珠母贝线粒体全基因组密码子偏好性分析

【目的】探究珠母贝(Pinctada margaritifera)线粒体全基因组密码子的使用偏好性,明确密码子偏好性的影响因素,为提高珠母贝外源基因表达效率及种质资源保护与遗传育种的研究提供理论依据。【方法】选取珠母贝线粒体基因组中大于300 bp的10条非重复编码序列,利用CodonW 1.4.2、Excel、SPSS 22.0等软件分析序列的密码子偏好性参数,以同义密码子相对使用度差值(△RSCU)> 0.08以及在高表达基因库中RSCU值>1.00为标准筛选最优密码子。【结果】珠母贝线粒体基因组密码子第1位GC(GC1)比例为35.2%~51.8%,平均值为45.6%;第2位GC(GC2)比例为35.8%~46.8%,平均值为40.0%;第3位GC(GC3)比例为37.7%~51.8%,平均值为44.1%;总GC比例为41.1%~47.5%,平均值为34.9%。密码子的适应指数(CAI)为0.119~0.181,平均值为0.151。密码子的偏好性指数(CBI)为-0.184~-0.04,平均值为-0.1048。最优密码子使用频率(FOP)为0.259~0.359,平均值为0.322。有效密码子数(ENC)为39.72~54.35,平均值为47.46。总平均亲水性Gravy)为0.216 6~1.038 5,平均值为0.7412。相对密码子使用度(RSCU)> 1.00的密码子数目为26个,主要以U(T)/G结尾。中性绘图、ENC-plot绘图和对应性分析均表明,珠母贝线粒体基因组密码子偏好更多受选择压力的影响。AGG、AUU、CCU、GAG、GCU、UGA等6个密码子为最优密码子。【结论】珠母贝线粒体基因组密码子偏好以U(T)/G结尾,筛选的6个最优密码子主要以U(T)/G结尾。珠母贝线粒体全基因组密码子的偏好性为弱偏好性,自然选择是偏好性形成的主要影响因素。

野生黑蝶贝表型性状对体质量的影响分析

随机选取3~4龄野生黑蝶贝128只,对其壳长（L1）、壳高（L2）、壳宽（L3）、韧带长（L4）和体质量（m）进行测量,计算各性状间的相关系数,采用相关分析、通径分析方法计算了以壳长、壳高、壳宽和韧带长为自变量对因变量体质量的相关系数、通径系数和决定系数,得出不同表型性状对体质量的影响效果。试验结果表明,相关性分析中,对体质量的相关系数大小依次为壳高〉壳长〉壳宽〉韧带长（P〈0.01）;通径分析中,壳高对体质量作用最大（0.589）,其次是壳宽（0.278）和壳长（0.143）;壳高对体质量的直接决定系数最大（0.347）,其他依次为壳宽（0.077）、壳长（0.02）和韧带长（0.0001）,总决定系数为r2=0.854;利用回归分析方法建立回归方程：m=-364.554＋0.858xL1＋3.032xL2＋4.371xL3。通过对黑蝶贝壳高、壳宽进行选择,同时加强对壳长的协同选择来选育生长较快、适于插核育珠的黑蝶贝新品系,为黑蝶贝选择育种提供理论依据。

珠母贝人工培育黑珍珠的影响因素分析

采用不同术前处理方法、不同贝龄和不同珠核规格的实验条件,探讨珠母贝(Pinctadamargaritifera)育珠效果的影响因素。术前处理方法包括温差促排和阴干促排,贝龄设为1.5龄、2.0龄、2.5龄和3.0龄,珠核直径设为5.5mm、6.0mm、6.5mm和7.0mm。经1个月的休养和21个月的育珠,结果显示,休养与育珠期间,温差促排、阴干促排和未处理组间的成活率没有显著性差异(P>0.05),但留核率、收珠率和优珠率存在显著性差异(P<0.05),其中温差促排组和未处理组分别具有最高和最低的留核率、收珠率和优珠率;4个贝龄组的成活率、留核率和收珠率存在显著性差异(P<0.05),其中1.5龄组具有最高的成活率,2龄组具有最高的留核率和收珠率,3龄组具有最低的成活率、留核率和收珠率;4个珠核规格组间的成活率、留核率和收珠率存在显著性差异(P<0.05),其中6.0mm组和7.0mm组分别具有最高和最低的留核率和收珠率。研究结果说明,术前处理具有明显提高珠母贝植核贝的成活率、留核率和收珠率;珠母贝第一次植核的最适贝龄应是1.5～2龄;珠母贝第一次植核的珠核适宜规格为6.0mm。本研究旨在为优质珍珠的培育提供理论参考。

珠母贝幼虫运动、自然沉降及摄食行为

主要通过分析幼虫形态变化、幼虫运动、自然沉降及摄食行为等生物学信息,为珠母贝(Pinctada margaritifera)幼虫培育设施及饵料投喂策略提供优化思路。在显微镜下观察不同日龄幼虫形态变化、幼虫运动状态、测量幼虫运动速率,观察幼虫静置下自然沉降及幼虫对单胞藻摄食过程。结果显示,幼虫依靠面盘外周纤毛摆动维持运动并完成摄食,运动时幼虫开壳朝上,壳顶朝下,面盘伸出壳外牵引幼虫运动。俯视观幼虫绕一定半径的圆顺时针方向运动,垂直方向螺旋上升或下降。水平运动速率范围246.88~3641.94μm/s,运动速率v(μm/s)与壳长l(μm)之间存在的关系为v=-0.0841l2+37.2690l-2149.1031(R^2=0.9707),运动速率与环绕半径显著相关(P<0.05)。随着幼虫生长,体重增加,面盘逐渐退化,面盘纤毛摆动难以维持幼虫悬浮,静置时幼虫沉降率增加,13 dph(days post hatching,孵化后天数)后沉降至底部的幼虫壳长显著(P<0.05)大于悬浮幼虫。幼虫饵料投喂过多,导致饵料不消化或不完全消化就排出体外,以致摄食的饵料不能完全消化利用。

珠母贝亲贝催熟培育和催产技术的研究

对不同来源珠母贝(Pinctada margaritifera)亲贝分别进行海上浅吊疏养促熟和室外水泥池人工催熟培育,且采用阴干、藻液、温度、低盐度刺激和异性产物诱导亲贝排放精卵,比较不同方法、不同来源亲贝性腺发育及亲贝开始排放时间、排放率、受精率和幼虫畸形率情况。结果表明,室外水泥池人工催熟法亲贝性腺成熟度比浅吊疏养促熟法好、死亡率低;相同培育方法,北部湾亲贝比海南亲贝性腺成熟快,但死亡率高;阴干刺激3 h+藻液刺激1 h+异性产物诱导,性腺达到第四期(排放期)的亲贝才排放,且排放的性细胞成熟度好,受精率高,幼虫畸形率低。

基于COI条形码序列的珍珠母及其混伪品的DNA分子鉴定

目的:探讨应用COI条形码序列对珍珠母及其混伪品进行物种鉴定的可行性。方法:用MEGA4.0等软件计算珍珠母及其混伪品种内及种间变异,构建珍珠母及其混伪品的NJ树。结果:珍珠母种内COI序列变异小,种间存在较多的变异位点,种间的遗传距离显著大于种内的遗传距离。通过构建的系统聚类树图可以看出,珍珠母不同来源个体均聚在一起,能够与其混伪品区分开。结论:基于COI序列的DNA条形码技术可以很好的鉴定珍珠母的正品来源及其混伪品。

几种微藻对珠母贝面盘幼虫生长和存活的影响

研究了不同浓度的湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensisHu&Liu)、亚心形扁藻[Platymonas subcordiformis(Wille)Hazen]、小球藻(Chlorellasp.)以及这3种微藻以一定的比例混合后(简称混合藻)对珠母贝面盘幼虫生长和存活的影响.结果表明:幼虫对3种微藻都能摄食,但4种饵料相比,以湛江等鞭金藻和混合藻的饵料效果为好,亚心形扁藻在面盘幼虫发育到93μm时可以投喂,小球藻饵料效果较差,不宜单独作为面盘幼虫的饵料;湛江等鞭金藻、亚心形扁藻和混合藻的浓度对面盘幼虫生长和存活都有显著影响,小球藻对其没有显著的影响.湛江等鞭金藻和混合藻适宜的投喂浓度分别为1 000-1 500个/?3和1 500-2 000个/?3,在适宜浓度下,湛江等鞭金藻组面盘幼虫最大生长速度、存活率和壳初率以及幼虫进入壳初的时间分别为5.663μm/d、69.34%、63.68%、6d,混合藻组为6.28μm/d、69.46%、54.49%、5-6 d.

解剖采集的珠母贝精子的激活条件

解剖成熟珠母贝 (Pinctadamargaritifera)并采集其精子 ,在不同 pH、盐度和温度条件下进行激活实验。结果显示 ,水温 2 5℃、盐度 34、pH 8.5以下时 ,珠母贝精子的激活率与活力均很低 ,pH 9.0～ 10时激活率与活力均较高 ,pH 9.5时的激活率最高 ;在水温 2 0℃ ,盐度 34时珠母贝精子只能在pH 9.5～ 10激活 ,且激活率与活力均比 2 5℃时低。在水温 2 5℃ ,pH 9.5时 ,精子在盐度 10～ 4 5能激活 ,盐度 2 5～ 35时激活率和活力很高 ;在水温 2 0℃ ,pH 9.5时 ,精子只能在盐度 2 0～ 4 0时激活。当盐度相同 ,2 0℃时的激活率与活力比 2 5℃时低。在 pH 9.5或 10的氨海水中 ,珠母贝精子在水温 5～ 4 5℃时能激活 ,在 2 5～ 30℃时激活率较高。当温度相同 ,pH 9.5时的激活率比pH 10 .0时高。解剖得到的珠母贝精子的适宜激活 pH为 9.5、适宜盐度为 2 5～ 35、适宜温度为 2 5～ 30℃。

清开灵不同组分对大鼠MCAO模型脑组织中肿瘤坏死因子的影响特征

目的:观察清开灵不同组分对MCAO大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNF-R)含量的影响,探讨其抗脑缺血损伤的机制。方法:采用MCAO模型,应用RIA检测脑组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α含量,ELSIA检测脑组织sTNF-R含量。结果:缺血24h,胆酸组、栀子苷组、珍珠母组及合方组的脑组织中TNF-α含量显著降低(与模型组比P<0.05或P<0.01)。缺血12h,珍珠母组、黄芩苷组和胆酸组脑组织中sTNF-R的含量显著高于模型组(P<0.05或P<0.01);而缺血24h,胆酸组与合方组脑组织中sTNF-R的含量显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:清开灵四种组分及合方可以抑制TNF-α的合成与分泌,对脑缺血后的级联反应具有阻抑作用;而各不同组分对sTNF-R的作用较为复杂,在缺血12h,珍珠母、黄芩苷和胆酸可刺激sTNF-R的合成与分泌,而到缺血后24h,各给药组脑组织中sTNF-R的含量却表现为下降趋势。

珠母贝人工苗养殖研究

在不同海区、不同水层养殖珠母贝人工苗,及用不同方法进行养殖小贝。结果表明:在开放性、半开放性、内湾性海区养殖11个月后,珠母贝壳高分别为64.5、51.4、69.8 mm,成活率分别为6.4%、0.8%、0.5%,其生长和成活率具有显著差异(P<0.05);同海区中3m、6m、9m、12m、15m水层养殖11个月后,珠母贝壳高分别为64.5、67.4、62.8、56.9、51.9mm,成活率分别为6.4%、6.8%、8.1%、11.7%、13.9%,随着水层的加深,珠母贝的生长变慢,成活率提高且差异显著(P<0.05);6个月龄小贝用穿耳法、片笼法、锥型笼法养殖5个月后,壳高分别长成56.1、55.7、51.7mm,成活率分别为72.6%、59.9%、51.7%,其生长和成活率具有显著差异(P<0.05)。

珍珠母镇静催眠作用及其不同炮制品对小鼠脑内5-羟色胺浓度的影响

目的探讨珍珠母的镇静催眠作用及其不同炮制品对小鼠5-羟色胺(5-HT)浓度的影响。方法腹腔注射PCPA,观察其对小鼠的催眠作用;ELISA法测定小鼠脑干匀浆液中5-HT的浓度。结果珍珠母的生品、烘烤品和超微粉品均能减少小鼠自主活动的次数,延长小鼠睡眠的时间,能够增加小鼠脑干内5-HT浓度,其中超微粉作用最强。结论珍珠母具有镇静、催眠作用,其作用机制与增加小鼠脑干内5-HT浓度有关。

珠母贝人工苗中间培育的研究

2004年6-9月,分别采用不同养殖方法、光照度和水层对珠母贝人工苗进行中间培育。试验结果表明：不同养殖方法的成活率和壳高存在显著的差异（P〈0.05）,拱形笼吊养法、柱形笼吊养法、网箱法、开放式吊养法成活率分别为9.4%、27.3%、24.5%、0,壳高分别为26.5、31.4、29.8 mm、-,拄形笼吊养法和网箱法生长快且成活率较高;不同光照度对稚贝的壳高和成活率的影响显著（P〈0.05）,自然光组、800-1000 lx、300-500 lx成活率分别为24.7%、29.6%、36.5%,壳高分别为29.8、28.3、33.6 mm;2-3 m、4-5 m、6-7 m、8-9 m水层成活率分别为27.3%、29.1%、33.6%、38.9%,随着水层的加深而提高（P〈0.05）,壳高分别为31.4、30.6、29.5、30.2 mm,差异不显著。

盐度对珠母贝幼虫和稚贝存活和生长的影响

为了解珠母贝早期发育阶段最适存活和生长条件，于2013年5—6月在珍珠贝养殖场进行不同海水盐度对珠母贝直线铰合期幼虫、壳顶期幼虫和稚贝生长及存活的影响实验。结果表明：珠母贝直线铰合期幼虫存活适宜盐度为2285—3886，最适盐度为2719—3502，壳长增长的适宜盐度为2043—4123，最适盐度为3110；壳顶期幼虫存活适宜盐度为2310-3914，最适盐度为2719—3502，壳长增长的适宜盐度为2029—4009，最适盐度为3110·3502；稚贝存活适宜盐度为2064—3910，最适盐度为2719—3502，壳长增长的适宜盐度为1938—4130，最适盐度为2719—3110。

珠母贝人工育苗技术的初步研究

2002年3月1日于海南陵水县黎安港湛江海洋大学珍珠试验站 ,在珠母贝年龄偏小、性腺发育尚未十分饱满的情况下 ,选取雄性2只、雌性10只 ,通过人工催产的方法 ,促使2雄8雌排放精卵 ,受精率为86.36 % ,受精后20h胚胎发育为直线绞合幼虫。在水温23.5～29.7℃ ,盐度30.6,pH8.1的条件下 ,幼虫经66d的培育 ,共出池3mm±0.3mm的珠母贝苗126.8万只 ,初步取得了珠母贝人工育苗试验的成功。

珠母贝、亲贝人工促熟培育与催产的研究

从23 ～24 ℃开始,每4～5 d升高水温1 ℃,终至26～27 ℃,并用亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)、三角褐指藻(Phaeodactylar triconrutum)及辅助饲料投喂培育,促进珠母贝[Pinctada margaritifera (Linne)]亲贝性腺发育成熟.用阴干刺激、异性产物刺激及浓扁藻液结合诱导,催产率达100%.

中药不同组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱的影响

目的运用蛋白质组学技术分析中药不同组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱的影响。方法黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母分别干预缺血再灌小鼠3h后,断头取脑,提取蛋白,用蛋白质芯片比较分析以上组分对小鼠缺血脑组织蛋白表达谱影响的差异。结果黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母可影响5373Da, 5707Da,15103Da 3个靶点蛋白的表达,中药对蛋白表达具有多靶点性和差异性。结论蛋白质芯片技术是探索中药药理机制的有效手段。

珍珠母不同炮制品对小鼠抗抑郁作用研究

目的研究珍珠母生品、烘烤品、超微粉对小鼠的抗抑郁作用。方法采用小鼠悬尾实验研究珍珠母不同炮制品的抗抑郁作用。结果在小鼠悬尾实验中,珍珠母生品高剂量组,烘烤品低剂量组、中剂量组和高剂量组,超微粉低剂量组、中剂量组和高剂量组均能减少小鼠悬尾的完全不动时间;在AMPT诱导的小鼠悬尾实验中,珍珠母不同炮制品高剂量组均能减少小鼠悬尾完全不动时间。结论珍珠母有一定的抗抑郁作用。

珠母贝人工繁育优化技术的研究

在室内水泥池分别进行了移池培育、不同种类附着器、光照强度、水流和冲洗对珠母贝附着幼虫变态和稚贝存活的研究，结果表明：附着密度为2．18个／cm^2±0．50个／cm^2时，移池培育，其变态幼虫密度为0．95个／cm^2±0．13个／cm^2，20d稚贝存活密度0．41个／cm^2±0．08个／cm^2，移池培育显著提高附着幼虫变态和稚贝存活；附着板、附着绳、网片、小石块变态幼虫密度分别为0．70个／cm^2±0．08个／cm^2、1．38个／cm^2±0．15个／cm^2、0．97个／cm^2±0．12个／cm^2、1．04个／cm^2±^0．28个／cm^2，稚贝存活密度分别为0．36个／cm^2±0．06个／cm^2、0．62个／cm^2±0．07个／cm^2、0．45个／cm^2±0．07个／cm^2、0．60个／cm^2±0．08个／cm^2，附着绳显著提高附着幼虫变态和稚贝存活；光照强度为300-600lx时变态幼虫密度为0．87个／cm^2±0．07个／cm^2，20d稚贝存活密度0．45个／cm^2±0．08个／cm^2，强光不利于幼虫的变态和稚贝存活；水流速为2．3cm／s时变态幼虫密度为1．08个／cm^2±0．07个／cm^2，20d稚贝存活密度0．87个／cm^2±0．07个／cm^2，冲洗的变态幼虫密度为1．64个／cm^2±0．19个／cm^2，20d稚贝存活密度1．00个／cm^2±0．12个／cm^2，水流或冲洗显著提高附着幼虫变态和稚贝存活。

黑蝶贝苗种中间培育技术的初步研究

以黑蝶贝野生群体人工繁育苗种为研究材料,探索了大、小两种规格和不同吊养深度对黑蝶贝苗海区中间培育的影响。将壳长、体质量分别为（4.12±0.019）mm、（0.07±0.008）g,（2.02±0.012）mm、（0.03±0.005）g两种规格黑蝶贝吊养于2m、4m、5m区,每组黑蝶贝500枚,养殖水温23.09~29.77℃,养殖海区水深8~10m。每隔30d随机抽取50枚贝苗测量壳高、壳长、壳宽、体质量。经180d中间培育,壳长（4.12±0.019）mm的黑蝶贝生长速度明显大于壳长（2.02±0.012）mm的黑蝶贝,表明壳长（4.12±0.019）mm的黑蝶贝出池移入海区养殖较理想。同一规格贝苗在2m、4m、5m养殖水层的成活率差异不显著（P〉0.05）,而3个不同养殖水层中不同规格贝苗养殖成活率差异显著（P〈0.05）。该研究结果为进一步开展黑蝶贝苗种人工繁育提供了重要参考。

电感耦合等离子体质谱法测定三种贝壳类药材中稀土元素含量

目的 建立测定珍珠母、石决明和牡蛎中15种稀土元素含量的方法.方法 供试品经微波消解后,以铟和铑为内标,用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定.结果 各元素在相应范围内线性良好（r＞0.999）,精密度好（RSD＜4%,n＝6）,各元素加样回收率为97.0%～105.0%.结论 ICP-MS法检出限低,简便快捷,准确可靠,是贝壳类药材中稀土元素含量测定的可行方法.