基于mTORC1/USP20/HMGCR通路探讨消木丹颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病作用机制

目的观察消木丹颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠胆固醇合成的影响,基于mTORC1/USP20/HMGCR通路探讨其治疗NAFLD作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱)和中药低、中、高剂量组(消木丹颗粒)。空白组予普通饲料喂养,其余组均予高脂饲料喂养12周建立NAFLD大鼠模型。造模成功后,各给药组予相应药物灌胃,空白组和模型组予无菌蒸馏水灌胃,连续4周。记录大鼠体质量、肝质量,计算肝指数,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色、油红O染色观察肝组织形态,实时荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝组织核糖体S6激酶(S6K)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA及p-S6K、S6K、USP20、HMGCR蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著升高(P<0.01,P<0.05),肝叶体积增大,边缘变钝;血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.01);大部分肝细胞脂肪变性、有明显空泡和炎性浸润,脂滴增多,肝组织USP20、HMGCR mRNA表达显著升高(P<0.01),p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组和西药组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著降低(P<0.01,P<0.05),肝脏外观改善;血清ALT、AST、TC、LDL-C含量降低,HDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05);肝细胞脂肪变性和气球样变减轻,脂滴沉积减少,肝组织USP20、HMGCRmRNA及p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论消木丹颗粒可能通过mTORC1/USP20/HMGCR通路调节胆固醇合成,进而发挥治疗NAFLD作用。