Maf-b基因在初治白血病患者的表达及临床意义研究

本研究旨在检测白血病患者maf-b mRNA的表达水平并评估其临床意义。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者maf-b mRNA的相对表达水平,分析其在不同类型白血病中的表达差异及其与实验室指标、化疗反应的关系。结果表明,初治白血病患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01);分组分析的结果显示:急性髓系白血病(AML)患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01),且maf-b mRNA的表达水平与外周血白细胞计数、CD34表达呈正相关(p<0.01)。AML(除外急性早幼粒细胞白血病)患者中,maf-b mRNA的表达水平与AML患者的化疗反应无明显相关(p>0.01)。急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓系白血病(CML)患者maf-b mRNA的表达亦低于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:AML患者maf-b基因表达降低,而maf-b基因的异常表达可能与AML细胞的异常增殖有关,并可能成为AML新的预后因子。

miR-130a-3p在HCC致病机制中的作用及作为预后标志物的评估

目的分析miR-130a-3p是否参与肝细胞癌(hepatocellalar carcinoma,HCC)疾病演进并抑制转移,评估其作为预后标志物的可能。方法基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中miR-130a-3p的表达量和HCC患者生存信息,综合分析miR-130a-3p的表达分布以及对HCC诊断和预后价值的评估;通过抑制miR-130a-3p的表达,进而检测HepG2细胞增殖活力、细胞的迁移和侵袭能力;利用LncBase 3.0预测miR-130a-3p的靶基因,并通过Western blot检测V-maf肌骨神经纤维肉瘤肿瘤基因同源物B(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,MAFB)蛋白质表达水平,明确miR-130a-3p对MAFB的调控作用。结果miR-130a-3p在HCC组织中显著低表达(t=-13.556,P<0.001),且表达量与患者的总生存时间密切相关(Log-rank=4.675,HR=0.681,P=0.031),此外,其表达量还可以有效区分HCC患者和健康对照(AUC=0.891);抑制miR-130a-3p的表达后,HepG2细胞的增殖(t=24.950,P<0.001)、迁移(t=7.503,P=0.012)及侵袭(t=6.350,P=0.011)能力显著增强;MAFB是miR-130a-3p的靶基因之一,并且抑制miR-130a-3p后,其表达量上调(t=130,P<0.001)。结论miR-130a-3p可以作为HCC的预后评估标志物并抑制其转移。

多中心腕跗骨骨质溶解综合征一例

多中心腕跗骨骨质溶解综合征(multicentric carpotarsal osteolysis syndrome,MCTO)是一种罕见的常染色体显性遗传病。本文报道1例1岁11月龄患儿肘膝关节屈曲进行性加重,并伴有智力、运动落后,双手及双下肢正位片示多发骨质异常,经基因检测发现肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B (V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene family protein B,MAFB)基因c.212C>T (p.P71L)杂合变异,该基因为国外已报道的致病突变,其父母无该基因突变。根据患儿临床表现及基因检测结果诊断为MCTO。同时,对本病进行文献复习,为今后诊断及治疗该类疾病提供借鉴。

广东潮汕地区汉族人群中MAFB基因rs6102085位点多态性与非综合征性唇腭裂的关联

目的:探讨广东潮汕地区汉族人群中v-maf肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B(MAFB)基因的rs6102085多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的关联。方法:纳入潮汕地区唇腭裂组430例和健康组450例。采用TAQMAN基因型鉴定技术对位于MAFB基因的rs6102085进行基因型检测。卡方检验分析rs6102085等位基因和基因型频率在唇腭裂组和健康组中的分布,分析其与唇腭裂的关联。结果:健康组rs6102085基因型分布符合哈迪温伯格平衡。临床亚组中唇裂合并腭裂位点等位基因与基因型的分布频率与健康组对比有统计学意义(P<0.0001),单纯唇裂和单纯腭裂与健康组对比无统计学意义(P>0.05)。男性和女性唇腭裂组分别与健康组对比均有统计学意义(P<0.05)。结论:MAFBrs6102085多态性与潮汕地区汉族人群唇裂合并腭裂有关联,与单纯的唇裂和腭裂无关联,与女性和男性均有关联,性别之间无差异。

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达。收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05)。以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例。lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ^(2)分别为4.783、5.383,P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。

小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

目的:构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法:提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果:与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK)mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论:成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。

Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析

目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb^(+/-))小鼠;Mafb^(+/-)小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb^(-/-))胎鼠。收集雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果成功构建、繁育Mafb^(+/-)小鼠并得到雄性Mafb^(-/-)胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠为尿道下裂表型。结论成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。

MafK通过p65乙酰化对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的探究MafK对大鼠心肌细胞(H9c2)缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及相关机制。方法将H9c2细胞随机分为对照组、H/R组、抑制对照组和MafK抑制组。对照组(按H9c2细胞的正常培养方式进行处理)、H/R组(H9c2细胞进行缺氧4 h/复氧12 h的处理)、抑制对照组(H9c2细胞转染空白对照siRNA-NC 48 h后进行H/R处理)和MafK抑制组(H9c2细胞转染siRNA-MafK 48 h后进行H/R处理)。CCK-8法检测各组细胞的活性;ELISA法检测各组TNF-α和IL-6的表达水平;Caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞的Caspase-3活性;Western blot检测各组细胞的MafK蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3)和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平。结果与对照组相比,MafK在H/R组中的表达水平显著升高(P<0.01)。与抑制对照组相比,敲低MafK可以显著降低MafK在H/R处理下的H9c2细胞中的表达水平(P<0.05)。与对照组相比,H/R组H9c2细胞活性降至(47.07±4.07)%(P<0.05),而TNF-α和IL-6的表达水平则由原来的(12.78±2.11)pg/mL、(45.01±4.07)pg/mL提升至(88.90±7.34)pg/mL(P<0.05)、(148.36±13.36)pg/mL(P<0.05),并且Caspase-3活性A值由0.21±0.01提升至0.52±0.02(P<0.05),促进了H9c2的炎症和凋亡。而敲低MafK使H9c2细胞活性由(48.20±3.09%)提升至(74.90±5.54)%(P<0.05),并将TNF-α和IL-6的表达水平则由原来的(93.55±8.53)pg/mL、(151.52±9.55)pg/mL降低至(64.99±5.47)pg/mL(P<0.05)、(102.24±6.79)pg/mL(P<0.05)。此外,使Caspase-3活性A值由0.53±0.04降至0.34±0.03(P<0.05),表明敲低MafK将逆转由H/R引起的炎症和凋亡的变化。与抑制对照组相比,敲低MafK可以显著抑制Bax和Cleaved Caspase-3的表达而促进Bcl-2的表达。最后,敲低MafK还可以显著抑制NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平。结论抑制Mafk可以有效减轻缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其机制可能与调控p65乙酰化有关。

MAFB基因多态性与非综合征型唇腭裂的研究进展

非综合征型唇腭裂是常见的先天性颌面部畸形,致病机制与基因及环境因素互相作用有关。目前针对基因研究较多,全基因组关联分析发现新型易感基因肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物B(v⁃maf musculoapo⁃neurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,MAFB)与非综合征型唇腭裂发病有关,本文以MAFB基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与非综合征型唇腭裂的相关性进行综述。结果表明,MAFB基因在多种细胞类型中表达分化,对维持脑、胰腺、甲状旁腺等多种器官及组织的发育起重要作用,MAFB基因与亚洲人群非综合征型唇腭裂的发生有明显关联。目前研究相对较多的主要致畸单核苷酸位点包括rs13041247、rs11696257、rs17820943等,在不同种族中研究结论有明显差异;MAFB基因与其他易感基因互相作用共同导致非综合征型唇腭裂的发生,但其相关机制、作用途径等还需要深入研究。

Maf家族蛋白的组成及功能

Maf家族蛋白是一群结构相似、具有典型的碱性结构域和b-Zip基序的转录因子,可以与细胞核内含有b-Zip基序的其他家族的转录因子结合形成同源或异源二聚体,再与DNA上的特异性序列Maf识别元件(Maf recognition elements,MARE)结合,调节相应基因转录。在胚胎母系红细胞的增值、转移和分化,眼晶状体的发育,Th2细胞的极化,胰岛素的产生,及细胞凋亡中都起到了关键的作用。

肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型同系物基因的单核苷酸多态性与非综合征型唇腭裂关联研究

目的揭示位于染色体20q12的肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型同系物基因(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,MAFB)上游单核苷酸多态性位点rs17820943与中国南方汉族人群非综合征型唇腭裂(non-syndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P)发病的相关性。方法采用引物单碱基延伸、基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析法检测了300例NSCL/P患者(病例组)和354例健康志愿者(对照组)以及168个完整患儿-健康父母3人核心家系的rs17820943基因型。并以测定的基因型为基础分别进行病例-对照研究以及患儿-健康父母3人家系研究。结果 rs17820943的等位基因和基因型频率在病例组与对照组间差异均有统计学意义(P等位基因=0.001和P基因型=0.002)。其中等位基因T(频率病例∶对照=0.358∶0.448)和基因型TT(频率病例∶对照=0.110∶0.195)的比值比(oddsratio,OR)和95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)值分别为ORT=0.69(95%CI:0.55～0.86)和ORTT=0.43(95%CI:0.26～0.70)。患儿-健康父母3人家系研究也表明该位点与NSCL/P存在强阳性关联(ORT vs.C=0.55,95%CI:0.41～0.75,传递不平衡检验P=0.000)。结论 MAFB基因的rs17820943位点的单核苷酸多态性与中国南方汉族人群的NSCL/P易感性相关,表明MAFB基因可能是NSCL/P的易感基因。