Chromatographic Analysis of Thiophenes in Calli and Suspension Cultures of Tagets spp.

The thiophene isomer fractions were investigated by TLC （thin layer chromatography） and GLC （gas liquid chromatography）. The TLC analysis revealed that, 5-（4-acetoxy-l-butynyl）-2,2-bithenyl （BBTOAc, Rf 0.78 I）; 5-（3-buten-l-ynyl）-2,2-bithineyl （BBT, Rf 0.39 II） and 2,2,5,2-oc-terthienyl （∝-T, Rf 0.32 III） were detected in extracts of leaf, stem and root calli or suspension cultures of Tagetes erecta and T. patula as well as leaf cell culture of T. patula which treated with DL-tryptophan under light or dark conditions. The GLC quantitative analysis of thiophenes in subjected revealed that the percentage distribution of the major thiophenes in all the analysed samples were determined as follows： BBT II 〉 ∝ -TllI 〉 BBTOAc I. Another thiophene was determined in relatively small amounts and found to be 5-（3-penten-l-ynyl）-2,2-bithienyl （PBT IV）. Other thiophenes were quantitated in trace amounts with unidentified or unknown chemical structure from the investigated extracts.

基于RAW264.7细胞模型的槲皮万寿菊素与叶黄素协同改善急性肺损伤的作用机制

为解析槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独处理以及联合处理对急性肺损伤的作用机制,以脂多糖诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,以一氧化氮(nitric oxide,NO)相对含量为评价指标,采用联合指数法确定槲皮万寿菊素与叶黄素以及槲皮素与叶黄素的最佳复配比例;分析比较槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独及联合处理对RAW264.7细胞中炎症因子(肿瘤坏死因子-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6)含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响;采用免疫印迹法测定核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路中p65、p50以及沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)的相对表达量。结果表明,槲皮万寿菊素与叶黄素高剂量3∶1(30μg/mL+10μg/mL)复配能够最大程度降低RAW264.7细胞中的NO相对含量。二者单独及联合作用均能通过降低炎症因子、丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽还原酶活性,下调NF-κB p65、p50以及NLRP3表达水平并上调SIRT1、Nrf2蛋白相对表达量发挥改善急性肺损伤的作用,且联合处理效果优于单独处理组。

HPLC同时测定万寿菊花中叶黄素及玉米黄素的含量

目的:建立一种同时测定万寿菊花中叶黄素及玉米黄亲含量的HPLC方法。方法:采用Develosil C_(30)色谱桂(250 mm×4．6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈(49:51),内含0．05％三乙胺,流速1．0 mL·min^(-1),检测波长450 nm。结果:叶黄素和玉米黄素分别在5．0～80．0和2．0～32．0μg·mL^(-1)的浓度内峰面积呈良好的线性关系(r分别为0．9998,0．9997),平均回收率分别为99．25％(RSD=2．1％,n=9)和99．41％(RSD=2．3％,n=9)。结论:本法简便准确、重现性好,可用于万寿菊花中叶黄素及玉米黄素的含量测定。

外源钙对盐碱胁迫下万寿菊生长及光合特性的影响

【目的】探究外源CaCl_(2)对盐碱胁迫下万寿菊生长和光合特性的影响,为应用CaCl_(2)提高盐碱地上万寿菊栽培效率和产品品质提供理论支撑。【方法】以万寿菊幼苗为试材,设置浇灌清水(CK_(1))、根灌80 mmol/L混合盐碱溶液(CK_(2))和根灌盐碱后叶面喷施4种浓度CaCl_(2)溶液处理(5,10,15,20 mmol/L)进行盆栽试验,观测植株生长表型、叶片光合色素含量、光合气体交换参数和叶绿素荧光参数。【结果】随着盐碱胁迫时间延长,万寿菊植株的株高、茎粗、根系构型和根冠比呈逐渐上升趋势,叶片净光合速率(P_(n))、蒸腾系数(T_(r))、气孔导度(G_(s))、叶绿素总量(Chl_(t))和最大光化学效率(F_(v)/F_(m))等均呈下降趋势,而胞间CO_(2)浓度(C_(i))呈上升趋势,但这些指标在叶面喷施不同浓度CaCl_(2)后变化幅度均有所降低,并均以10 mmol/L CaCl_(2)处理效果最佳。在胁迫第20天时,10 mmol/L CaCl_(2)处理叶片Chl t、P_(n)、T_(r)、G_(s)、F_(v)/F_(m)分别比CK_(2)显著升高46.78%、45.53%、49.51%、49.57%和32.83%,其根冠比和C_(i)则分别显著降低22.60%和30.91%。【结论】叶面喷施10 mmol/L CaCl_(2)可显著减轻盐碱胁迫下万寿菊叶片叶绿素含量降幅,提高PSⅡ的电子传递速率,增强叶片的光合能力,有效改善植株生长。

镁螯合肥对万寿菊生长及产量品质的影响

目的:研究镁螯合肥对万寿菊花生长及产量品质的影响,筛选最适施用量。方法:采用单因素随机区组设计,以清水为对照,设置5个浓度处理进行叶面喷施。结果:喷施1200倍液镁螯合肥对花直径影响显著;喷施1000倍液花鲜产量最高,为21973.3 kg/hm^(2),较CK高49.5%,第一茬和第二茬花中黄酮、多酚和叶黄素含量分别为50.09、54.54、6.86 mg/g和58.48、60.09、7.82 mg/g,灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物分别为5.97%、0.48%、29.19%、25.82%和5.74%、0.44%、28.33%、26.94%。结论:喷施镁螯合肥可促进万寿菊的生长,提高其产量和品质,1000倍液镁螯合肥效果最佳。

植物生长调节剂对万寿菊种子萌发和幼苗生长的影响

为提高万寿菊种子发芽率并培育健壮幼苗,以色素万寿菊韩春梅为材料,采用二因素完全随机试验设计,共设置5种植物生长调节剂处理(赤霉素、水杨酸、烯效唑、赤霉素+水杨酸、水杨酸+烯效唑)和4个浸种时长(3、6、12、24 h)处理,同时以加入等量蒸馏水为对照,研究不同组合对万寿菊种子萌发、植株生长、光合色素及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,浸种时间为6 h,均能促进万寿菊种子萌发;添加赤霉素、烯效唑和赤霉素+水杨酸处理后,发芽率分别提升12.00%、6.67%和17.77%,其中,烯效唑处理后万寿菊株高矮化、茎粗增大、地上部鲜质量/干质量、地下部鲜质量/干质量及壮苗指数均显著增加。此外,烯效唑浸种6 h后,叶绿素a、b含量及可溶性糖含量增长量较大,与对照相比分别升高35.28%、24.61%和17.42%,MDA含量较对照降低10.73%,且差异显著。隶属函数综合评价分析显示,烯效唑浸种6 h效果最佳(D值=0.86)。综上所述,烯效唑浸种6 h,不仅提高了万寿菊种子发芽率、增强了幼苗光合作用、积累了更多有机物质,还减少了细胞膜脂过氧化损伤,该处理有利于培育万寿菊健壮幼苗。

甘肃省陇东地区万寿菊种植气候适应性研究

为了研究分析陇东地区在万寿菊种植期,最高温度、最低温度、农业界限温度、积温、初终霜日、无霜期等农业热量资源及气象要素对万寿菊生长发育速度、产量形成的影响,运用不同移栽期万寿菊产量对比试验分析方法,探索了万寿菊种植生产中规避霜冻等气象灾害的途径和方法,筛选出最有利于万寿菊生长发育的最佳移栽期,通过分析研究提出了陇东地区万寿菊种植的生态气候区划,达到了提高气候资源利用率、趋利避害、提产增效的目的。在规避冻害的前提下,尽早移栽,以延长生育期增加鲜花产量,获得更高的种植效益。陇东地区万寿菊适宜移栽期受温度影响,各地差异较大,移栽期最长相时差约30 d,主要集中在5月上、中旬。研究发现地形因子和不同的气候年型对万寿菊移栽也有较大的影响。

TeLCYB基因的番茄遗传转化分析

万寿菊(Tagetes erecta L.)中含有类胡萝卜素,不仅可用于天然色素提取,还是研究类胡萝卜素合成代谢的植物材料。番茄红素β-环化酶(lycopene beta cyclase,LCYB)是类胡萝卜素合成代谢途径中的一个关键酶,文章通过对万寿菊中TeLCYB基因克隆、植物表达载体构建、并利用农杆菌介导法进行番茄遗传转化,获取TeLCYB基因转化番茄植株。分子鉴定和表型分析结果表明,万寿菊TeLCYB基因在番茄中表达,并改变转基因番茄果实颜色。高效液相色谱测定显示,TeLCYB基因的表达显著增加了番茄果实中β-胡萝卜素的量。该文研究结果表明TeLCYB基因具有功能活性,可用于改良植物果实的色素营养品质。

不同光周期处理对万寿菊鲜花产量及品质的影响

为了提高万寿菊育苗后对光周期适应性,规避不利气候因素危害,选用万寿菊品种色素1号为指示品种,在播种育苗期设置了长、中、短3个光周期处理(长光周期,光照16 h/黑暗8 h;中光周期,光照12 h/黑暗12 h;短光周期,光照8 h/黑暗16 h),从种子萌发开始至第3对真叶完全展开期间持续处理,成苗后移栽到田间自然光周期中生长,观测了万寿菊株高、直径、主茎叶片数、鲜花产量及叶黄素含量。结果表明,中光周期(光照12 h/黑暗12 h)处理至3叶期移栽到田间的万寿菊顶花可见期各性状指标表现良好、产量较高,为19507.0 kg/hm^(2),干花叶黄素含量最高,为4.425 g/kg。

万寿菊不同部位多酚、黄酮含量及抗氧化活性的研究

本文以万寿菊为研究对象,采用超声提取万寿菊不同部位(花、茎、根)中的多酚、黄酮类物质并进行含量测定,并研究它们的抗氧化活性。利用单因素实验分别对提取溶剂、溶剂浓度、料液比、提取时间等影响因素对万寿菊茎中多酚和黄酮含量进行评价。结果显示:80%甲醇溶液作为提取溶剂,料液比1∶80(g/mL),超声提取周期40 min为最佳提取工艺。通过该工艺测得万寿菊花、茎、根各部位中多酚含量分别为15.34、2.04、1.03 mg/g,黄酮含量分别为44.10、2.69、3.38 mg/g,DPPH自由基清除能力的抗氧化活性的IC50分别是1.03±0.03 ng/L、68.5±5.01 mg/mL、98.90±18.91 mg/mL,抗氧化活性:花>茎>根;ABTS+自由基清除能力的抗氧化活性分别为1.34±0.02 ng/L、139.4±9.01 mg/mL、92.30±16.80 mg/mL,抗氧化活性:花>根>茎。进一步相关性统计分析表明,万寿菊不同部位提取物中多酚含量对DPPH和ABTS自由基清除能力表现出显著的正相关,而黄酮含量与其抗氧化活性相关性不显著。

Design-Expert软件设计优化万寿菊黄酮提取工艺及抗氧化活性、抑菌活性测定

以万寿菊为原料,采用负压协同超声波辅助提取万寿菊黄酮,并对其抗氧化活性进行研究。以万寿菊黄酮得率为指标,在单因素基础上,通过Design-Expert软件设计响应面试验,得到最佳工艺条件为负压0.08 MPa、超声功率402 W、超声时间30 min,在此条件下,万寿菊黄酮得率为5.18%。万寿菊黄酮的抗氧化活性结果表明,随着浓度的增加,万寿菊黄酮对DPPH自由基和羟基自由基的清除能力逐渐增强,当其浓度为250 μg/mL时,对DPPH自由基的清除率为81.73%,对羟基自由基的清除率为83.28%,表明万寿菊黄酮具有较强的抗氧化能力。万寿菊黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有一定的抑菌作用,最低抑菌浓度分别为1.0 mg/mL和1.5 mg/mL,且随着浓度的增加而不断增强。

万寿菊雄性不育两用系抗氧化酶活性分析

为了解万寿菊雄性不育两用系活性氧代谢的特点,本研究以万寿菊雄性不育两用系2-2为试验材料,分别测定不育株和可育株在不同生长时期叶片及花蕾的过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)4种抗氧化酶的活性及丙二醛(MDA)和抗坏血酸(AsA)的含量,分析育性与抗氧化酶活性、抗氧化物质的关系。结果表明:叶片中可育株的POD、APX、CAT活性总体高于不育株,花蕾横径在1.1~1.5 cm时,4种抗氧化酶均表现为不育株高于可育株,不育株抗氧化物质MDA、AsA含量逐渐积累,说明抗氧化酶和抗氧化物质的变化与万寿菊的育性密切相关。本研究为万寿菊雄性不育的成因提供了一定的理论依据,为雄性不育两用系进一步高效制种、育种奠定了基础。

叶面菌肥对色素万寿菊幼苗生长的影响

为了提高色素万寿菊的幼苗质量,研究了叶面喷施不同浓度生物菌肥对色素万寿菊幼苗生长及移栽成活率的影响。结果表明:喷施叶面肥可促进色素万寿菊幼苗生长,其中生物菌肥Ⅰ和生物菌肥Ⅱ2种生物菌肥的效果均优于0.04%尿素,尤以喷施稀释150倍的生物菌肥Ⅰ(C150处理)的效果较好,能显著增加幼苗茎粗、一级分枝数、叶长、叶绿素相对含量(SPAD值)、冠幅和全株鲜重等指标值,分别为3.28 mm、2.33个、9.80 cm、53.60、17.50 cm和5.01 g;同时,各叶面肥处理的移栽成活率显著高于清水处理(CK1)。因此色素万寿菊苗期叶面喷施稀释150倍的生物菌肥Ⅰ有壮苗效果,并能显著提高移栽成活率。

万寿菊胡萝卜素羟化酶基因 TeCHYE 克隆与分析

α-胡萝卜素ε环羟化酶(α-caroteneε-ring hydroxylase,CHYE)是植物类胡萝卜素合成途径下游关键酶,催化叶黄素的形成。万寿菊(Tagetes erecta L.)是菊科园艺作物,富含类胡萝卜素,尤其是叶黄素,可用于天然色素的提取。文章根据万寿菊的转录组数据,通过花组织RNA提取、反转录合成cDNA,以克隆获得编码万寿菊α-胡萝卜素ε环羟化酶的基因TeCHYE,连接于克隆载体pEASY-Blunt。序列分析结果显示,该基因为读码框全长1656 bp、编码相对分子质量约62 kDa的亲水性蛋白。进化分析表明,CHYE基因在植物中保守存在,万寿菊TeCHYE与同科植物向日葵HaCHYE同源性最高。进一步对万寿菊叶片、不同发育时期花组织中叶黄素的质量比及其TeCHYE基因表达水平进行分析,结果显示,TeCHYE在花的发育过程中表达水平显著升高,表明其参与了叶黄素在万寿菊花中的合成积累。

万寿菊属不同品种初花期抗旱特性分析

以万寿菊属(Tagetes)9个品种为试验材料,研究了自然持续干旱胁迫对它们初花期的花最大直径、叶色、旱害指数等形态指标以及叶绿素含量(Chl a+b,Ch a/b)、叶片相对含水量(RWC)、叶片保水力(WHC)、叶片和花的脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量等生理指标的影响,以揭示其抗旱特性及其生理机制.结果显示:(1)持续6d干旱胁迫条件下,万寿菊9个品种花的最大直径显著降低,叶绿素含量和相对含水量均呈明显下降趋势.(2)万寿菊叶片的脯氨酸、可溶性蛋白和可溶性糖含量均呈上升趋势;而花的脯氨酸含量持续上升,可溶性蛋白含量呈下降趋势,但可溶性糖含量变化趋势复杂.(3)万寿菊旱害指数与其叶片相对含水量、叶绿素总含量、叶片和花的脯氨酸含量、叶片可溶性蛋白含量呈极显著相关.研究表明,抗旱性强的品种可以通过调节自身的渗透调节物质含量减轻干旱伤害;9个品种初花期抗旱性强弱依次为:珍妮>金门>鸿运>拳王>巨人>发现>小英雄>大英雄>迪阿哥.

基于ITS序列对万寿菊叶斑病病原菌的分子鉴定

采用改良的CTAB法提取万寿菊(Tagetes erecta L.)叶斑病病原菌总DNA,以ITS1和ITS4为引物扩增病原菌的ITS片段,PCR扩增产物纯化后测序并与数据库中的已知序列进行BLAST比对,构建分子系统发育树,对该病原菌进行分子鉴定。结果显示分离的万寿菊叶斑病病原菌ITS序列与GenBank中万寿菊链格孢(Alternaria tagetica)AF267134的ITS序列相似度为99%,在分子系统发育树上与万寿菊链格孢菌株聚为一支,结合形态特征确定分离的万寿菊叶斑病病原菌为万寿菊链格孢。

万寿菊杂交一代遗传多态性的SRAP标记分析

应用SRAP（sequence-related amplified polymorphism）分子标记对当前市场上推广的48个万寿菊杂交一代品种进行遗传多态性研究，用60个引物组合进行扩增，从中筛选到20个多态性引物组合，共产生289个多态性条带，平均每个引物组合产生14．45个多态性条带，显示了较高的多态性比率。聚类分析20个引物组合的扩增结果，48份材料分为两大类，Jaeeard’s相似系数在0．25～0．91之间。

万寿菊中叶黄素的三种提取方法比较

为了探索万寿菊(Tagetes erecta L.)中叶黄素的提取工艺,采用水浴加热法、超声波法、微波法3种方法从万寿菊中提取叶黄素,并以叶黄素得率作为标准,确定最优提取方法。结果表明,超声波法提取叶黄素明显优于其他2种方法,含量可达到21.91 mg/g。利用超声波法进行叶黄素的提取,可以大大提高提取效率。

酶为介质有机溶剂提取万寿菊花中叶黄素的工艺研究

以万寿菊(Tagetes erecta)花粉末为原料,采用液态纤维素酶处理和有机溶剂萃取同时进行的方法提取叶黄素,研究并优化此过程的工艺条件。试验结果表明:酶为介质有机溶剂提取万寿菊花中叶黄素工艺条件受多种因素影响,其中提取时间、萃取前保温时间、酶浓度、搅拌速度对提取过程影响较大。确定酶法提取较适宜的工艺条件为:2.000 g粒度60目的万寿菊花粉末、液态纤维素酶浓度为7%(m/m)、液料比为20∶1、萃取前保温时间为1.5 h、搅拌速度为700 r/min、提取时间为3 h,对此工艺条件进行验证叶黄素提取率可达92.37%。而单纯的有机溶剂法叶黄素提取率仅为77.53%,此方法明显优于单纯的有机溶剂法。

万寿菊提取叶黄素专用品种筛选及配套技术研究

通过选定的 5个品种的比较 ,筛选出适合作为生产叶黄素的专用品种‘990 2 2’、‘990 0 1’及‘991 46’,这些品种花期长、鲜花产量高、色素含量高 ,均适于上海及其周边地区种植 ;花色越深 ,叶黄素含量也相对越高。单花重、单株鲜花重和鲜花总产量尽管品种间存在较大差异 ,但所选出的 3个品种均以 740 0 0株 /hm2密度处理的表现最高。通过本研究还提出了相应的万寿菊栽培方案。