makorin环指蛋白3联合黄体生成素基础值诊断女童特发性中枢性性早熟的价值

目的探讨makorin环指蛋白3(MKRN3)联合黄体生成素(LH)基础值诊断女童特发性中枢性性早熟(CPP)的价值。方法选取2019年2月至2023年3月广西壮族自治区桂东人民医院收治的105例特发性CPP女童患儿作为观察组,选取同期同院体检的90名健康女童作为对照组。比较两组激素指标、MKRN3、LH基础值、人胰岛素生长因子BP3(IGF-BP3)水平;采用多因素Logistic回归分析女童发生特发性CPP的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分析相关指标单独及联合诊断的价值。结果两组卵泡刺激素(FSH)、催乳素比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组雌二醇(E_(2))高于对照组(P<0.05)。观察组MKRN3低于对照组,LH基础值、IGF-BP3高于对照组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,E_(2)、MKRN3、LH基础值、IGF-BP3是女童发生特发性CPP的影响因素(P<0.05)。E_(2)、MKRN3、LH基础值、IGF-BP3水平表达及4项指标联合诊断均对特发性CPP有较高的预测效能,联合诊断效能最高(P<0.05)。结论特发性CPP女童血清MKRN3、LH基础值变化显著,其可能参与特发性CPP发病机制。E_(2)、MKRN3、LH基础值、IGF-BP3水平表达及4项指标联合诊断均对特发性CPP有较高的预测效能,联合诊断效能最高。

INHB、MKRN3、FGFR2在女童中枢性性早熟中的预测价值分析

目的分析抑制素B(INHB)、Makorin环指蛋白3(MKRN3)、成纤维生长因子受体2(FGFR2)对女童中枢性性早熟的预测价值。方法选取2018年1月至2021年1月期间于我院就诊中枢性性早熟女童100例作为中枢性性早熟组、健康体检的健康女童80名作为健康组。测定血清INHB水平、MKRN3、FGFR2相对表达量,比较三者在健康组、中枢性性早熟组中的表达及与疾病类型的关系,分析三者对此病的预测价值。结果与健康组比较,中枢性性早熟组INHB水平升高,MKRN3、FGFR2相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.001)。进展型中枢性性早熟INHB水平高于缓慢进展型,MKRN3、FGFR2相对表达量低于缓慢进展型,差异有统计学意义(P<0.001)。Pearson相关性分析显示,INHB与MKRN3呈负相关(r=-0.420,P<0.001);INHB与FGFR2呈负相关(r=-0.218,P=0.029);MKRN3与FGFR2呈正相关(r=0.586,P<0.001)。与INHB、MKRN3、FGFR2单项预测比较,三项联合对女童中枢性性早熟的预测价值较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中枢性性早熟女童血中INHB升高,MKRN3、FGFR2降低,且与疾病类型相关,三者联合对此病的预测价值较高。

miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR⁃30b⁃5p的表达水平。qRT⁃PCR检测食管癌细胞株中miR⁃30b⁃5p的表达水平。将miR⁃30b⁃5p mimics转染至TE⁃13和ECA109细胞中,检测转染后各组细胞中miR⁃30b⁃5p及MKRN3表达水平。根据细胞增殖实验,Transwell及裸鼠成瘤实验检测食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR⁃30b⁃5p的靶基因。蛋白印迹实验探索miR⁃30b⁃5p对食管癌影响的分子机制。结果miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞和食管癌组织中相较于正常上皮细胞和癌旁组织表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖实验显示,miR⁃30b⁃5p mimics组增殖率显著低于NC组(P<0.05);Transwell实验结果显示,miR⁃30b⁃5p mimics组迁移率及侵袭率显著低于NC组(P<0.05);双荧光素酶实验显示MKRN3是miR⁃30b⁃5p的直接靶基因。Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白发现,miR⁃30b⁃5p mimics组蛋白低于NC组(P<0.05)。结论miR⁃30b⁃5p在食管癌中呈现低表达,miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

人Makorin环指蛋白1基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建人Makorin环指蛋白1(MKRN1)基因shRNA真核表达质粒,并检测其对HEK293细胞MKRN1基因表达的影响。方法设计并合成特异性针对人MKRN1基因的小干扰片段,定向克隆至带有卡那霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列分析,并用脂质体将其转染到HEK293细胞中,观察其对细胞MKRN1基因mRNA转录和蛋白表达水平的影响。结果经酶切鉴定和序列分析证明,3个人MKRN1基因shRNA真核表达质粒及其阴性对照质粒构建正确,转染HEK293细胞后,3个shRNA真核表达质粒在mRNA水平对细胞MKRN1基因的抑制率分别为52.4%、26.2%和42.9%,在蛋白水平对细胞MKRN1基因的抑制率分别为69.1%、27.9%和50.0%。结论已成功构建了人MKRN1基因的shRNA真核表达质粒,为进一步研究MKRN1基因的功能及其与人端粒酶逆转录酶的关系奠定了基础。

人Makorin环指蛋白1基因沉默对HEK293细胞的影响

目的探讨特异性抑制人Makorin环指蛋白1(MKRN1)基因的表达对HEK293细胞的影响。方法用脂质体将前期筛选出的含最有效干扰序列的人MKRN1基因shRNA真核表达质粒,转染至HEK293细胞中,观察其对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因mRNA转录水平、蛋白表达水平及细胞增殖的影响。结果人MKRN1基因shRNA真核表达质粒转染HEK293细胞后,在mRNA和蛋白水平均能明显上调细胞hTERT基因的表达,且细胞明显增殖。结论抑制HEK293细胞中人MKRN1基因的表达,可导致hTERT基因mRNA转录水平和蛋白表达水平上调,并促进细胞增殖。

人胰岛素生长因子BP3、makorin环指蛋白3在特发性中枢性性早熟女童诊断中的应用价值

目的检测特发性中枢性性早熟(ICPP)女童血清中人胰岛素生长因子BP3(IGF-BP3)、makorin环指蛋白3(MKRN3)水平,并探讨IGF-BP3、MKRN3在ICPP女童诊断中的应用价值。方法选取2017年3月-2019年3月于本院就诊的95例ICPP女童(ICPP组)为研究对象,同期选取83例健康体检女童(CG组)作为对照组。采用化学发光法检测2组激素水平;全自动免疫分析仪检测血清中IGF-BP3水平、qRT-PCR法检测血清中MKRN3水平;分析IGF-BP3、MKRN3水平与一般资料、激素水平的相关性;分析IGF-BP3、MKRN3对ICPP女童的诊断价值。结果 ICPP组IGF-BP3水平、骨龄、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)显著高于CG组(P <0.05),MKRN3、乳房发育年龄水平显著低于CG组(P <0.05);骨龄、PRL、E2与IGF-BP3水平均呈正相关,与MKRN3水平均呈负相关(P <0.05);乳房发育年龄与IGF-BP3水平呈负相关,与MKRN3水平呈正相关(P <0.05);IGF-BP3、E2是ICPP疾病发生的危险因素,MKRN3是ICPP疾病发生的保护因素;IGF-BP3、MKRN3联合诊断ICPP疾病的AUC为0.918(95%CI:0.875~0.961),特异度为87.4%,敏感度为86.7%。结论 IGF-BP3、MKRN3在ICPP发生中发挥重要作用,可能参与ICPP发病机制,IGF-BP3联合MKRN3可作为诊断ICPP女童的参考指标。

MKRN基因家族在疾病中的作用

makorin无名指蛋白(makorin ring finger protein,MKRN)基因家族编码具有特定锌指结构的蛋白质,在无脊椎动物和有脊椎动物中广泛存在。MKRN(MKRN1、MKRN2、MKRN3、MKRN4)可以通过其特殊的RING结构域,作为E3泛素连接酶与p21、p53、p14ARF、SNIP1和一些细菌蛋白或病毒相互作用并介导其降解,参与细胞周期停滞、心肌细胞凋亡、睾丸发生、造血等多种机体生理过程以及中枢性性早熟、系统性红斑狼疮等许多疾病的调控,尤其与癌症的发生、转移及预后密切相关。本文系统地回顾了MKRN基因家族在疾病发生、发展过程中的作用,并重点描述了其在肿瘤中的作用,提出其可能在未来肿瘤的临床诊断、治疗及预后方面存在巨大潜力。