人参皂苷Rb_(1)脂质体的制备及对脂肪细胞中脂滴积聚的抑制作用

[目的]制备β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体(β-Rb_(1)-Lip),减少Rb_(1)降解并增强人参皂苷Rb_(1)降脂效果。[方法]采用薄膜水和法制备了β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体,利用MTT法评估脂质体的生物安全性,借助油红O染色试验和酶标仪测量TG含量,考察了脂质体β-Rb_(1)-Lip对脂肪细胞3T3-L1的脂滴积聚抑制作用。[结果]制备的β-Rb_(1)-Lip脂质体的包封率为83.74%,平均粒径为198 nm,β-Rb_(1)-Lip在12 h内Rb_(1)释放率约为80%,表现出良好的缓释效果。对于降脂活性,50μmol/L的β-Rb_(1)-Lip表现出显著的细胞内脂滴抑制率,与同浓度Rb_(1)单体相比,β-Rb_(1)-Lip对3T3-L1细胞内脂滴的抑制效果更为显著,且对细胞没有毒副作用。[结论]β-Rb_(1)-Lip具有包封率高、粒径小和缓释效果明显的特征,能够持续释放活性成分人参皂苷Rb_(1),增强其降脂功效并减少用量。

人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)体外消化产物的UHPLC-TSQ MS分析

本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,UHPLC-TSQ MS)法分析人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)在模拟唾液、胃液和肠液中的降解产物。在人参皂苷Rb_(1)的消化产物中发现了Rd、Rg_(3)、Rg_(5)、Rk_(1),其中在肠液中还发现了F_(2),表明F_(2)是肠液中特有的降解产物,降解途径为Rb_(1)→Rd→Rg_(3)→Rg_(5)/Rk_(1),Rb_(1)→Rd→F_(2)。在人参皂苷Rg_(1)的消化产物中发现了F_(1)和Rh_(1),降解途径为Rg_(1)→F_(1)和Rg_(1)→Rh_(1)。定量结果表明:降解产物含量在消化液中随时间而变化;在胃液中,Rg_(3)、Rd、Rg_(5)、F_(1)、Rh_(1)和Rk_(1)的达峰时间分别为1、2、4、2、2、4 h;在肠液中,7种降解产物的达峰时间均为4~6 h。另外,皂苷在唾液中的降解较胃液和肠液温和,而在胃肠道中的降解更广泛;在消化过程中,Rg_(1)比Rb_(1)更易降解。人参皂苷在消化道内会发生水解反应生成多种小分子皂苷,为Rb_(1)和Rg_(1)开发和利用提供了重要的化学与生物学基础。

基于网络药理学和分子对接技术探究人参皂苷Rb_(1)抗脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的:通过网络药理学和分子对接技术寻找人参皂苷Rb_(1)抗脑缺血再灌注损伤的可能作用机制,为今后实验研究提供一定的理论依据。方法:通过SuperPred数据库获取人参皂苷Rb_(1)相关作用靶点,利用GEO、GeneCards和OMIM数据库获取脑缺血再灌注损伤的异常表达分子,通过交集分析获得人参皂苷Rb_(1)作用于脑缺血再灌注损伤的可能靶点。对所选靶点进行蛋白-蛋白相互作用网络构建、GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析,获得有效靶点的基因和信号通路。最后运用AutoDock软件对关键靶点与人参皂苷Rb_(1)进行分子对接,获得最佳结合靶点。结果:在SuperPred数据库中获得人参皂苷Rb_(1)的潜在作用靶点163个,在GeneCards和OMIM数据库中获得脑缺血再灌注损伤的潜在作用靶点228个,分析后获得14个人参皂苷Rb_(1)与脑缺血再灌注损伤的交集靶点。GO功能富集分析得150个条目,KEGG信号通路富集分析得24条信号通路。分子对接结果显示,人参皂苷Rb_(1)与NFKB1和STAT3有较强的亲和力。结论:人参皂苷Rb_(1)可能通过NFKB1和STAT3信号通路产生抗脑缺血再灌注损伤作用。

超高速液相测定西洋参中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的含量研究

目的:建立测定西洋参中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1含量的超高速液相色谱法。方法:采用Waters Acquity UPLC BEHC_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)柱分离,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2ml·min^(-1),柱温为35℃,在203 nm处检测。结果:人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1在测定范围内有良好的线性关系,其平均回收率为97.36%～99.23%,RSD为1.16%～1.39%(n=6)。结论:本法操作简便,准确度高,重复性好,可作为西洋参质量控制方法之一。

人参皂苷Rb_1在心肌缺血大鼠体内的药动学研究

目的研究人参皂苷Rb_1在正常大鼠和急性心肌缺血模型大鼠体内的药动学。方法以垂体后叶素(PIT)制备急性心肌缺血大鼠模型,实验分3个正常对照组和3个模型组,分别给予高、中、低剂量的人参皂苷Rb_1(400,200,100 mg·kg^(-1)),单次灌胃给药后于不同时点采血,以三七皂苷R_1为内标,采用LC-MS/MS测定各时点血药浓度,并运用PK Solution 2.0软件计算药动学参数;Western Blot法测定大鼠肝脏中药物代谢酶CYP3a2、CYP2c9、CYP2c19、CYP1a1和CYP1a2蛋白表达。结果人参皂苷Rb_1的线性范围为5~10000 ng·mL^(-1),方法的专属性、提取回收率、日间及日内精密度、稳定性符合生物样品处理要求。与正常组比较,模型组大鼠AUC_(0-t)和C_(max)增加,t_(1/2)和T_(max)延长,CL降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠CYP3a2、CYP2c9、CYP2c19、CYP1a1和CYP1a2代谢酶蛋白表达明显下降(P<0.05或P<0.01);人参皂苷Rb_1给药后12 h可诱导CYP1a1和CYP1a2表达。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确性好,可用于人参皂苷Rb_1的含量测定及药动学研究。

人参皂甙Rb_1与Re对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rb1与Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响 ,并比较两者的效应差异。方法 结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数。结果 (1)透射电镜发现缺血再灌注组缺血区出现心肌凋亡细胞 ,假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;(2 )缺血再灌注组心肌细胞凋亡数为 134 45± 45 6 1个 /视野 ,人参皂甙Rb1治疗组 5 1 6 5± 13 71个 /视野 ,人参皂甙Re治疗组 90 6 6± 19 2 2个 /视野 ,三组间有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论 心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,人参皂甙Rb1和Re均可显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。证实人参皂甙Rb1与Re均有抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡 ,减轻心肌缺血再灌注损伤的作用 ;人参皂甙Rb1的抗心肌细胞凋亡作用较Re的效果为佳。

HPLC法测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1的含量

目的:建立同时测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Sunfire C_(18)(150mm×4.6mm,5μm)分析柱.流动相以乙腈-水梯度洗脱;检测波长为203nm;柱温30℃;流速1.0ml·min^(-1)。结果:人参皂苷Rg_1,Re,Rb_1和三七皂苷R_1之间有较好的分离度,4种成分在线性范围內与峰面积之间线性关系良好,人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1加样回收率分别为99.83%,97.84%,98.43%,97.34%,RSD分别为2.08%,1.66%,1.73%和1.42%(n:5)。结论:本方法可同时测定人参三七颗粒中的人参皂苷Rg_1,Re,Rb_1和三七皂苷R_1含量。

人参皂苷Rb_1对化疗致卵巢早衰大鼠性激素影响

目的探讨人参皂苷皂苷Rb_1对环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠性激素的影响。方法选用60只2～3月龄具有正常动情周期雌性Wistar大鼠随机分对照组、给药组和模型组。采用放射免疫法检测卵巢早衰大鼠卵巢促卵泡成熟素(FSH)和雌二醇(E2)水平,同时对比观察人参皂苷皂苷Rb_1治疗后对其性激素水平的影响。结果给药组与模型组的E2浓度差异有统计学意义(P>0.05);给药组的FSH浓度低于模型组(P<0.05)。结论 Rb_1可能是通过上调E2水平、下调FSH水平减少卵巢颗粒细胞的凋亡,进而对化疗所致卵巢早衰起到一定的治疗作用,延缓其衰老。

三七皂甙Rg_1、Rb_1对脂多糖引起的大鼠肝细胞凋亡及相关基因表达的保护作用

目的:探讨三七皂甙对急性肝损害肝细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法:采用脂多糖(LPS)造成大鼠急性肝损伤模型,用 TUNEL 染色法检测肝细胞凋亡,用免疫组化法测定 bcl-2、bax、Fas、FasL 凋亡相关基因在肝内的表达,观察三七皂甙 Rg_1和 Rb_1对上述指标的作用。结果:TUNEL 法检测出细胞凋亡高峰时间在 LPS 处理后12～15 h。免疫组化法检测出 bcl-2、bax、Fas、FasL 凋亡相关基因在肝内表达的时相性变化。Rg_1、Rb_1对 bcl-2没有明显影响,而显著抑制促凋亡基因 bax、Fas、FasL 的表达。结论:LPS处理启动和促进了肝细胞凋亡的相关基因的表达,而 Rg_1、Rb_1通过抑制促凋亡基因表达而减少肝细胞凋亡。

人参皂苷Rb_(1)治疗性给药的抗癫痫作用及机制研究

目的探讨人参皂苷Rb_(1)治疗性给药的抗癫痫作用及其作用机制。方法采用戊四唑(PTZ)点燃的方法建立小鼠癫痫模型。将造模成功的小鼠随机分为PTZ组、丙戊酸钠(VPA)组和人参皂苷Rb_(1)低(10 mg·kg^(-1))、中(20 mg·kg^(-1))、高(40 mg·kg^(-1))剂量组。各给药组分别腹腔注射相应药物30 d,每日1次。通过观察给药后不同时间点癫痫发作级别和发作潜伏期,评估小鼠癫痫发作的严重程度和治疗性给药的恢复情况。采用生化法检测各组小鼠大脑皮层和海马中谷氨酸(Glu)含量和谷氨酰胺合成酶(GS)活性;Fluoro-Jade B(FJB)染色观察海马CA1区的神经细胞损伤情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠大脑皮层和海马中谷氨酸转运体1(GLT-1)和GS mRNA表达;Western Blot法检测小鼠大脑皮层和海马GLT-1和GS蛋白表达。结果治疗性给药30 d后,与PTZ组相比,人参皂苷Rb_(1)低、中、高剂量组和VPA组小鼠癫痫发作级别降低,发作潜伏期延长,大脑皮层和海马中Glu含量降低,GS活性升高,GLT-1、GS mRNA表达和蛋白表达增加,海马CA1区FJB阳性细胞数量减少(P<0.05,P<0.01)。结论人参皂苷Rb_(1)治疗性给药能有效缓解癫痫小鼠的发作严重程度,改善神经细胞损伤,发挥抗癫痫作用,其机制可能与上调谷氨酸-谷氨酰胺(Glu-Gln)循环上的关键环节GLT-1和GS的表达,调节Glu代谢有关。

高效液相色谱法测定西洋参冲剂中人参皂甙Rb_1的含量

采用固相萃取净化技术及高效液相色谱法，测定了西洋参冲剂中人参皂甙Rb1的含量，结果在12.5～200μg／ml范围内，Rb1的含量与峰面积呈良好线性，平均回收率及RSD分别为：101．3±3．2％（0．4mg，n＝5）；101．2±2．6％（0．2mg，n＝5）；99．0±4．4％（0．1mg，n＝5）。最小检出量为0．3μg，本法简便、快速、准确。

人参皂苷Rb_(1)治疗非酒精性脂肪性肝病药理作用的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为全球最常见的慢性肝病,主要表现为肝脏中脂肪过度沉积,并可进一步导致肝纤维化,以及肝硬化和肝细胞癌等终末期肝病。NAFLD发生和发展的分子机制尚不完全清楚,目前还没有批准的药物用于治疗NAFLD。人参皂苷Rb_(1)是人参中最丰富和最具生物活性的分子,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化和神经保护等多种药理活性。就NAFLD发病机制及人参皂苷Rb_(1)治疗NAFLD药理作用进行简要综述,为今后人参皂苷Rb_(1)的研究和临床治疗提供参考。

人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常的作用研究

探讨人参皂苷Rb_(1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetmhydropyridine,MPTP)诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤及小鼠行为学异常的作用及可能的机制。体外分离培养小鼠多巴胺能神经元,给予MPTP(10μmol/L)损伤和不同剂量的Rb_(1)(10、20、40μmol/L)药物治疗处理,观察神经元形态。对C57B/L6小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)构建帕金森模型,灌胃给予不同剂量Rb_(1)(10、20、40 mg/kg)药物治疗,采用旷场实验及爬杆实验对小鼠进行行为学检测;采用蛋白免疫印迹反应(Western blot)检测纹状体TH、CaMKII、FP1和Bcl-2的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量人参皂苷Rb_(1)可以明显改善MPTP诱导的神经元损伤;人参皂苷Rb_(1)处理能显著改善MPTP诱导的PD模型小鼠行为学异常;人参皂苷Rb_(1)可以显著上调MPTP所造成的TH、Bcl-2的减少,对CaMKII及FP1表达的减少没有显著作用。人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常具有明显的改善作用,其机制可能与逆转TH和Bcl-2的表达有关。

HPLC-UV法测定人参归脾丸中人参皂苷Rb_(1)的含量

目的:建立人参归脾丸中人参皂苷Rb_(1)的高效液相色谱(HPLC-UV)法含量测定方法,以期为人参归脾丸的质量控制提供依据。方法:对人参归脾丸中的人参皂苷Rb_(1)含量进行测定。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),进样量10μL,柱温25℃,检测波长203 nm。结果:人参归脾丸中人参皂苷Rb_(1)的稳定性和重复性试验的RSD分别为1.4%和1.6%。采用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离效果好,达到含量测定的要求。人参皂苷Rb_(1)在19.27~963.59μg·mL^(-1)范围内峰面积对进样量线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为96.1%(RSD=1.8%,n=6)。3批样品测得的人参皂苷Rb_(1)含量结果分别为0.265、0.271、0.268 mg·g^(-1)。结论:该方法准确、简便、专属性好,可用于人参归脾丸中人参皂苷Rb_(1)成分的含量测定,为人参归脾丸的质量控制提供依据。

人参皂苷Rb_(1)对兔离体肠平滑肌收缩活动的影响

目的:研究人参皂苷Rb_(1)对兔离体肠平滑肌收缩活动的影响。方法:采用兔离体肠平滑肌实验,应用BL-420F生物机能实验系统,观察人参皂苷Rb_(1)对正常状态下兔离体肠平滑肌自发性收缩的影响,探究人参皂苷Rb_(1)影响兔离体肠平滑肌收缩的作用机制。结果:人参皂苷Rb_(1)能浓度依赖性地抑制兔离体肠自发性收缩,且浓度在70、90µmol/L可明显降低兔离体小肠平滑肌自发性收缩张力和收缩振幅(P<0.01),但对频率无影响(P>0.05)。用钌红、肝素和维拉帕米对兔离体肠平滑肌预处理后,人参皂苷Rb_(1)对兔离体肠平滑肌收缩的抑制程度明显增强(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb_(1)可显著抑制兔离体肠平滑肌自发性收缩,其机制可能是阻断L-型Ca^(2+)通道抑制外钙内流,或阻断ryanodine受体和三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)受体抑制内钙释放,最终使细胞内钙离子浓度降低,从而抑制肠平滑肌的收缩。

红参中总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)含量的测定

目的测定不同产地的26批红参药材中总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)的含量。方法采用紫外可见分光光度法测定红参中总皂苷的含量,高效液相色谱法测定红参中人参皂苷Rg 1、Re、Rb 1的含量。结果26批红参药材中总皂苷含量为1.2%~3.0%,人参皂苷Rg_(1)、Re含量之和为0.17%~0.61%,人参皂苷Rb_(1)含量为0.21%~0.81%。结论不同产地的红参药材总皂苷及人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)的含量存在差异,提示应进一步规范红参药材的种植、加工炮制及标准的建立。

三七药酒中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定

目的:建立三七药酒中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1的含量测定方法,为其质量标准提升提供理论基础。方法:采用HPLC梯度洗脱建立三七药酒中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1的含量测定方法。使用Acchrom Unitary C 18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,20%A;20~45 min,20%A→46%A;45~55 min,46%A→55%A;50~60 min,55%A;60~61 min,55%A→90%A;61~70 min,90%A),流速1.5 mL·min^(-1),检测波长203 nm,用外标法测定了21个批次的三七药酒中人参皂苷Rg1的含量。结果:人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1分别在3.446~344.6μg·mL^(-1)(r=1.0000),6.078~303.9μg·mL^(-1)(0.9999)范围内,线性关系良好,平均加样回收率分别为98.4%(RSD=1.4%,n=6),95.2%(RSD=2.9%,n=6)。结论:建立的方法简单准确,可用于三七药酒中三七的质量控制。

HPLC法测定丹参益心胶囊中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)、三七皂苷R_(1)的含量

目的:研究丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法HPLC测定三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。结果:三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)三者的加样回收率R_(1)为99.7%、Rg_(1)为99.8%、Rb_(1)为97.6%,RSD分别为1.6%,1.1%,1.1%(n=6)。结论:该方法简便,灵敏,重现性好,可作为丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。

基于HPLC检测枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷Rb_(1)含量的方法学研究

目的:建立测定枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷 Rb_(1)含量的高效液相法,为枸杞西洋参软胶囊的质量控制提供方法学依据。方法:以饱和正丁醇提取样品,以乙腈-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,柱温为35℃,流速为1.0mL/min,进样量为10μL,应用 HPLC法对枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷 Rb_(1)的含量进行检测,分别进行专属性、精密度、稳定性、重复性、加样回收率实验考察并验证方法的科学性。结果:人参皂苷 Rb_(1)线性关系良好;专属性试验表明枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷 Rb_(1)具有专属性;精密度测定RSD=1.52%;稳定性测定峰面积RSD=1.81%;重复性试验表明 HPLC重复性良好;人参皂苷 Rb_(1)加样回收率显示良好。结论:表明高效液相色谱法检测枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷 Rb_(1)含量,操作方便快捷,使用良好,可用于枸杞西洋参软胶囊中人参皂苷 Rb_(1)的含量测定。

HPLC法测定跌打片中人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的含量

目的:建立高效液相色谱法测定跌打片中人参皂苷Rg★和人参皂苷Rb★的含量测定方法。方法:采用Luna C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:35℃;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速1.0 ml·min^(-1);检测波长203 nm。结果:人参皂苷Rg★线性范围为0.340～5.094μg(r=1.000 0),人参皂苷Rb★线性范围为0.303～0.454μg(r=1.000 0);平均加样回收率:人参皂苷Rg_1★为97.17%,RSD=1.09%(n=6),人参皂苷Rb★为102.63%,RSD=1.18%(n=6)。结论:该方法简便可靠,可用于跌打片的质量控制。