禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。

利用重组表位蛋白map0862-2154c检测牛副结核血清抗体胶体金免疫层析方法的建立（英文）

筛选牛副结核分枝杆菌的2个主要抗原map0862、map2154c中抗原指数高的抗原表位基因，将多表位基因序列合成，与原核表达栽体pET28a（＋）连接，构建重组质粒pET28a—map0862—2154c。重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中诱导表达，以表达的重组表位蛋白为抗原建立检测牛副结核分枝杆菌抗体的胶体金免疫层析方法（GIcA，map0862—2154c-GICA），同时对河北省部分牛场采集的242份副结核病奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明，牛副结核分枝杆菌表位蛋白map0862—2154c成功表达，表达产、物能与牛副结核分枝杆菌阳性血清反应。临床血清样本检测结果表明，其敏感性、特异性和符合率分别为91．86％（79／86），94．23％（147／156）和93．38％（226／242），该方法可用于牛副结核病的血清抗体检测。