鸡marco稳转巨噬细胞系的构建与鉴定

旨在通过慢病毒表达系统构建稳定表达marco基因的HD11细胞系,为研究marco基因的抗病毒免疫功能提供重要工具。首先,以HD11细胞为模板,通过PCR扩增获得marco基因编码区序列,并将其克隆到慢病毒载体上,获得重组慢病毒质粒pLV3-CMV-MCS-Puro-marco;其次,利用四质粒慢病毒包装系统将重组质粒pLV3-CMV-MCS-Puro-marco与辅助质粒pLP1、pLP2、pMD2.G共转染至293T细胞进行慢病毒包装,构建含鸡marco基因的重组慢病毒。最后,用包装成功的重组慢病毒感染HD11细胞72 h后进行嘌呤霉素(2μg·mL^(-1))筛选,通过RT-qPCR检测marco基因表达后最终确认获得稳定表达鸡marco基因的HD11细胞系。本研究成功构建了稳定表达鸡marco基因的HD11细胞系,为后续深入研究marco基因的功能提供了重要基础。