转β-甘露聚糖酶基因manA小鼠的制备

为了获得β-甘露聚糖酶基因manA的转基因小鼠,从黑曲霉中克隆得到β-甘露聚糖酶基因manA,进行体外表达检测甘露聚糖酶活性后,将此基因插入到含有猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因启动子的表达载体pPSPBGPneo中,得到在腮腺组织特异表达β-甘露聚糖酶基因manA的载体pPSP-manA,总长为16.3 kb,将其进行线性化后回收得到高质量DNA片段,通过显微注射得到17只原代小鼠,进行PCR和Southern blot检测发现有6只阳性转基因小鼠,表明转β-甘露聚糖酶基因manA小鼠制备成功。

转manA基因小鼠F_1代表达效果的检测分析

将携带β-甘露聚糖酶基因manA的转基因FVB原代小鼠与野生型FVB小鼠进行繁殖得到F1代,通过PCR和Southern blot鉴定出F1代转基因小鼠。提取转基因小鼠腮腺、舌下腺、下颌下腺、心脏、肝脏等组织的总RNA,通过RT-PCR检测出manA在转基因小鼠的腮腺和舌下腺组织特异性表达。进行定量PCR验证出manA基因在302号家系小鼠的舌下腺中表达量最高,证明β-甘露聚糖酶基因manA在转基因小鼠的腮腺和舌下腺特异性表达成功。对转基因小鼠唾液进行收集测定β-甘露聚糖酶活性,在302号家系中检测到酶活性较高。通过代谢试验测定饲料中粗蛋白、粗纤维和粗脂肪的消化率,结果显示,与非转基因小鼠相比,302号家系转基因小鼠对饲料中粗蛋白、粗纤维的表观消化率无明显差异,而粗脂肪的消化率得到显著提高;304号家系转基因小鼠对饲料中粗蛋白、粗脂肪、粗纤维消化率方面均无明显差异。

大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达

通过PCR克隆了大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因manA,分别构建了含manA基因的原核和真核生物表达载体。在大肠杆菌中经IPTG诱导表达的GST-PMI融合蛋白,经亲和层析纯化和PreScission蛋白酶酶切,SDS-PAGE分析证实PMI蛋白为42 ku。对转manA基因的拟南芥进行PCR分析表明,manA基因已稳定整合到拟南芥基因组中。氯酚红显色反应证实,整合到拟南芥基因组中的manA基因能表达具有6-磷酸甘露糖异构酶活性的PMI蛋白。这些结果说明,克隆的manA基因可在细菌和高等植物中高效表达。

两种新蚤细胞色素氧化酶亚基II基因的克隆和测序

本文报道了二齿新蚤和宽新蚤线粒体 DN A中一段 90 0碱基的片段 ,其中包括完整的 COII基因和两个氨基酸 t RNA基因片段。两种新蚤 COII基因的 CG含量都是 33.3% ,这在昆虫中是较高的。两者基因间碱基的变异率为 1.8% ,变异以 T→ C转换为主 ,显示两种新蚤间较近的亲缘关系。两种新蚤氨基酸 t RNA基因碱基的变异率低于 0 .5%。两种新蚤的 COII基因和猫栉首蚤 COII基因间碱基的变异率大于 2 0 %。同时列出了完整的细胞色素氧化酶亚基 II氨基酸序列。并列出了在这个基因片段中一些保守序列的位置。

新疆玛纳斯河流域抗生素抗性基因的污染分析

抗生素抗性基因(ARGs)是一类新型的环境污染物,可通过基因水平转移在不同的环境介质中传播扩散。本文考察分析了新疆玛纳斯河流域中抗生素抗性基因及耐药菌的污染分布。沿玛纳斯河流域采集了8个表层水样,对四环素类,磺胺类以及大环内脂类三类抗生素耐药菌和七种抗生素抗性基因的含量与分布进行了分析,结果表明:采集的水样对三类抗生素均有耐药性,磺胺类耐药菌的耐药率为85%,其对数值比其他两类高出1.6左右;PCR反应检测ARGs存在情况,除erm A基因外,其它6种ARGs均被检出;荧光定量PCR技术测定ARGs的含量,磺胺类抗性基因(sul1,sul2)的相对丰度较高,均值为3.66×10-3(sul1/16s r RNA)和1.72×10-3(sul2/16s r RNA);水样中各抗性基因的相对表达量sul1>sul2>erm B>tet W>tet M>tet O。上述结果表明,玛纳斯河流域已经受到了ARGs和耐药菌的污染。本研究可以为监测新疆地区水环境中的ARGs提供科学的研究方法,并为流域水污染控制的管理和决策提供科学依据。