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《动物分子遗传标记》实验教学设计与实践
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作者 房希碧 刘博群 +4 位作者 张金玉 潘英树 闫守庆 丁雪梅 官员 《畜牧兽医杂志》 2024年第3期75-78,81,共5页
基于“新农科”动物生产类专业创新型复合畜牧人才培养的需求,将CRISPR/Cas9介导的基因敲除小鼠模型引入动物分子遗传标记实验课程中,设计了基因缺失分子标记检测与分析实验,采用基于PBL的混合式教学模式,学生能系统掌握基因组DNA提取、... 基于“新农科”动物生产类专业创新型复合畜牧人才培养的需求,将CRISPR/Cas9介导的基因敲除小鼠模型引入动物分子遗传标记实验课程中,设计了基因缺失分子标记检测与分析实验,采用基于PBL的混合式教学模式,学生能系统掌握基因组DNA提取、PCR扩增技术、琼脂糖凝胶电泳分析、基因型判定等相关理论和实验技术,将多门专业课程的实践环节有机结合,促进了学生理论知识与实验技能的融会贯通,激发了学生的学习热情,提升了专业认同感,培养了综合素质和创新能力。 展开更多
关键词 分子遗传标记 基因缺失鉴定 实验设计 混合式教学
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鸡血藤ISSR体系优化及引物筛选
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作者 李金梅 王一婷 +4 位作者 潘丽梅 黄晓东 谭勇 汝梅 刘雯 《湖北农业科学》 2024年第1期206-211,共6页
以鸡血藤的入药部位藤茎为试验材料,采用改良CTAB法进行DNA提取,利用正交试验和单因素试验对ISSR-PCR反应体系进行优化和构建。结果表明,鸡血藤最佳ISSR-PCR反应体系为DNA模板60 ng,Taq酶2.00 U,Mg2+浓度1.75 mmol/L,dNTP浓度0.25 mmol... 以鸡血藤的入药部位藤茎为试验材料,采用改良CTAB法进行DNA提取,利用正交试验和单因素试验对ISSR-PCR反应体系进行优化和构建。结果表明,鸡血藤最佳ISSR-PCR反应体系为DNA模板60 ng,Taq酶2.00 U,Mg2+浓度1.75 mmol/L,dNTP浓度0.25 mmol/L,引物浓度0.20 μmol/L,最佳退火温度44.6℃。从100条ISSR引物筛选出20条适合鸡血藤的ISSR引物。 展开更多
关键词 鸡血藤 ISSR 分子标记 引物筛选 正交设计 体系优化
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Marker-assisted Selection of ZmC_4Ppc in Rice Breeding and Yield Trait Performances of Advanced Lines 被引量:1
3
作者 XIANG Xun chao LI Ji hang +1 位作者 HE Li bin Li Ping 《Rice science》 SCIE 2007年第3期181-188,共8页
The full-length of intact Zea mays gene for phosphoenolpyruvate carboxylase gene (ZmC4Ppc) is 6 781 bp. The products of PCR for this gene were not clear with poor repeatability, resulting in that it was difficult fo... The full-length of intact Zea mays gene for phosphoenolpyruvate carboxylase gene (ZmC4Ppc) is 6 781 bp. The products of PCR for this gene were not clear with poor repeatability, resulting in that it was difficult for marker-assisted selection (MAS) both in rice and maize. For selecting the markers for MAS, sequences presented only in maize rather than in rice were identified by BLAST, and used for primer design using Primer Premier 5.0. A pair of specific primer termed MRpc (Forward: 5' AAGCAGGGAAGCGAGACG 3', Reverse: 5' GATTGCCGCCAGCAGTAG 3') was used for selection of transformed rice, and ZmC4Ppc could be highly and constitutively expressed at each tested developmental stages in the transformed rice selected by using MRpc. Thus, MRpc was used for MAS of progenies carrying ZmC4Ppc gene in rice and some restorer lines with ZmC4Ppc (e.g. FPM881) derived from ZmC4Ppc-transformed Kitaake backcrossed with a restorer line Shuhui 881 were obtained. The analyses on genetic background, PEPCase activity, net photosynthetic rate, general combining ability (GCA) and specific combining ability (SCA) of FPM881 showed that similarity of genetic background reached above 95%, the PEPCase and net photosynthetic rate were higher than those of the control, and some of the progenies carrying ZmC4Ppc gene had better GCA and SCA for grain yield per plant, number of panicles per plant, and 1000-grain weight than those of the control. This suggested that the introduction of maize ZmC4Ppc gene via MAS and its stable expression could increase grain yield of rice and would likely provide a pathway for rice varietal improvement. 展开更多
关键词 rice Zea mays gene for phosphoenolpyruvate carboxylase primer design marker-assisted selection varietal improvement phosphoenotpyruvate carboxylase activity net photosynthetic rate general combining ability specialcombniing ability
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Breeding by Design^(TM)
4
作者 A.P. Sφrensen M. van Haaren A. van Tunen 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第2期234-234,共1页
The development of high throughput molecular marker technologies and automated scoring of multiple markers simultaneously has opened the possibilities for the development of highly saturated molecular
关键词 表型 基因型 分子标记 育种技术
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图像融合技术在基于黄金基准标志物的前列腺癌放疗中的应用综述
5
作者 赵建诚(综述) 田龙(审校) 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1038-1042,共5页
图像融合技术已广泛应用于基于黄金基准标志物(GFM)的前列腺癌(PCa)图像引导放疗(IGRT)中。图像融合技术包括了CT影像、磁共振影像和超声影像内部或外部的融合。图像融合技术的应用提高了GFM的辨识准确度,同时有助于PCa放疗的计划设计... 图像融合技术已广泛应用于基于黄金基准标志物(GFM)的前列腺癌(PCa)图像引导放疗(IGRT)中。图像融合技术包括了CT影像、磁共振影像和超声影像内部或外部的融合。图像融合技术的应用提高了GFM的辨识准确度,同时有助于PCa放疗的计划设计。本文对近年来多种医学影像的融合在PCa IGRT中的应用进行了系统性综述。其中,着重对图像融合技术在GFM的辨识中的应用和效果,以及对PCa放疗计划设计的影响进行了介绍。希望本综述能够为图像融合技术同PCa IGRT的更深入结合提供一定的理论参考。 展开更多
关键词 图像融合 前列腺癌 图像引导放疗 黄金基准标志物 辨识 计划设计
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武汉市测量标志管理信息系统设计与实现
6
作者 徐磊 孙伟 +1 位作者 贾伟定 姚鹏 《测绘技术装备》 2023年第4期156-160,共5页
测量标志类别多、分布广、点难找、巡查周期长,同时,传统电子文档和纸质文件的测量标志管理方式会产生数据管理不便、查询难、易冲突和大量重复性工作等问题。为此,本文结合工作实际需求,利用数据库将测量标志基本信息、点之记、调查信... 测量标志类别多、分布广、点难找、巡查周期长,同时,传统电子文档和纸质文件的测量标志管理方式会产生数据管理不便、查询难、易冲突和大量重复性工作等问题。为此,本文结合工作实际需求,利用数据库将测量标志基本信息、点之记、调查信息和维护信息进行存储管理,并利用浏览器/服务器(B/S)架构将内、外业数据进行统一管理。其中,管理端用于管理测量标志信息,具有依据测量标志类型导出点之记、调查登记表、维护登记表和导出移动端调查维护工程等功能;移动端将待调查或维护的测量标志展示在地图上,可供工作人员实时查看点之记和上一期调查维护信息,方便外业寻点,同时,还可供工作人员对调查维护信息进行现场记录和拍照,并导入管理端,完成信息更新,提高测量标志外业巡查及内业数据处理的效率。 展开更多
关键词 测量标志 信息化 系统设计 管理系统 外业巡查
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正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选 被引量:42
7
作者 郑轶琦 王志勇 +2 位作者 郭海林 薛丹丹 刘建秀 《草业学报》 CSCD 2008年第4期110-117,共8页
以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳... 以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260μmol/L、引物0.25μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 假俭草 SRAP标记 正交试验设计 体系优化 引物筛选
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火龙果IRAP分子标记反应体系的建立与优化 被引量:11
8
作者 陶金 乔光 +2 位作者 文晓鹏 刘涛 彭志军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期33-38,共6页
基于火龙果Ty1-copia类反转录转座子的长末端重复序列信息设计引物,采用5因素4水平L16(45)的完全随机正交试验,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和DNA含量进行优化,建立火龙果IRAP分子标记反应体系。结果表明,25μL... 基于火龙果Ty1-copia类反转录转座子的长末端重复序列信息设计引物,采用5因素4水平L16(45)的完全随机正交试验,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和DNA含量进行优化,建立火龙果IRAP分子标记反应体系。结果表明,25μL反应体系含基因组DNA 20ng、2.5mmol/L MgCl2、0.10mmol/L dNTPs、10×PCR Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶0.75U、0.25μmol/L LTR引物,0.080g/mL的非变性PAGE胶适于IRAP多态性检测。 展开更多
关键词 火龙果 反转录转座子间扩增多态性标记 正交设计
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狗牙根SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量:31
9
作者 王志勇 袁学军 +1 位作者 刘建秀 郭海林 《草业学报》 CSCD 2008年第3期79-85,共7页
利用正交设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板DNA浓度来优化狗牙根SRAP-PCR反应体系,并对引物进行了全面筛选。狗牙根SRAP-PCR优化反应体系结果为:2μL 10×buffer4、0 ng模板DNA、Mg2+1.25 mmol/L... 利用正交设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板DNA浓度来优化狗牙根SRAP-PCR反应体系,并对引物进行了全面筛选。狗牙根SRAP-PCR优化反应体系结果为:2μL 10×buffer4、0 ng模板DNA、Mg2+1.25 mmol/Ld、NTP 260μmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U,总体积20μL。运用该结果从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物34对。优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP标记技术进行狗牙根遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础。 展开更多
关键词 狗牙根 SRAP标记 正交试验 体系优化 引物
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水稻产量分子设计育种研究进展 被引量:6
10
作者 张分云 李宏 +5 位作者 周向阳 王重荣 周德贵 赖穗春 陈立云 周少川 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期663-672,共10页
高产是水稻育种的重要目标。随着水稻基因组测序的广泛使用,功能基因组学和生物信息学的飞速发展,越来越多的水稻产量相关基因或QTL被精确定位甚至克隆,以SNP为代表的新一代分子标记技术为水稻高产分子设计育种奠定了重要基础。本文以... 高产是水稻育种的重要目标。随着水稻基因组测序的广泛使用,功能基因组学和生物信息学的飞速发展,越来越多的水稻产量相关基因或QTL被精确定位甚至克隆,以SNP为代表的新一代分子标记技术为水稻高产分子设计育种奠定了重要基础。本文以水稻产量性状分子生物学为基础,总结水稻产量分子设计育种所成就及阻碍其发展的制约因子,提出实现水稻产量分子设计育种必须建立高通量、高效、便捷的检测平台,从而达到提高水稻产量潜力的最终目的。 展开更多
关键词 水稻产量 SNP标记 分子设计育种
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基于三维标识物的虚实配准方法研究 被引量:4
11
作者 卢韶芳 韩雪 关馨 《吉林大学学报(信息科学版)》 CAS 2017年第3期288-295,共8页
为提高医疗辅助手术中增强现实系统的虚实配准效率,设计了一种基于海明编码的正六面体三维标识物,对标识物进行检测和识别。针对三维标识物的特点,采用POSIT(Pose from Orthography and Scaling with Iterations)算法求得摄像机的位姿,... 为提高医疗辅助手术中增强现实系统的虚实配准效率,设计了一种基于海明编码的正六面体三维标识物,对标识物进行检测和识别。针对三维标识物的特点,采用POSIT(Pose from Orthography and Scaling with Iterations)算法求得摄像机的位姿,并对标识物的尺度进行实验研究,从而得到优化尺度;利用获得的转移矩阵将CT(Computed Tomography)重建并渲染后的虚拟颅骨模型实时显示在真实场景中,最后调整标识物将虚拟模型与真实颅骨模型虚实配准显示。经多组实验验证,设计的三维标识物可在多数情况下识别一个以上标志面,优化后的标识物识别效果良好,可成功地应用在虚实配准实验中,从而证明了这种标识的有效性。 展开更多
关键词 增强现实 虚实配准 标识物设计
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日本沼虾SRAP反应体系正交设计及优化 被引量:10
12
作者 姚建华 傅洪拓 +4 位作者 龚永生 吴滟 何新龙 李慧萍 乔慧 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第B10期122-125,共4页
对影响SRAP反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg2+、引物)4个水平进行正交组合,以建立日本沼虾的SRAP分子标记技术。试验分两步进行:第一步筛选出可有效扩增的引物组合;第二步对筛选出的体系进行优化。结果表明,日本沼虾SRAP反应体系适宜引... 对影响SRAP反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg2+、引物)4个水平进行正交组合,以建立日本沼虾的SRAP分子标记技术。试验分两步进行:第一步筛选出可有效扩增的引物组合;第二步对筛选出的体系进行优化。结果表明,日本沼虾SRAP反应体系适宜引物组合为Me4Em2,最适条件为在25μL的反应体系中,Mg2+、dNTP、Taq酶、引物浓度分别为2.5 mmol/L、0.25 mmol/L、0.64 U/20μL、0.6μmol/L。本研究结果为SRAP分子标记技术在日本沼虾中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 日本沼虾 分子标记 SRAP 正交设计
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蒺藜苜蓿EST-SSRs分布特征及标记的开发 被引量:10
13
作者 屠德鹏 魏臻武 +3 位作者 武自念 雷艳芳 张栋 邱伟伟 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期746-752,共7页
利用蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula)EST数据库开发新的EST-SSRs标记,分析EST-SSRs的分布特征。利用SSRIT软件对NCBI上公布的285 285条蒺藜苜蓿EST序列进行SSR序列的检测,共检测出6 688个SSR序列,分布于6 512个EST中,占整个EST数据库的2.... 利用蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula)EST数据库开发新的EST-SSRs标记,分析EST-SSRs的分布特征。利用SSRIT软件对NCBI上公布的285 285条蒺藜苜蓿EST序列进行SSR序列的检测,共检测出6 688个SSR序列,分布于6 512个EST中,占整个EST数据库的2.28%。其中二核苷酸重复基元出现的频率最高,占总EST-SSRs的34.4%(2 301条),其次是三核苷酸重复基元,占29.6%(1 982条),4~6核苷酸重复基元所占比例均较小。利用Pri mer Premier 5.0随机设计100对EST-SSRs引物,PCR扩增结果表明,85对引物在蒺藜苜蓿RIL群体亲本A17和A20上有清晰的扩增条带,占合成引物总数的85%,在RIL-8群体中检测到29个EST-SSRs引物有多态性,占可扩增引物的34.1%。本研究开发了85个蒺藜苜蓿EST-SSRs新标记。 展开更多
关键词 蒺藜苜蓿 EST-SSRS 引物设计 标记开发
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梨SCoT-PCR反应体系的优化及‘库尔勒香梨’营养系变异鉴定 被引量:10
14
作者 和世玉 牛建新 马建江 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1337-1346,共10页
【目的】建立稳定性好、可重复性强、多态性扩增效果好的‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物优良营养系的鉴定。【方法】以新疆库尔勒农二师29团、33团和34团的‘库尔勒香梨’优良营养系为试材,通过L25(... 【目的】建立稳定性好、可重复性强、多态性扩增效果好的‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物优良营养系的鉴定。【方法】以新疆库尔勒农二师29团、33团和34团的‘库尔勒香梨’优良营养系为试材,通过L25(56)正交试验设计对‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和正交设计助手Ⅱ软件对正交设计扩增结果进行分析,从筛选出的20个引物中随机选择2条引物对24份材料扩增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx对测序结果分析。【结果】优化后的香梨SCoT-PCR 20μL反应分析体系含(2.5 mmol·L^(-1)10×buffer with Mg^(2+))2.5μL、Taq酶1.5 U、引物10μmol·L^(-1)、模板DNA25 ng、dNTPs 1.6 mmol·L^(-1)。反应程序为94℃预变性4 min;94℃变性1 min,52℃退火45 s,72℃延伸1 min,30次循环;72℃延伸8 min。对测序结果分析表明:扩增产物的大小为200~2 000 bp,23份材料与对照材料存在单碱基的缺失,利用单碱基变异可以区分出24份材料,说明18份优良营养系材料发生了遗传变异。【结论】SCoT分子标记可用于梨树营养系变异的鉴定。 展开更多
关键词 '库尔勒香梨’ SCoT分子标记 正交设计 体系优化 优良营养系
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菊花SSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量:11
15
作者 李亚慧 黄丛林 董然 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第13期127-131,共5页
为快速确定菊花SSR反应体系,利用正交实验设计L16(45)对菊花基因组SSR-PCR反应体系的5个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶)在4个水平上进行正交设计,筛选出适合菊花的最佳SSR-PCR反应体系,进一步利用单因素完全随机试验筛选各反... 为快速确定菊花SSR反应体系,利用正交实验设计L16(45)对菊花基因组SSR-PCR反应体系的5个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶)在4个水平上进行正交设计,筛选出适合菊花的最佳SSR-PCR反应体系,进一步利用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平。结果表明:建立菊花基因组DNA SSR-PCR反应体系为25μL:60ng模板DNA、2.0mmol/L Mg2+、0.1mmol/L dNTP、0.3μmol/L引物、1UTaq酶。并对菊花引物进行梯度退火试验,其最佳退火温度在53.1℃;扩增程序是:95℃预变性5min;32个循环的94℃变性50s、53.1℃退火50s、72℃延伸50s;72℃延伸8min,4℃保存。该体系的建立为今后菊花SSR分析奠定了基础。 展开更多
关键词 菊花 SSR标记 正交设计 反应体系优化
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航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系的优化以及引物的筛选 被引量:9
16
作者 范润钧 陈本建 +2 位作者 邓波 柴小琴 张蕴薇 《草原与草坪》 CAS 2010年第2期22-26,32,共6页
航天育种的变异频率高、变异幅度大、有益变异多、稳定性强,优势明显。依据正交试验设计原理,设计了用正交试验和细调正交试验来确定航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg2+4种因素对航天搭载紫... 航天育种的变异频率高、变异幅度大、有益变异多、稳定性强,优势明显。依据正交试验设计原理,设计了用正交试验和细调正交试验来确定航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg2+4种因素对航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系进行了优化,得到适合航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR最佳反应体系,即25μL的反应体系中含有dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA聚合酶2U、引物0.7μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、以及10×buffer和60 ng模板DNA。在试验确定最佳反应体系基础上,对17对SSR引物进行筛选,选出6对扩增条带信号强、背景清晰的引物。 展开更多
关键词 航天搭载紫花苜蓿 SSR标记 正交试验 体系优化 引物
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风暴潮警戒潮位标志物设计研究 被引量:2
17
作者 贾旭飞 张冉 +2 位作者 王立贵 常宇 孟超 《海岸工程》 2016年第2期66-78,共13页
风暴潮警戒潮位是有关海洋预报部门发布预警信息及指导政府部门进行防灾减灾决策的重要参考,通过设置风暴潮警戒潮位标志物是进行预警的有效途径。风暴潮警戒潮位标志物是将沿海警戒潮位值按蓝色、黄色、橙色和红色警戒潮位进行直观化,... 风暴潮警戒潮位是有关海洋预报部门发布预警信息及指导政府部门进行防灾减灾决策的重要参考,通过设置风暴潮警戒潮位标志物是进行预警的有效途径。风暴潮警戒潮位标志物是将沿海警戒潮位值按蓝色、黄色、橙色和红色警戒潮位进行直观化,更便于沿海地区直接了解风暴潮警戒潮位情况。通过对风暴潮警戒潮位标志物进行科学合理的设计,可以节省建设成本,提高警戒潮位的辨识度,为沿海的风暴潮防灾减灾工作提供了更好的技术支持,减少海洋灾害对沿海地区带来的损失。 展开更多
关键词 风暴潮 警戒潮位 标志物 设计
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正交设计优化秋海棠属植物SRAP-PCR反应体系及引物筛选 被引量:3
18
作者 宣继萍 郭忠仁 +1 位作者 徐菲 郑玉红 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1423-1425,共3页
相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified polymophism,SRAP)是2001年由Li和Quiros开发的一种基于PCR的新型分子标记技术[1]。与RAPD、AFLP、SSR等标记方法相比,SRAP具有简单、高效、高共显性、重复性好、易测序等优点,已经用... 相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified polymophism,SRAP)是2001年由Li和Quiros开发的一种基于PCR的新型分子标记技术[1]。与RAPD、AFLP、SSR等标记方法相比,SRAP具有简单、高效、高共显性、重复性好、易测序等优点,已经用于许多植物的种子纯度检测、杂种鉴定、遗传多样性分析、指纹图谱及遗传连锁图的构建等[2-8]。 展开更多
关键词 秋海棠属 SRAP标记 正交试验设计 体系优化 引物筛选
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观赏海棠SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量:10
19
作者 楚爱香 汤庚国 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第12期1394-1397,共4页
以观赏海棠叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶5种因素4个水平,对观赏海棠的SRAP反应体系进行了研究,建立了观赏海棠的SRAP最佳反应体系。结果表明,观赏海棠SRAP-PCR最佳反应体系为:Mg2+2.50 m... 以观赏海棠叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶5种因素4个水平,对观赏海棠的SRAP反应体系进行了研究,建立了观赏海棠的SRAP最佳反应体系。结果表明,观赏海棠SRAP-PCR最佳反应体系为:Mg2+2.50 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.4μmol·L-1、Taq DNA聚合酶2U、10 ng模板DNA,总体积为25μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以dNTP浓度的影响最大,模板浓度的影响最小。运用该体系对观赏海棠4个种进行验证,证明该体系稳定可靠,并从70个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行观赏海棠的分子遗传学研究提供了科学的依据。 展开更多
关键词 观赏海棠 序列相关扩增多态性分子标记 正交试验设计 体系优化 引物筛选
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利用正交设计优化异色瓢虫SRAP-PCR反应体系 被引量:10
20
作者 关桦楠 迟德富 +1 位作者 宇佳 董婧 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期156-161,共6页
利用正交设计L16(4^5)对异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)SRAP-PCR反应体系的5个因素(Taq 酶、Mg^2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DIS和MINITAB软件进行分析,建立了异色瓢虫SRAP-PCR反应的最... 利用正交设计L16(4^5)对异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)SRAP-PCR反应体系的5个因素(Taq 酶、Mg^2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DIS和MINITAB软件进行分析,建立了异色瓢虫SRAP-PCR反应的最佳体系,即在20止体系中模板50—100ng、引物0.25μmol/L、dNTPs 0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、Mg^2+0.375~0.625mmol/L。并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为50.3℃。这一优化系统的建立,为今后利用SRAP技术进行瓢虫遗传图谱的构建、多态性分析和基因定位奠定了技术基础。 展开更多
关键词 异色瓢虫 SRAP 正交设计 分子标记 天敌昆虫
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