类风湿关节炎患者血清MBL、MASP-2、HsCRP与C_3水平的相关性

目的研究类风湿关节炎(RA)患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)/MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)、Hs CRP和C3水平的相关性。方法收集50例RA患者(活动期和非活动期各25例)和40例健康对照者空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验分别检测血清MBL、MASP-2、Hs CRP和C3的水平。结果 RA组活动期和非活动期患者血清中MBL水平均显著低于健康对照组(10.05±2.14 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L;14.79±3.93 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L,P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中MASP-2水平均显著低于健康对照组(75.90±9.21 ng/m L vs 251.78±34.50 ng/m L;107.8±14.90 ng/m L vs251.78±34.50 ng/m L)(P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中Hs CRP水平显著高于健康对照组(40.53±34.81 mg/L vs1.42±1.70 mg/L;2.97±2.51 mg/L vs 1.42±1.70 mg/L,P<0.05),C3水平3组无差异;双变量Pearson相关性分析,RA患者组MBL与MASP-2含量均呈显著正相关(r=0.550,P=0.001)、与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.323,P=0.022);与C3含量无相关(r=0.022,P=0.882)。RA组MASP-2与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.453,P=0.001);与C3含量无相关(r=0.049,P=0.738)。经ROC曲线分析,Hs CRP曲线下面积最大(0.844,P=0.001),MASP-2和MBL曲线下面积较小(0.025,P=0.001;0.266,P=0.001),Hs CRP(84%)对RA诊断的敏感性高于MBL(10%)、MASP-2(40%)。结论 MBL与MASP-2水平与Hs CRP呈负相关关系,RA患者关节的炎症损伤程度越重,则血清MBL与MASP-2水平越低,提示MBL与MASP-2参与RA病理损伤过程,但二者的敏感性均较低,不能做为RA诊断及疾病活动程度评价的独立指标。

MASP-2的EGF和SP功能区蛋白表达及其多克隆抗体制备

目的:克隆并原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的EGF、SP功能区蛋白,制备其多克隆抗体,初步分析两个功能区蛋白的免疫原性。方法:从人胎肝组织提取总RNA,反转录得到cDNA作为模板分别扩增MASP-2的EGF、SP片段基因,再分别连接至pGEX-6P-2表达载体诱导表达GST融合蛋白;分离纯化融合蛋白后免疫适龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体,Western blot法检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价。结果:成功构建pGEX-6P-2-EGF和pGEX-6P-2-SP,并表达GST-EGF、GST-SP两种融合蛋白;制备出两种目的片段的多克隆抗体,特异性高,与其他蛋白无交叉反应,间接ELISA测定EGF抗体效价大于1∶32 000,SP抗体效价大于1∶40 000。结论:获得了MASP-2的EGF、SP两个功能区蛋白的多克隆抗体,特异性强,效价高。

人MASP1和MASP2 C端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1、2(MASP1、MASP2)C端片段。方法采用PCR技术从分别含人MASP1、MASP2cDNA的质粒pGEM-MASP1、pGEM-MASP2中扩增MASP1、MASP2C端基因片段,将其插入原核表达载体pET17b,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达MASP1、MASP2C端蛋白,通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行鉴定。结果分别从pGEM-MASP1和pGEM-MASP2中扩增到约1300bp的基因片段,构建成重组表达载体,经酶切出现约3300bp和1300bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr40000蛋白带,该蛋白可与抗His抗体反应。结论获得了重组人MASP1和MASP2C端片段蛋白及其表达菌株,为MASP分子的进一步研究提供了条件。

类风湿性关节炎患者血清MBL MASP-2和DKK-1水平变化与患者预后相关性

目的:研究类风湿性关节炎(RA)患者血清甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)和Dickkopf-1蛋白(DKK-1)水平变化及其与患者预后相关性。方法:选取2017年8月至2020年8月我院194例RA患者和102例健康体检者分别为研究组和对照组,检测入院时血清MBL、MASP-2和DKK-1水平,同时根据28个关节疾病活动评分(DAS28)将患者分为轻度组83例、中度组62例和重度组49例,按指南对RA患者给予达标治疗并根据疗效将患者分为达标组129例和未达标组65例,比较各组血清MBL、MASP-2和DKK-1水平,同时分析其对DAS28评分的影响和对疗效的预测价值。结果:研究组血清MBL和MASP-2水平低于对照组,血清DKK-1水平高于对照组;轻度组、中度组和重度组血清MBL和MASP-2逐渐降低,血清DKK-1水平和DAS28评分逐渐升高;达标组血清MBL和MASP-2水平高于未达标组,血清DKK-1水平低于未达标组,差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归分析显示,血清MBL和MASP-2水平为影响DAS28评分的重要因素(P<0.05)。血清MBL和MASP-2水平与RA治疗效果存在密切联系,RA治疗未达标的logistics回归模型为Y=12.573-0.722×血清MBL-0.090×血清MASP-2+0.792×血清DKK-1。血清MBL、MASP-2、DKK-1及三者联合检测预测RA疗效的AUC分别为0.896、0.825、0.693和0.958,敏感度分别为72.09%、67.44%、80.62%和89.15%,特异度分别为90.77%、81.54%、52.31%和90.77%。结论:RA患者血清MBL和MASP-2水平明显降低,血清DKK-1水平明显升高,且与病情变化密切相关,可为评估疗效和预后提供参考。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2基因的克隆与鉴定

目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶－２（ＭＡＳＰ－２）编码区基因。方法采用 ＲＴ－巢式 ＰＣＲ技术从 人胎肝组织总ＲＮＡ扩增目的cＤＮＡ片段，克隆人ｐＧＥＭ－Ｔ载体，酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号 顺序的ＭＡＳＰ－２肽链全长cＤＮＡ，将其与pＧＥＭ－Ｔ载体连接，转化大肠杆菌ＴＧ１，建立了ＭＡＳＰ－２的重组克隆。酶切图 谱与微机分析结果无异；序列分析表明，与报道的人 ＭＡＳＰ－２ｃＤＮＡ序列一致。结论成功克隆了人 ＭＡＳＰ－２基因，为深 入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。

应用SNPstream技术检测MASP2基因的多态性

目的:应用一种高通量单核苷酸多态性(SNP)检测方法——SNPstream技术检测甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP2)基因的多态性。方法:收集北京汉族人群SARS病例96例和正常对照96例,用SNPstream技术检测样本的MASP2基因多态性,并用PCR产物直接测序技术对其中一个位点rs2273346进行分型,以验证SNPstream技术的准确性。结果:192例样本的MASP2基因rs2273346位点SNPstream技术分型结果与测序结果完全相符,2种方法的基因型分型结果具有很好的一致性。结论:SNPstream技术是高通量SNP检测的良好工具,准确性高,所需样本量低,在大规模人群SNP筛检中具有良好的发展前景。

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础。方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定。结果:获得编码人MASP-2C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆。重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2C端的cDNA序列一致。结论:成功克隆了人MASP-2C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2C端多肽片段。

中国汉族人群MASP2基因单核苷酸多态性的连锁不平衡和单体型分析

目的:探讨中国汉族人群甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶(MASP2)基因单核苷酸多态性(SNP)的连锁不平衡和单体型,为相关研究提供更为详实的数据。方法:选取30例广州汉族无关个体,用重新测序的方法进行MASP2基因SNP的发掘,构建连锁不平衡(LD)模式,与HapMap公布的其他4个人群数据相比,并选择4个标签SNP(tagSNP)在232例北京汉族个体和291例广州汉族个体中分析MASP2的多态性和单体型。结果和结论:对MASP2的重测序共检测出16个SNP,LD分析显示来自中国不同地区人群的LD模式基本相同,与来自美国和日本的人群存在差异;北京和广州地区汉族人群tagSNP的等位基因和基因型频率分布不存在显著差异。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白,制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。方法利用带有CUB1、CUB2基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-CUB1和GST-CUB2融合蛋白并进行纯化,将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB/c雌性小鼠,制备多克隆抗体;应用Western blot法检测多克隆抗体特异性,应用ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功表达并纯化GST-CUB1和GST-CUB2蛋白;应用其作为抗原对小鼠进行免疫后,成功制备出与其相应的多克隆抗体,且特异性强,与其他蛋白无交叉反应;间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1∶32 000,CUB2抗体效价大于1∶16 000。结论成功制备了特异性强,效价高的GST-CUB1和GST-CUB2蛋白多克隆抗体。

MASP2在小儿上呼吸道感染中的意义

目的探讨血浆甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)水平在儿童上呼吸道感染(上感)中的意义。方法取103例上感患儿和35例健康体检儿童作为研究对象,测定其血浆MASP2和C反应蛋白(CRP)浓度并进行白细胞计数(WBC)。根据CRP和WBC值、感染不同时期及有无治疗,上感儿童分为CRP升高组(n=48)与正常组(n=54)、WBC升高组(n=61)与正常组(n=40)、感染早期未用药组(n=68)与感染中后期已用药组(n=35),对各组资料进行统计学分析。结果上感组MASP2浓度显著高于对照组(P<0.001),CRP升高组血浆MASP2浓度与CRP值正相关(r=0.310,P<0.05),WBC升高组MASP2水平与WBC值显著正相关(r=0.392,P<0.01),感染早期未用药组MASP2浓度显著高于感染中后期已用药组(P<0.01),MASP2、CRP、MBL2基因具有共同的转录因子HNF-4α结合位点。结论 MASP2蛋白可能为急性期蛋白,血浆MASP2水平可作为辅助诊断小儿上感的一个参考指标。

非小细胞肺癌患者血清中MASP-2检测的临床价值

目的通过检测血清中人甘露糖醇结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)-2在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的浓度水平,分析其作为NSCLC辅助诊断指标的临床价值。方法应用酶联免疫法和流式荧光法检测61名健康人、46例肺部良性疾病患者和139例NSCLC患者血清中MASP-2和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的浓度水平,分析联合检测血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC辅助诊断中的临床意义。结果 NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平明显高于肺部良性疾病患者和健康人,差异有显著统计学意义(Z=2.942,P<0.01);联合检测MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC中的灵敏度为64.0%,显著高于单一肿瘤标志物的阳性率(χ~2=7.714,P<0.01);血清MASP-2在Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC中检测的灵敏度为38.5%,显著高于Cyfra21-1(χ~2=6.212,P<0.05)。结论血清MASP-2在NSCLC的辅助诊断中具有较好的临床应用价值,联合MASP-2和Cyfra21-1可以提高NSCLC检测的灵敏度。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。

血清MASP2、MASP3在IgA肾病中的作用

目的:研究血清甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2、3(MASP2、MASP3)在IgA肾病(IgAN)患者血清中的表达及其在IgAN发病中的作用。方法:收集我院2016年9月至2017年3月首次经肾活检确诊的143例IgAN患者作为病例组,同期在我院体检科的60例健康体检者作为对照组。用ELISA方法测定血清MASP2、MASP3浓度,分析血清MASP2、MASP3浓度与各临床指标、牛津病理评分、IgA/C3免疫荧光沉积强度以及预后的关系。结果:(1)IgAN组与对照组血清MASP2浓度无统计学差异(Z=-0.347,P=0.729),IgAN组血清MASP3浓度高于对照组(Z=-3.8,P<0.001)。(2)与血清中等浓度MASP2(224.22,2540.50 ng/ml)的IgAN患者相比,血清低浓度MASP2(<224.22 ng/ml)患者肉眼血尿发生率更高(χ2=9.892,P=0.002),而血清高浓度MASP2(>2540.50 ng/ml)患者有更严重的蛋白尿(Z=-2.64,P=0.008)和更高的新月体评分(χ2=5.165,P=0.023)。(3)与血清低中量浓度MASP3(≤2512.83 ng/ml)的IgAN患者相比,血清高浓度MASP3(>2512.83 ng/ml)患者有更严重的蛋白尿(Z=-4.526,P<0.001),且系膜增生比例、毛细血管内增生比例、肾小管萎缩/间质纤维化比例、新月体比例较高(χ2=8.955,P=0.003;χ2=4.484,P=0.034;χ2=9.853,P=0.002;χ2=9.516,P=0.002)。(4)IgA荧光强度弱阳性组血清MASP2浓度高于强阳性组(Z=-2.546,P=0.011),不同C3荧光强度血清MASP2、MASP3浓度间差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)Kaplan-Meier生存曲线显示血清MASP2低浓度组和高浓度组患者肾脏生存率明显低于中等浓度组(P<0.05)。血清高MASP3浓度组患者肾脏生存率明显低于低中量浓度组(P<0.05)。结论:(1)血清中过高或过低浓度的MASP2在IgAN的发展中均起作用,MASP2可能在IgAN中具有多重作用机制。(2)血清中高浓度的MASP3可能促进了IgAN的进展。

MBL/MASP-2/P53在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况

目的:检测甘露糖结合凝集素(MBL)和相关的丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)及P53在胃癌组织及癌旁组织的表达情况。方法:收治胃癌患者60例,应用免疫组织化学技术检测胃癌组织及癌旁组织中MBL和MASP-2及P53的表达情况。结果:在胃癌组织,MBL和MASP-2均表现为低表达,而在癌旁组织高表达,差异有统计学意义(χ2=6.00,P<0.05)。P53主要在胃癌组织胞核中表达,P53阳性表达率51.66%(31/60)。结论:MBL和MASP-2在胃肿瘤及发生发展中表现了一定的作用。

非小细胞肺癌患者血清中MASP-2检测的临床价值

目的通过检测血清中人甘露糖醉结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)-2在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的浓度水平,分析其作为NSCLC辅助诊断指标的临床价值。方法应用酶联免疫法和流式荧光法检测61名健康人、46例肺部良性疾病患者和139例NSCLC患者血清中MASP-2和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的浓度水平,分析联合检测血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC辅助诊断中的临床意义。结果NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平明显商于肺部良性疾病患者和健康人,差异有显著统计学意义(χ^(2)=2.942,P<0.01);联合检测MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC中的灵敏度为64.0%,显著高于单一肿瘤标志物的阳性率(χ^(2)=7.714,P<0.01);血清MASP-2在I期和II期NSCLC中检测的灵敏度为38.5%,显著高于Cyfa21-1(χ^(2)=6.212,P<0.05)。结论血清MASP-2在NSCLC的辅助诊断中具有较好的临床应用价值,联合MASP-2和Cyfra21-1可以提高NSCLC检测的灵敏度。

颅脑损伤合并肺部感染miRNA表达谱与MASP-2位点rs72550870突变的关联

目的 探讨颅脑损伤合并肺部感染miRNA表达图谱及凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)位点rs72550870突变的关联.方法 前瞻性纳入2019年3月—2020年8月邢台市人民医院急诊收治的95例颅脑损伤患者为研究对象,根据其术后是否发生肺部感染分为感染组23例和非感染组72例;收集两组患者临床资料,检测其外周血中单个核细胞miRNAs表达谱,MASP-2基因多态性及MASP-2基因位点rs72550870检测,并利用Logistic回归模型进行相关性分析.结果 两组患者入院时格拉斯哥昏迷(GCS)评分≥8分、术后卧床时间≥4周、术前血清白蛋白水平及外周血单个核细胞miRNAs表达水平对比,均存在统计学差异(P<0.05);改变倍数≥2倍的miRNA总数为42,其中24个表达下调、18个表达上调;感染组患者外周血miR-146a、miR-155、miR-125b及miR-22-3p水平均高于未感染组(P<0.05);miR-146a、miR-155、miR-125b及miR-22-3p水平检测的曲线下面积(AUC)分别为0.759、0.866、0.746、0.784(P<0.05);感染组MASP-2基因位点rs72550870基因型AA分布频率及等位基因A分布频率均较非感染组偏高(P<0.05);MASP-2基因位点rs72550870的等位基因A及基因型AA与颅脑损伤患者术后并发肺部感染相关(P<0.05).结论 检测颅脑损伤患者的miRNA表达图谱可辅助临床评估其继发颅脑损伤的风险,其中MASP-2的位点rs72550870等位基因A和基因型AA突变是高危因素.

MASP-2基因多态性与2型糖尿病肺部感染的关联

目的分析甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)肺部感染的关联。方法收集2018年5月-2021年5月武汉市第一医院收治的274例T2DM患者临床资料,根据是否并发肺部感染分为并发肺部感染组80例和无肺部感染组194例,分析T2DM肺部感染患者病原菌分布情况,检测两组MASP-2基因rs2273346、rs6695096和rs72550870位点多态性,分析其与T2DM并发肺部感染的关系,并检测两组肺泡巨噬细胞人类白细胞抗原(HLA)-Ⅱ类抗原的表达。结果80例T2DM肺部感染患者共检出病原菌101株,其中革兰阴性菌占54.46%(55/101);肺部感染组MASP-2基因rs72550870位点AA基因型和A等位基因分布频率高于无肺部感染组(P<0.05),两组MASP-2基因rs2273346、rs6695096位点基因型和等位基因分布频率比较,无统计学差异;Logistic回归分析结果显示,rs72550870位点AA基因型是影响T2DM并发肺部感染的危险因素(P<0.05);肺部感染组携带MASP-2基因rs72550870位点AA基因型者HLA-DR、HLA-DQ抗原表达阳性占比均低于无肺部感染组(P<0.05)。结论T2DM肺部感染患者病原菌以革兰阴性菌为主,MASP-2 rs72550870位点AA基因型可能增加T2DM并发肺部感染风险,其作用机制可能与降低肺泡巨噬细胞HLA-Ⅱ类抗原表达有关。

血清甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2和半乳糖凝集素-3水平与老年肺腺癌患者淋巴结转移的相关性分析

目的观察老年肺腺癌患者血清甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(mannose-binding lectin associated serine protease-2,MASP-2)、半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)表达情况,探讨其对老年肺腺癌患者淋巴结转移的预测价值。方法117例老年肺腺癌患者均行手术治疗及术后组织病理检查,根据淋巴结转移情况分为转移组30例和未转移组87例,比较2组患者临床资料,采用电化学发光免疫分析法检测患者术前血清癌胚抗原、糖类抗原125水平,采用ELISA法检测患者术前血清MASP-2、Gal-3水平,采用一般线性双变量Spearman直线相关性分析老年肺腺癌患者血清MASP-2、Gal-3水平与癌胚抗原、MASP-2与Gal-3的相关性;绘制ROC曲线,评估术前血清MASP-2、Gal-3水平预测老年肺腺癌患者淋巴结转移的效能。结果117例老年肺腺癌患者30例发生淋巴结转移,发生率为25.64%;转移组术前血清癌胚抗原[22.54(19.31,24.65)μg/L]、糖类抗原125[40.12(38.05,44.47)u/mL]、MASP-2[377.63(372.91,388.86)μg/L]、Gal-3[3.77(3.42,4.58)μg/L]水平均高于未转移组[15.28(12.89,18.61)μg/L、35.08(33.96,37.03)u/mL、361.32(357.35,369.21)μg/L、2.85(2.33,3.46)μg/L](P<0.05);老年肺腺癌患者血清MASP-2、Gal-3水平与癌胚抗原均呈正相关(r=0.292,P=0.001;r=0.307,P=0.001),血清MASP-2水平与Gal-3呈正相关(r=0.194,P=0.036);术前血清MASP-2、Gal-3水平的最佳截断值分别为366.24μg/L、3.18μg/L时,单独及联合检测预测老年肺腺癌患者淋巴结转移的AUC分别为0.875(95%CI:0.800~0.951,P<0.001)、0.870(95%CI:0.805~0.936,P<0.001)、0.903(95%CI:0.836~0.970,P<0.001),灵敏度分别为86.7%、90.0%、93.3%,特异度分别为69.0%、62.1%、57.5%。结论老年肺腺癌淋巴结转移患者血清MASP-2、Gal-3水平增高,早期监测患者血清MASP-2、Gal-3水平对预测肺腺癌淋巴结转移有一定价值。

重组腺病毒载体pAd-4-hMASP-2的构建

目的利用p Yr-adshuttle-4质粒构建重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2。方法应用PCR技术扩增甘露糖凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(human mannan-binding lectin associated serine protease-2,h MASP-2)基因,经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后与p Yr-adshuttle-4质粒连接,构建穿梭质粒p Yr-ads-4-h MASP-2,在LR酶作用下与腺病毒骨架载体p Ad/PL-DEST进行体外同源重组,获得重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2,转染HEK293细胞,获得重组腺病毒r Adh MASP-2,应用酶切、PCR扩增及基因测序进行鉴定,并测定病毒滴度。将r Ad-h MASP-2感染小鼠,实时荧光定量PCR法检测h MASP-2基因m RNA在小鼠肺组织中的表达。结果重组穿梭质粒p Yr-ads-4-h MASP-2经双酶切及测序证实构建正确,通过同源重组获得了重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2,扩增出滴度为1.5×109 PFU/ml的重组腺病毒颗粒r Ad-h MASP-2,其能在小鼠肺组织中表达。结论成功获得重组腺病毒载体p Ad-4-h MASP-2和重组腺病毒颗粒r Ad-h MASP-2,为体内外研究h MASP-2的活性提供了有效的转基因载体。

载脂蛋白E及MASP-2基因多态性与颅脑损伤术后肺部感染易感性关系

目的探讨载脂蛋白E(APOE)及甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)基因多态性与颅脑损伤患者术后肺部感染易感性的关系。方法收集2018年12月-2019年12月武汉市普仁医院诊治的126例颅脑损伤患者临床资料,依据患者术后是否发生肺部感染分为感染组和未感染组。比较两组临床资料,检测两组样本APOE和MASP-2的基因多态性,分析APOE和MASP-2的基因多态性与颅脑损伤患者术后肺部感染易感性的相关性。结果126例颅脑损伤患者术后43例发生肺部感染,占34.13%;感染组与未感染组入院时GCS评分、术后卧床时间、术前血清白蛋白水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。感染组APOE等位基因ε3分布频率低于未感染组,而等位基因ε4的分布频率则高于未感染组(P<0.05)。感染组MASP-2基因位点rs72550870基因型AA分布频率和等位基因A分布频率高于未感染组(P<0.05)。多因素非条件Logistic回归分析提示APOE等位基因ε4和MASP-2位点rs72550870基因型AA和等位基因A与颅脑损伤患者术后肺部感染的发生有关(P<0.001)。结论APOE和MASP-2的基因多态性与颅脑损伤患者术后肺部感染易感性密切相关,其中APOE等位基因ε4和MASP-2位点rs72550870基因型AA和等位基因A的存在是颅脑损伤患者术后肺部感染风险增高的影响因素。