黄腐酚抑制膝骨关节炎大鼠软骨组织细胞自噬作用

目的探讨黄腐酚对膝骨关节炎大鼠软骨损伤和软骨细胞自噬水平的影响及其可能的作用机制。方法选取48只大鼠用前后交叉韧带断离术建立膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、黄腐酚低剂量组、黄腐酚高剂量组和西药组,各12只,另设对照组12只。黄腐酚低剂量、高剂量组分别灌胃50、100 mg·kg^(-1)黄腐酚混悬液(生理盐水配制),西药组灌胃0.17 g·kg^(-1)硫酸氨基葡萄糖胶囊,对照组及模型组给予等量生理盐水,连续干预28 d。观察大鼠软骨组织形态、计算Mankin’s评分;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assy,ELISA)检测各组大鼠血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;HE染色观察软骨组织病理学变化;TUNEL法检测大鼠软骨组织细胞凋亡情况;反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠软骨组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(mammalian rapamydia target protein,mTOR)mRNA的表达情况;Western blotting检测大鼠软骨组织PI3K、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(phosphorylated mammalian rapamydia target protein,p-mTOR)、哺乳动物ATG同源蛋白(mammalian ATG homologous protein,Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(protein 1 light chain 3,LC3)蛋白的表达情况。结果与模型组比较,3个给药组大鼠软骨组织学Mankin’s评分、IL-6、IL-1β、TNF-α、软骨细胞凋亡率和PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达水平及PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平降低,Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平升高(P<0.05)。与黄腐酚低剂量组比较,高剂量组和西药组大鼠软骨组织学Mankin’s评分、IL-6、IL-1β、TNF-α、软骨细胞凋亡率和PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达水平及PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平降低,Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平升高(P<0.05),后2组比较差异无统计学意义。结论黄腐酚能减轻KOA大鼠的炎症反应、提高软骨细胞自噬水平、抑制细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用的。

高尔基磷酸化蛋白3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中高尔基磷酸化蛋白3（GOLPH3）表达的临床病理学意义及其与细胞增殖的关系。方法Westernblot检测62例结直肠癌组织和正常结直肠黏膜中GOLPH3的表达，应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白．过氧化物酶（sP）法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达，分析GOLPH3表达与临床病理因素、mTOR表达及Ki-67增殖指数的关系。结果结直肠癌组织中GOLPH3的相对表达量（0．76±0．59）明显高于正常结直肠黏膜的表达量（0．61±0．53，P〈0．05），在细胞分化差、有淋巴结转移或Ⅲ期的结直肠癌组织中GOLPH3的表达量（1．40±1．03、0．97±0．75、0．97±0．75）明显高于高中分化、无淋巴结转移或I～Ⅱ期的结直肠癌组织（0．62±0．33、0．57±0．31、0．57±0．31，P〈0．05），此外，GOLPH3的表达与年龄、性别、肿瘤位置、大体类型、肿瘤直径、浸润深度和血癌胚抗原（CEA）水平无明显相关（P〉0．05），mTOR阳性表达的结直肠癌组织中GOLPH3的表达量（0．95±O．73）明显高于mTOR阴性表达的结直肠癌组织（0．54±-O．28）；结直肠癌组织中GOLPH3的相对表达量（0．76±0．59）与Ki-67增殖指数（n46±0．17）呈正相关（r=0．325，P〈0．05）。结论GOLPH3在结直肠癌组织中存在过表达，可促进结直肠癌细胞的增殖。