产物也具有对mTOR的抑制作用,且毒性、副作用更小。综述近几年有关mTOR及其抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展。