Fe_3O_4/P(AA-MMA-GMA)磁性复合微球的制备及其偶联抗体的性能

采用新型的无皂乳液聚合法制备磁性复合微球,即以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,1,1-二苯基乙烯为自由基控制剂,无皂乳液聚合制备了一种磁性复合微球Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)。以所制备的Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球为载体,通过共价偶联山羊抗兔IgG抗体,得到了一种免疫磁性复合微球。研究表明,Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球表面带有环氧基,粒径为626nm,具有超顺磁性。0.5mgFe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球与200μg山羊抗兔IgG抗体在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中于25℃反应16h,可得到一种免疫磁性复合微球,其山羊抗兔IgG的偶联量为124μg,且该免疫磁性复合微球可特异性结合兔抗肌动蛋白α。

1,1-二苯基乙烯存在下无皂乳液聚合制备磁性复合微球

报道了一种制备磁性复合微球的方法——DPE法.在自由基控制剂1,1-二苯基乙烯(DPE)存在条件下,甲基丙烯酸甲酯(MMA)与丙烯酸(AA)发生无皂乳液聚合,制备能与Fe3O4粒子相螯合的活性短链共聚物,加入Fe3O4粒子把短链共聚物引到其表面,引发其它单体继续在Fe3O4粒子表面聚合,制备磁性复合微球.研究了AA、DPE、引发剂及Fe3O4粒子加入量等对制备磁性复合微球的影响.并在此基础上,对优化后工艺制备的磁性复合微球进行了TEM、TGA及磁响应性表征.结果表明,利用该新的方法制备出了磁含量为20%、比饱和磁化强度为32.2emu/g、平均粒径为265nm且表面不含任何杂质的磁性复合微球.

可溶性fms样酪氨酸激酶1时间分辨荧光免疫分析法的建立

为建立基于磁性微球可溶性fms样酪氨酸激酶1(soluble fms-like tyrosine kinase 1,sFlt-1)的时间分辨荧光免疫分析法(sFlt-1 time-resolved fluoroimmunoassay, sFlt-1-TRFIA),用磁珠偶联抗sFlt-1单克隆抗体,Eu^(3+)(铕)标记抗sFlt-1单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立基于磁珠的sFlt-1-TRFIA。结果显示,自制试剂的检测灵敏度为10.78 pg/mL,线性范围10.78~25 000 pg/mL;样品的回收率为98.23%~107.71%,分析内变异系数(intraassay coefficient of variation, CV)为5.29%~6.50%,分析间变异系数(intreassay coefficient of variation, CV)为6.55%~8.23%;与电化学发光法的检测结果比较,相关系数r^(2)值为0.971 9。由此,基于磁性微球建立的sFlt-1-TRFIA灵敏度、特异度以及准确度等均符合临床应用要求,有望用于临床血清样本中sFlt-1浓度的检测。