Maresin-1改善青少年期抑郁小鼠的抑郁样行为和神经炎症

目的:阐明Maresin-1(MaR1)对慢性社交挫败(chronic social defeated stress,CSDS)诱导青少年期(5~8周)小鼠抑郁样行为的影响,验证其在CSDS诱导的神经炎症中的作用,为理解抑郁症的分子机制和探索生物标志物提供参考。方法:利用多种方法来检测CSDS诱导10 d后C57BL/6J小鼠的抑郁样行为和神经炎症。并每2 d注射1次MaR1(5μg/kg)治疗小鼠,以观察其对CSDS诱导的抑郁样行为和神经炎症的影响。行为学实验后进行PET-CT扫描并对PET图像进行定量分析;收集小鼠脑组织样本进行免疫荧光染色,采用Image J对海马区域Iba-1细胞、TSPO免疫荧光强度进行统计;将小鼠海马体在冰上分离,并立即在液氮中快速冷冻,然后储存在-80℃下进行随后的RNA提取,试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)和IL-4含量。结果:与对照组相比,CSDS应激后,小鼠表现出低糖水偏好比(P=0.003)低社会交互比(P=0.000)、更长的不动时间(P=0.002),在海马区域,小胶质细胞活化,表现为SUV值升高(P=0.020),Iba-1和TSPO的免疫荧光强度增强(P=0.000)和促炎细胞因子IL-1β和TNF-α升高(P=0.016、0.036)。而MaR1改善了上述CSDS诱导的抑郁样行为,抑制小胶质细胞的激活和减少促炎因子的表达。结论:MaR1能够缓解CSDS诱导的青少年期小鼠抑郁样行为,抑制小胶质细胞的活化。神经炎症是青少年抑郁症的潜在致病因素,具有抗炎特性的药物如MaR1有潜力作为临床相关的抗抑郁药,需要进一步地研究。

糖尿病肾病患者血清Maresin1和PPBP水平表达与远期预后的相关性研究

目的探讨糖尿病肾病(diabetes nephropathy,DN)患者血清Maresin1和前血小板碱性蛋白(pro-plateletbasic protein,PPBP)表达水平及与远期预后的相关性。方法选取2018年5月~2020年5月唐山市中心医院收治的83例糖尿病肾病患者为糖尿病肾病组,并选取同期60例单纯2型糖尿病患者为糖尿病组和60例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Maresin1和PPBP水平,Spearman相关性分析血清Maresin1,PPBP与肾病理损伤的相关性,COX比例风险回归分析糖尿病肾病患者远期预后不良影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估血清Maresin1和PPBP对远期预后不良的预测价值。结果对照组、糖尿病组和糖尿病肾病组血清Maresin1水平(15.90±4.53ng/ml,12.34±4.29ng/ml,9.65±4.38ng/ml)依次降低,血清PPBP水平(263.45±85.22pg/ml,349.28±80.49pg/ml,435.76±87.21pg/ml)依次升高,差异具有统计学意义(F=35.159,72.678,均P<0.05)。随着IFTA评分、间质炎症评分、肾小球分级的增加血清Maresin1水平降低(F=25.838,25.187,9.751,均P<0.05),血清PPBP水平升高(F=56.513,92.702,58.137,均P<0.05),差异具有统计学意义。血清Maresin1与IFTA评分、间质炎症评分、肾小球分级呈负相关(r=-0.637,-0.581,-0.594,均P<0.05),血清PPBP与IFTA评分、间质炎症评分、肾小球分级呈正相关(r=0.659,0.664,0.608,均P<0.05)。糖尿病肾病病程(HR=1.135,95%CI:1.012~1.370)、24h尿蛋白(HR=1.087,95%CI:1.016~1.164)、PPBP(HR=1.208,95%CI:1.119~1.365)、IFTA评分(HR=1.139,95%CI:1.024~1.219)、间质炎症评分(HR=1.122,95%CI:1.006~1.249)和肾小球分级(HR=1.139,95%CI:1.052~1.273)是糖尿病肾病患者远期预后的独立危险因素;eGFR(HR=0.934,95%CI:0.892~0.993)和Maresin1(HR=0.903,95%CI:0.816~0.982)是远期预后的保护因素(均P<0.05)。血清Maresin1,PPBP及两指标联合预测糖尿病肾病患者远期预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.781,0.777和0.901,两指标联合预测的AUC高于单项指标预测,差异具有统计学意义(Z=3.049,3.258,均P<0.05)。结论糖尿病肾病患者血清Maresin1水平降低,PPBP水平升高,两指标与肾损伤程度密切相关,联合检测可有效预测患者远期不良预后。

Maresin-1对急性胰腺炎小鼠炎症因子及组织病理损伤的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路,探究Maresin-1对急性胰腺炎(AP)小鼠的影响。方法随机将50只小鼠分为假手术组(sham组)、急性胰腺炎组(AP组)、Maresin-1低剂量组(Mar-1 L组)、Maresin-1高剂量组(Mar-1 H组)和p38 MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组),每组各10只。除sham组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射雨蛙素联合脂多糖(LPS)建立AP模型;sham组注射等量0.9%氯化钠溶液。Mar-1 L组、Mar-1 H组和SB203580组分别在注射Maresin-1和SB203580雨蛙素3 h后,第1次腹腔注射Maresin-1(25、50 ng/kg)和SB203580溶液(5 mg/kg),12 h后进行第2次腹腔注射;sham组和AP组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、脂肪酶、炎性因子水平;试剂盒测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测胰腺组织中CD68表达;RT-qPCR检测胰腺组织炎性因子及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达。结果sham组小鼠胰腺组织结构完整,无细胞坏死和出血;与sham组比较,AP组可见胰腺组织结构紊乱,腺泡细胞水肿、坏死,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度升高,血清和胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平升高,IL-4、IL-10水平降低,巨噬细胞数增多(P均<0.05);胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与AP组比较,Mar-1 L组、Mar-1 H组、SB203580组胰腺损伤明显减轻,仅见腺泡细胞少量坏死与出血,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度降低,血清和胰腺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,IL-4、IL-10水平升高,胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平降低,巨噬细胞数减少(均P<0.05)。结论Maresin-1能够缓解AP小鼠胰腺组织病理损伤,减轻胰腺组织中性粒细胞和巨噬细胞浸润,降低胰腺及全身炎症反应,其可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路发挥作用。

Maresins在炎症性疾病中的作用研究进展

炎症是机体维持内环境稳态的防御反应,未能及时消退的炎症会引起不同炎症细胞因子相互作用,导致多种炎症相关疾病。研究促炎症消退机制已成为治疗慢性炎症的新方向。Maresins是由二十二碳六烯酸衍生而来的特异性促炎症消退介质(SPMs)的一类,通过促进中性粒细胞凋亡、增强巨噬细胞胞葬作用、调节Th17/Treg等促进炎症消退,本文对Maresins在不同炎症性疾病中的作用及机制进行综述。

Maresin1通过抑制NOD样受体家族蛋白3炎症小体活化改善糖尿病大鼠视网膜炎症反应

目的探讨Maresin1(MaR1)通过抑制NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的炎症反应来保护大鼠糖尿病视网膜病变(DR)。方法SPF级SD大鼠,建立糖尿病模型。按照随机数字表法分为4组:正常(Con)组、糖尿病(DM)组、MaR1组、MaR1+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(Nigericin)组。成模后,MaR1组4 ng/g MaR1腹腔注射给药,每周2次,Con组和DM组给予等量PBS注射。Nigericin组1 mg/kg Nigericin每天1次腹腔注射和4 ng/g MaR1每周2次腹腔注射联合给药。HE染色观察组织病理改变。免疫组化检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。ELISA测定视网膜白介素(IL)-18、IL-1β、IL-6水平。Western blot检测视网膜IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬酰胺特异酶半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)表达。结果DM组神经节细胞(RGC)数量明显少于Con组,GFAP表达高于Con组,IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平高于Con组,差异有统计学意义(P<0.05)。MaR1组RGC数量多于DM组,GFAP表达低于DM组,IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平低于DM组,差异有统计学意义(P<0.01)。然而在MaR1组基础上给予NLRP3激活剂Nigericin后,MaR1的保护作用被逆转。结论MaR1能够明显抑制DR炎症反应,这可能与抑制NLRP3炎症小体激活有关。

急性心肌梗死患者外周血Maresin-1表达及其与预后的关系

目的:检测急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者外周血Maresin-1表达水平并探讨其与AMI患者预后的关系。方法:选取我院2016年9月至2018年10月,收治的84例AMI患者为研究对象,同期在我院体检的84例健康体检者作为对照组,检测两组患者外周血Maresin-1的表达水平,分析Maresin-1表达水平与AMI患者发生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)的相关性。结果:AMI组患者外周血Maresin-1表达水平显著低于对照组的(P<0.05);Maresin-1低表达组患者的血清CK-MB峰值、cTnI峰值、BNP和Gensini评分显著高于Maresin-1高表达组,而LVEF显著低于Maresin-1高表达组(P<0.05);多因素Cox比例风险模型结果显示血清CK-MB峰值、cTnI峰值和BNP是AMI组患者Maresin-1表达水平的影响因素(P<0.05);Maresin-1低表达组患者MACE的累积发生率显著高于Maresin-1高表达组(P<0.05);外周血Maresin-1水平具有预测AMI患者MACE的价值(ROC曲线下面积为0.876)。当Maresin-1浓度为95.848 ng/L时的敏感性为92.6%,特异性80.6%。结论:AMI患者外周Maresin-1的表达水平显著降低,且Maresin-1低表达水平于AMI患者的不良预后相关。

Maresin1通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻糖尿病大鼠视网膜神经炎症反应

目的:探讨Maresin1(MaR1)对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经炎症的影响及其机制。方法:SD大鼠40只,随机分为4组:对照组(Con组)、糖尿病组(DM组)、Maresin1预处理组(MaR1组)和Maresin1+colivelin组(colivelin组)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DM大鼠模型。DM造模成功后,MaR1组大鼠给与MaR1(4 ng/g)腹腔注射,2次/周;Con组和DM组给予等量PBS腹腔注射;Colivelin组在MaR1组给药的基础上,将大鼠麻醉后用微量进样器向玻璃体内一次性注射colivelin 5μL(10^(-4)μmoL/L)。12周后取材。HE染色观察视网膜组织病理改变;免疫组化检测视网膜胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;ELISA测定视网膜IL-6、IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测视网膜IL-6、IL-1β、TNF-α、JAK2/STAT3通路表达水平。结果:与Con组相比,DM组大鼠视网膜的神经节细胞数量明显减少,GFAP表达增多,IL-6、IL-1β、TNF-α、p-JAK2、p-STAT3表达增多(P<0.01)。与DM组相比,MaR1组大鼠视网膜RGC数量增多,GFAP表达减少,IL-6、IL-1β、TNF-α、p-JAK2、p-STAT3表达降低(P<0.01)。与MaR1组相比,colivelin组大鼠视网膜的神经节细胞数量明显减少,GFAP表达增多,IL-6、IL-1β、TNF-α、p-JAK2、p-STAT3表达增多(P<0.01)。结论:MaR1对糖尿病大鼠视网膜炎症具有一定的抑制作用,这可能与抑制JAK2/STAT3通路有关。

Maresin 1在肺部炎症性疾病中的作用研究进展

炎症是很多肺部常见疾病如急性肺损伤、肺炎、肺纤维化、哮喘、肺癌等的共同病理生理学基础,靶向炎症反应启动及消退的发生机制将为治疗肺部炎症性疾病提供新的方向。炎症消退反应被证明是由一系列特异性促炎症消退脂质介质(specialized proresolving lipid mediators,SPMs)参与的主动过程。Maresin 1作为SPMs家族的一员,源自内源性二十二碳六烯酸(docosahexenoic acid)的兼具抗炎和促炎症消退活性的脂质活性介质。在许多炎症性疾病中均发挥了保护性作用。本文将结合近期的研究工作对Maresin 1在肺部炎症性疾病中的作用进行简要综述。

Maresin 1对脓毒症相关急性肾损伤的保护作用及机制实验研究

目的:研究Maresin 1对脓毒症相关急性肾损伤(S-AKI)的保护作用及相关机制。方法:SPF级雄性SD大鼠,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症大鼠模型。模型大鼠按随机数字表法分成CLP组、CLP+Maresin 1组、CLP+Maresin 1+Nigericin(NLRP3激活剂)组。另取正常大鼠作为Sham组。CLP+Maresin 1组、CLP+Maresin 1+Nigericin组大鼠于术后1 h单次腹腔注射Maresin 1(4 ng/g,溶于200μl 0.9%氯化钠溶液)。CLP+Maresin 1+Nigericin组在给予Maresin 1基础上联合单次Nigericin(1 mg/kg)给药。Sham组和CLP组给予200μl 0.9%氯化钠溶液。12 h后,采血用于血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)生化指标和血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM1)及炎症因子ELISA检测。HE染色检测肾脏病理改变。免疫组化和Western blot检测NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)表达变化。另取大鼠按照上述方法分组及治疗,统计大鼠7 d存活率。结果:与Sham组相比,CLP组Scr、BUN、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)及炎症因子水平明显增加,NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达明显上调,肾脏出现炎性损伤改变,大鼠7 d存活率明显降低(均P<0.05)。与CLP组相比,CLP+Maresin 1组Scr、BUN、NGAL、KIM-1及炎症因子水平明显降低,NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达明显下调,肾脏炎性损伤减轻,大鼠7 d存活率明显增加(均P<0.05)。然而,CLP+Maresin 1组给予Nigericin后,Maresin 1的保护作用被部分逆转。结论:Maresin 1对S-AKI具有保护作用,该机制与抑制NLRP3/Caspase-1轴有关。

新型抗炎介质Maresins的生物效应

炎症的启动、发展、消退是受到促炎性介质及内源性促消退介质调控的一系列主动过程。继发现由花生四烯酸衍生的脂氧素及从炎症消退阶段的炎性渗出物中分离出由ω-3多不饱和脂肪酸转化而来的消退素与保护素后,在自我消退炎性渗出物和脂质调控介质中最近发现了一个新的有效的抗炎家族称为maresins。maresins由内源性二十二碳六烯酸通过活化的巨噬细胞转化而成,在参与组织内环境平衡、炎症消退、切口愈合和减轻疼痛、机体防御等方面发挥有益的作用。

Maresin 1通过调控miR-340增强巨噬细胞吞噬功能

目的:研究促消退介质Maresin 1(Ma R1)在脓毒症模型中促进巨噬细胞吞噬功能的机制。方法:通过检测F4/80表达情况评估小鼠原代巨噬细胞纯度。体内外脓毒症模型验证脂多糖(LPS)和/或Ma R1对mi R-340表达的影响。骨髓巨噬细胞转染mi R-340模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor)后,q RT-PCR检测miR-340的表达量,评估转染效率。荧光显微镜及流式细胞仪检测小鼠原代巨噬细胞转染miR-340 mimic后巨噬细胞吞噬荧光微球能力的变化。最后收集临床样本检测脓毒症患者血浆中miR-340的表达与健康志愿者的区别。结果:经荧光显微镜和流式细胞仪鉴定小鼠原代巨噬细胞纯度达90%以上。体内外脓毒症模型均显示miR-340的表达明显升高(P<0.05)。脓毒症患者与健康志愿者相比血液中mi R-340的表达也显著增强(P<0.05)。荧光显微镜及流式细胞仪检测小鼠原代巨噬细胞转染miR-340 mimic后,巨噬细胞吞噬荧光微球的能力降低(P<0.05)。在体内外脓毒症模型中,Ma R1均明显降低miR-340的表达水平(P<0.05)。结论:Ma R1通过抑制miR-340的表达,增强巨噬细胞吞噬功能,在脓毒症病理生理过程中发挥抗炎促消退作用。

Maresin1对高糖损伤肾小球系膜细胞的影响及其抗炎作用机制探讨

目的观察Maresin1对高糖刺激小鼠肾小球系膜细胞炎症反应的影响及其对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活分泌炎症因子的抑制作用。方法培养小鼠肾小球系膜细胞株,NC组培养于低糖DMEM培养基中;OP组在低糖DMEM培养基中加入甘露醇;HG组培养于高糖DMEM培养基中;M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组分别用1、10、100 nmol/L的Maresin1预处理后在高糖培养基中培养;M3+NC组用100nmol/L的Maresin 1预处理30 min后在低糖DMEM培养基中培养;另设N-乙酰半胱氨酸(NAC)+HG组作为活性氧抑制作用的阳性对照。用全光谱分光光度计和荧光显微镜观察活性氧(ROS)表达情况;采用RT-PCR法检测NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达;采用Western blotting法检测NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达。结果与NC组相比,HG组细胞内ROS水平与NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达均增加,pro-Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达降低(P均<0.05);与HG组相比,M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组ROS水平与NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达均降低,pro-Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达均增加(P均<0.05),以M3+HG组作用最明显。与HG组相比,M3+HG组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达均降低,proCaspase-1、pro-IL-1β表达均增加(P均<0.05)。结论 Maresin1可抑制高糖刺激导致的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应及炎症反应,其机制可能与降低ROS水平、抑制NLRP3炎症小体及相关炎症因子的表达有关。

Maresin-1通过ALX/NF-κB通路促进巨噬细胞的自噬

目的:探讨促炎症消退介质maresin-1(MaR1)对巨噬细胞自噬的影响及其机制。方法:培养小鼠骨髓来源巨噬细胞,给予MaR1后,用激光扫描共聚焦显微镜技术观察LC3B聚集,用Western blot法测定LC3B与LC3A比值,用qPCR法测定ATG5、ATG7、BECN-1基因表达。用溶酶体抑制剂氯喹(CQ)、PI3K抑制剂(LY294002)、雷帕霉素、ALX抑制剂Boc-2分别预处理细胞后,测定beclin-1表达和LC3B与LC3A比值的变化。取p50-/-和WT小鼠,提取骨髓巨噬细胞,给予MaR1刺激,测定LC3B与LC3A比值的变化,及p50、p65的表达。结果:流式细胞仪测定结果显示F4/80和CD16的共表达达90%以上。巨噬细胞经MaR1作用后,LC3B的荧光强度明显增强,LC3B与LC3A的比值上升(P<0.05),ATG5、ATG7、BECN-1基因表达量增高(P<0.01)。经CQ或雷帕霉素预处理后,MaR1仍旧使巨噬细胞自噬增强。而加入LY294002预处理后,MaR1促进自噬的作用消失。经MaR1作用,巨噬细胞的p50表达量增多(P<0.01),且在p50-/-小鼠提取的巨噬细胞上,MaR1促进自噬的作用消失。结论:MaR1通过ALX/NF-κB通路促进骨髓来源的巨噬细胞的自噬。

Maresin1对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨Maresin1对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及机制。方法:将SD大鼠分为四组,每组10只。对照组(Control组)不做任何处理;糖尿病组(DM组)为单纯模型组;Maresin1预处理组(DM+Maresin1组)在成模8周后进行4 ng/g Maresin1腹腔注射给药,每周2次;DM+Maresin1+colivelin组在DM+Maresin1组基础上给予信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂colivelin 2 mg/(kg·d)腹腔注射。采用单次腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg制备糖尿病模型。12周后,采用全自动生化分析仪检测血糖、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。采用酶联免疫吸附试验检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平。取肾脏组织进行HE染色、Masson染色和PAS染色。采用Western blot检测核因子-κB(NF-κB)/STAT3通路相关蛋白表达水平。结果:与Control组相比,DM组血糖、Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65及p-STAT3水平明显增加(均P<0.05),肾脏病理损伤及纤维化严重。与DM组相比,DM+Maresin1组Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65及p-STAT3水平明显下降(均P<0.05),肾脏病理损伤及纤维化减轻。经colivelin处理后,Maresin1对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用出现部分逆转(均P<0.05)。结论:Maresin1对糖尿病大鼠肾脏损伤具有保护作用,其机制与抑制NF-κB/STAT3信号通路有关。

促炎症消退介质Maresin1对高糖环境下肾小球系膜细胞纤维化的干预作用观察

目的观察促炎症消退介质Maresin1对高糖环境下肾小球系膜细胞纤维化的干预作用。方法体外培养小鼠肾小球系膜细胞株,将细胞分为NC组、OP组、HG组、M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组、M2+NC组。NC组、OP组、M2+NC组于低糖DMEM培养基中培养,OP组加入甘露醇,M2+NC组以10 nmol/L的Maresin1预处理;HG组、M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组于高糖DMEM培养基中培养,M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组分别以1、10、100 nmol/L的Maresin1预处理。培养48 h后采用RT-PCR法检测各组细胞中的葡萄糖转运蛋白1(GluT-1)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))mRNA,采用ELISA法检测细胞上清液中的纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原。结果HG组细胞中G1uT-1、TGF-β_(1) mRNA表达及上清液FN、Ⅳ型胶原水平高于NC组、M2+NC组(P均<0.05);M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组细胞中G1uT-1、TGF-β_(1) mRNA表达及上清液FN、Ⅳ型胶原水平低于HG组,且M1+HG组、M2+HG组、M3+HG组呈递减趋势(P均<0.05)。结论高糖环境下小鼠肾系膜细胞中GluT-1、TGF-β_(1)表达增高,FN、Ⅳ型胶原分泌增多;10 nmol/L的Maresin1可明显抑制GluT-1、TGF-β_(1) mRNA表达及FN、Ⅳ型胶原水平,进而减少肾脏细胞外基质聚集,抑制肾间质纤维化。

Maresin 1对肝缺血再灌注损伤的影响及机制研究

目的 探讨Maresin 1(MaR1)对肝缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 将24只Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、肝缺血再灌注损伤组(I/R组)、MaR1治疗组(I/R+MaR1组)、抗磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY294002组(I/R+MaR1+LY294002组),每组6只。I/R组、I/R+MaR1组及I/R+MaR1+LY294002组大鼠通过阻断肝左叶及中叶血流60 min,再灌注6 h建立肝缺血再灌注损伤模型。Sham组仅开腹和关腹,不阻断血流,I/R+MaR1组在肝缺血再灌注前1 h腹腔注射4 mg/kg MaR1,I/R+MaR1+LY294002组在肝缺血再灌注前30 min腹腔注射LY294002 0.5 mg/kg,其余处理同I/R+MAR1组。检测各组小鼠肝组织病理学改变,血肝功能、炎性反应和氧化应激反应的指标。Western blot法检测肝组织磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果 与Sham组比较,I/R组肝损伤明显,而I/R+MaR1组肝损伤明显减轻。与Sham组比较,I/R组血清中ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平均升高,肝组织中丙二醛(MDA)水平升高,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)水平均降低(均P<0.05)。与I/R组比较,I/R+MaR1组血清中ALT、AST、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低(均P<0.05),肝组织MDA水平均降低,而IL-10、SOD、CAT、GSH水平升高(均P<0.05)。与Sham组比较,I/R组p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达均升高(均P<0.05),而I/R+MaR1组p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达进一步增加(均P<0.05)。然而,上述MaR1的治疗作用被PI3K抑制剂LY294002逆转。结论 MaR1通过上调PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路抑制炎性反应及氧化应激反应,进而减轻肝缺血再灌注损伤。

Maresin-1对脓毒症器官保护作用的研究进展

脓毒症是宿主对感染产生的炎症反应失控而导致的致命性器官功能障碍。过度炎症反应是脓毒症发生发展的核心环节,器官功能损伤程度与脓毒症预后直接相关,及时干预过度炎症反应、缓解器官功能损伤是改善脓毒症预后的关键。Maresin-1(MaR-1)是一种新近发现的内源性特异性促炎症消退介质,可在脓毒症中发挥抗炎、促炎症消退及器官保护作用,可能是脓毒症治疗的新靶点。本文就MaR-1参与脓毒症炎症调控的机制及其器官保护作用的相关研究进展进行综述,以期为临床研发新的脓毒症治疗药物提供参考依据。

Maresin 2对小鼠蛛网膜下腔出血早期的神经保护作用研究

目的:探讨Maresin 2(Mar2)注射对蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期的神经保护作用及机制。方法:将134只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为Sham组(12只)、Vehicle组(22只)、Mar2组(57只)、牛磺熊去氧胆酸钠(Tau)组(29只)和Tau+Mar2组(14只),其中Mar2组又分为低(Low;2μg/kg/d;14只)、中(Middle;10μg/kg/d;29只)、高(High;50μg/kg/d;14只)剂量3个亚组。采用改良血管内穿刺法制备SAH模型,在SAH造模后6 h腹腔注射Mar2;Tau组,按照0.5 g/kg/d的剂量腹腔注射Tau,连续注射3 d;Tau+Mar2组,腹腔注射Tau后2 h,再腹腔注射中剂量的Mar2。完成注射后对各组小鼠进行神经功能评分、脑出血评分和脑组织含水量测定,FJB染色评估神经元变性数量,免疫荧光染色观察星形胶质细胞和小胶质细胞的数量变化,Western blotting检测神经元中内质网应激蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-3的表达,荧光实时定量PCR(qPCR)检测脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6炎症因子的变化。体外培养Neuro2a神经元,根据实验采用血红素(Hem)或Tau(CHOP特异性抑制剂)进行干预,并分为对照组、Hem组、Hem+Tau组、Hem+Tau+Mar2组。Western blotting检测各组神经元表达CHOP和caspase-3水平;酶联免疫法检测活性氧(ROS)的水平。结果:Mar2注射显著改善神经功能缺损、减轻脑水肿,抑制神经元凋亡,中剂量(10μg/kg/d)即可达到最佳治疗效果。Western blotting结果显示Mar2可以抑制皮质CHOP和caspase-3的表达;免疫荧光染色结果显示,Mar2可以抑制星形胶质细和小胶质细胞的活化增多;qPCR检测结果显示,Mar2注射可显著减少炎症因子IL-1β、IL-6的表达。体外实验显示,血红素可诱导神经元中CHOP和caspase-3的显著上调和ROS的合成增多;Mar2处理可以显著抑制神经元CHOP和caspase-3的表达。高剂量Tau处理可以显著抑制神经元中CHOP和caspase-3的表达,Tau+Mar2处理不能进一步降低CHOP和caspase-3的表达。结论:Mar2注射能抑制SAH小鼠神经元的凋亡、减轻脑水肿并改善神经功能缺损,具体机制可能与Mar2抑制神经元CHOP的活化,下调caspase-3的表达并减轻神经炎症有关。

Maresin 1抑制核因子κB/胱天蛋白酶-3/焦孔素E信号途径减轻肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨Maresin 1(MaR1)在肝缺血再灌注损伤(HIRI)中的作用。方法建立HIRI模型,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、MaR1缺血再灌注组(MaR1+IR组)。在麻醉前0.5 h尾静脉注射MaR180 ng/只,打开腹腔夹闭左、中肝叶动脉和门静脉,缺血1h后恢复供血,再灌注6 h后处死小鼠收集血液、肝组织,Sham组仅打开、关闭腹腔。RAW267.4巨噬细胞在缺氧前0.5 h给予MaR150 ng/ml,行缺氧8 h复氧2 h,分为对照组(Con组)、缺氧复氧组(HR组)、MaR1缺氧复氧组(MaR1+HR组)、Z-DEVD-FMK缺氧复氧组(HR+Z组)、MaR1+Z-DEVD-FMK缺氧复氧组(MaR1+HR+Z组),Con组未做任何处理,收集细胞和上清液。组间比较采用单因素方差分析,其中两两比较采用LSD-t检验。结果与Sham组相比,IR组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平明显升高(P<0.05),病理改变明显;MaR1+IR组水平较前降低(P<0.05)、病理改变减轻。与Con组比较,HR组IL-1β和IL-18水平升高(P<0.05),MaR1+HR组IL-1β和IL-18水平较前降低(P<0.05)。蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶(caspase)-3、焦孔素(GSDM)E、GSDME-N蛋白的表达,HR组和IR组明显高于其他组,经MaR1预处理后表达降低。为了探究MaR1在HIRI中的机制,用Z-DEVD-FMK抑制caspase-3的表达。与HR组比较,HR+Z组IL-1β和IL-18水平降低(P<0.05),caspase-3、GSDME、GSDME-N表达减少、核因子κB表达增加,经MaR1预处理后核因子κB表达降低。MaR1+HR组与MaR1+HR+Z组比较,结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论MaR1通过抑制核因子κB活化、caspase-3/GSDME介导的炎性反应,减轻HIRI。

Pro-resolving lipid mediator reduces amyloid-β42–induced gene expression in human monocyte–derived microglia

Specialized pro-resolving lipid mediators including maresin 1 mediate resolution but the levels of these are reduced in Alzheimer's disease brain, suggesting that they constitute a novel target for the treatment of Alzheimer's disease to prevent/stop inflammation and combat disease pathology. Therefore, it is important to clarify whether they counteract the expression of genes and proteins induced by amyloid-β. With this objective, we analyzed the relevance of human monocyte–derived microglia for in vitro modeling of neuroinflammation and its resolution in the context of Alzheimer's disease and investigated the pro-resolving bioactivity of maresin 1 on amyloid-β42–induced Alzheimer's disease–like inflammation. Analysis of RNA-sequencing data and secreted proteins in supernatants from the monocyte-derived microglia showed that the monocyte-derived microglia resembled Alzheimer's disease–like neuroinflammation in human brain microglia after incubation with amyloid-β42. Maresin 1 restored homeostasis by down-regulating inflammatory pathway related gene expression induced by amyloid-β42 in monocyte-derived microglia, protection of maresin 1 against the effects of amyloid-β42 is mediated by a re-balancing of inflammatory transcriptional networks in which modulation of gene transcription in the nuclear factor-kappa B pathway plays a major part. We pinpointed molecular targets that are associated with both neuroinflammation in Alzheimer's disease and therapeutic targets by maresin 1. In conclusion, monocyte-derived microglia represent a relevant in vitro microglial model for studies on Alzheimer's disease-like inflammation and drug response for individual patients. Maresin 1 ameliorates amyloid-β42–induced changes in several genes of importance in Alzheimer's disease, highlighting its potential as a therapeutic target for Alzheimer's disease.